转导野生型p53的K562细胞出现生长抑制和凋亡 被引量：3

1

作者 陈德喜 王申五 +2 位作者 曹国栋 马丽萍 潘秀英 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1998年第3期224-226,共3页

把重组有编码野生型p53的逆转录病毒载体转导到p53蛋白缺失的K562细胞,以观察野生型p53蛋白在K562细胞表达后对K562细胞增殖和凋亡的影响。应用RT-PCR和Western印迹杂交方法检测K562细胞p53表达,应用流式细胞仪计数检测细胞的增殖,采用... 把重组有编码野生型p53的逆转录病毒载体转导到p53蛋白缺失的K562细胞,以观察野生型p53蛋白在K562细胞表达后对K562细胞增殖和凋亡的影响。应用RT-PCR和Western印迹杂交方法检测K562细胞p53表达,应用流式细胞仪计数检测细胞的增殖,采用梯形DNA和细胞形态学方法检测细胞凋亡变化。研究结果表明:感染pLXSN-p53病毒24小时后,K562细胞p53表达阳性,K562-p53细胞的生长受到抑制,少数细胞进入凋亡状态。结论提示,野生型p53可促进p53表达阴性的K562细胞生长抑制与凋亡。 展开更多

关键词 K562细胞 细胞凋亡 P53基因 PLXSN

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化学发光免疫分析法测定血清甲状腺素 被引量：6

2

作者 刘明泽 王子健 +2 位作者 王虹 杨晓林 马梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期178-181,共4页

建立了以鲁米诺、过氧化氢作为发光底物，辣根过氧化物酶作为标记酶的化学发光免疫分析法，用于血清中甲状腺素水平测定，此法灵敏度为４．６ｎｇ／ｍｌ，不同水平Ｔ＿４批内变异系数为４．５％～７．８％，批间变异系数为７．０％～７... 建立了以鲁米诺、过氧化氢作为发光底物，辣根过氧化物酶作为标记酶的化学发光免疫分析法，用于血清中甲状腺素水平测定，此法灵敏度为４．６ｎｇ／ｍｌ，不同水平Ｔ＿４批内变异系数为４．５％～７．８％，批间变异系数为７．０％～７．４％。加入Ｔ＿４５０ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ、２００ｎｇ／ｍｌ，回收率分别为１０５％、１０１％、１０４％，与放免法有较好的相关性，ｒ＝０．８３１，Ｐ＜０．００１，关系式为Ｔ４－ＣＬＩＡ＝０．９１５Ｔ４－ＲＩＡ＋２７．１（ｎｇ／ｍｌ），ｎ＝２６。　此法操作简便，检测速度快，适合于临床应用。 展开更多

关键词 化学发光 免疫分析法 甲状腺素

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视网膜视细胞的成片移植 被引量：2

3

作者 刘世全 王薇 +4 位作者 张惠蓉 张薇 夏英杰 许艺民 王申五 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2001年第4期315-318,共4页

目的　　探索用准分子激光切削技术制备视网膜单层视细胞植片，经内入路视网膜下腔的单层视细胞成片移植。方法用准分子激光对大鼠视网膜进行切削，制取单层视细胞植片，此后，按内入路手术方法进行了兔视网膜下腔的异种移植。结果　切... 目的　　探索用准分子激光切削技术制备视网膜单层视细胞植片，经内入路视网膜下腔的单层视细胞成片移植。方法用准分子激光对大鼠视网膜进行切削，制取单层视细胞植片，此后，按内入路手术方法进行了兔视网膜下腔的异种移植。结果　切削后所得视细胞植片由单层视细胞组成，结构完整，包括外丛状层、外核层和外节层；视细胞植片经明胶包埋后被准确植入宿主视网膜下腔中，移植术后第１，２天宿主视网膜未能复位，呈脱离状态，移植物没能与视网膜色素上皮层相贴；移植后１０天，宿主视网膜复位，视细胞移植片平铺于宿主视网膜下腔中，植片视细胞外节与宿主视网膜色素上皮层相贴，未见明显免疫排异现象。结论　　准分子激光制备单层视细胞植片方法简单、可行；初步观察到内入路单层视细胞成片移植后，视细胞植片能够在宿主视网膜下腔中以正常生理位置存活；视网膜下腔为理想的视网膜移植的受位。 展开更多

关键词 视网膜移植 视细胞植片 准分子激光 视网膜下腔 动物实验

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介绍一种PCR鉴定重组体DNA插入方向及转染的方法 被引量：2

4

作者 曹国栋 王申五 陈德喜 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第6期760-762,共3页

介绍一种用ＰＣＲ方法鉴定重组体中插入片段的正、反连接方向及其是否导入细胞的方法．其原理是选择紧靠载体克隆位点上游的一段序列为上游引物，以扩增插入序列的上、下游引物分别作为下游引物进行ＰＣＲ．载体上游引物加插入序列的上... 介绍一种用ＰＣＲ方法鉴定重组体中插入片段的正、反连接方向及其是否导入细胞的方法．其原理是选择紧靠载体克隆位点上游的一段序列为上游引物，以扩增插入序列的上、下游引物分别作为下游引物进行ＰＣＲ．载体上游引物加插入序列的上游引物可扩出产物者为反向连接；加插入序列的下游引物可扩出产物者为正向连接．该法简单、快速，可广泛用于鉴定重组体中插入片段的正、反连接方向及基因转染时外源基因是否导入细胞内． 展开更多

关键词 重组术 鉴定 转染 PCR 插入方向

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腺病毒介导的LacZ基因对视网膜色素上皮细胞的转导 被引量：2

5

作者 刘世全 王薇 +2 位作者 张惠蓉 张薇 王申五 《眼科研究》 CSCD 1999年第2期101-103,共3页

目的探索腺病毒载体用作眼科基因治疗以及视网膜移植物标记的可行性。方法用腺病毒介导ＬａｃＺ基因转导视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞；ＭＴＴ法测定毒性影响。结果腺病毒滴度为４．６×１０６时可使ＲＰＥ细胞１００％感染；Ｌａ... 目的探索腺病毒载体用作眼科基因治疗以及视网膜移植物标记的可行性。方法用腺病毒介导ＬａｃＺ基因转导视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞；ＭＴＴ法测定毒性影响。结果腺病毒滴度为４．６×１０６时可使ＲＰＥ细胞１００％感染；ＬａｃＺ基因表达阳性细胞整个呈蓝色；腺病毒转导与未转导的ＲＰＥ细胞间ＯＤ５７０值无显著性差异。结论就ＲＰＥ细胞而言，腺病毒载体具有很高的转导效率、安全可靠，可用于它的基因治疗。 展开更多

关键词 腺病毒 基因治疗 视网膜色素上皮 LACZ基因

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胶体金标记单抗诊断包虫病初探 被引量：7

6

作者 林文玉 周学良 +1 位作者 曹和洵 于继岗 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1996年第3期64-64,共1页

胶体金标记单抗诊断包虫病初探林文玉，周学良，曹和洵，于继岗胶体金是新近发展的新一代标记物。由于胶体金制备方法简单，能和多种蛋白质交联，标记物稳定，影响因素少以及灵敏度高而发展很快，胶体金标记技术主要用于组织切片的免疫... 胶体金标记单抗诊断包虫病初探林文玉，周学良，曹和洵，于继岗胶体金是新近发展的新一代标记物。由于胶体金制备方法简单，能和多种蛋白质交联，标记物稳定，影响因素少以及灵敏度高而发展很快，胶体金标记技术主要用于组织切片的免疫组织化学染色。针对我国西北地区人兽... 展开更多

关键词 包虫病 诊断 胶体金标记

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逆转录病毒介导p16基因转移引起K562白血病细胞系的增殖抑制 被引量：1

7

作者 武莎莎 曹国栋 +2 位作者 陈德喜 潘秀英 王申五 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2000年第2期114-117,共4页

关键词 肿瘤抑制基因 P16 逆转录病毒 白血病细胞系

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降钙素基因相关肽基因转导对内皮损伤兔髂动脉血管环舒缩反应的影响 被引量：1

8

作者 金晓峰 徐成斌 +2 位作者 张彤 崔俊峰 王申五 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第12期1074-1077,共4页

目的：探讨降钙素基因相关肽（ ＣＧＲＰ） 基因转导兔动脉内膜对其舒缩功能的影响。方法：利用逆转录病毒载体，将ＣＧＲＰ 基因在体转导兔髂动脉内膜，取动脉环做灌流试验，研究其对血管活性物质的反应。结果：转基因血管内皮细胞的... 目的：探讨降钙素基因相关肽（ ＣＧＲＰ） 基因转导兔动脉内膜对其舒缩功能的影响。方法：利用逆转录病毒载体，将ＣＧＲＰ 基因在体转导兔髂动脉内膜，取动脉环做灌流试验，研究其对血管活性物质的反应。结果：转基因血管内皮细胞的增殖较对照组活跃，动脉的内皮依赖性舒张反应较强，１０ －６ｍｏｌ／Ｌ 的乙酰胆碱引起的舒张为３３－０８ ％ ±１０－０１ ％ ，对照组为－ １７－５７ ％ ±５－５９ ％ ，Ｐ＜ ０－０１ 。结论：ＣＧＲＰ 基因转导损伤的免髂动脉内膜可促进内皮细胞增殖，并使动脉内皮依赖性舒张反应改善。 展开更多

关键词 动脉舒缩功能 动脉内皮损伤 CGRP

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化学发光杂交进行菌落克隆的原位筛选 被引量：4

9

作者 陈德喜 王申五 张宝春 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第5期537-539,共3页

用化学发光杂交试剂代替３２Ｐ进行菌落原位筛选重组Ｐ５３阳性克隆，可减少同位素的放射性损害和污染及半衰期短等缺点．本方法实验周期短、特异性可和同位素相当，可用于重组目的基因的原位杂交筛选．

关键词 菌落 克隆 原位杂交 化学发光

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用一种快速RT-PCR法分析培养细胞的基因表达水平 被引量：4

10

作者 陈德喜 魏妤 王申五 《北京医科大学学报》 CSCD 1997年第3期280-281,共2页

关键词 细胞培养 基因表达 PCR

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腺病毒介导的LacZ基因在乳腺癌细胞中的表达 被引量：1

11

作者 颜世庆 林文玉 +1 位作者 王申五 孙卫东 《北京医科大学学报》 CSCD 1997年第3期218-220,共3页

目的：观察腺病毒介导的基因转移在乳腺癌细胞的转导效率及腺病毒转导对细胞生长的影响。方法：腺病毒介导的基因转导。结果：在病毒的重复感染率（MOI）为500时细胞的转导效率达到100％；不同数量的病毒转导乳腺癌细胞对癌细胞的生长... 目的：观察腺病毒介导的基因转移在乳腺癌细胞的转导效率及腺病毒转导对细胞生长的影响。方法：腺病毒介导的基因转导。结果：在病毒的重复感染率（MOI）为500时细胞的转导效率达到100％；不同数量的病毒转导乳腺癌细胞对癌细胞的生长没有明显影响。低温冻存可使病毒的感染性明显下降。结论：腺病毒介导的基因转移在乳腺癌细胞中有高的转导效率，而病毒载体本身对细胞的生长没有影响，可用作乳癌特异药物前体酶激活基因治疗的基因转移方法。 展开更多

关键词 基因转移 腺病毒 基因疗法 乳腺肿瘤

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反义bcl-2-正义bcl-Xs逆转录病毒重组体的构建

12

作者 曹国栋 王申五 陈德喜 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1998年第2期137-139,共3页

构建一种反义抗细胞凋亡基因-正义促细胞凋亡基因相连结的新型表达质粒,以探讨其对细胞凋亡的影响。用分子克隆方法,成功地构建了反义bcl-2-正义bcl-Xs逆转录病毒重组体,初步结果显示此重组体比反义bcl-2或正义bcl-Xs逆转录病毒重组体... 构建一种反义抗细胞凋亡基因-正义促细胞凋亡基因相连结的新型表达质粒,以探讨其对细胞凋亡的影响。用分子克隆方法,成功地构建了反义bcl-2-正义bcl-Xs逆转录病毒重组体,初步结果显示此重组体比反义bcl-2或正义bcl-Xs逆转录病毒重组体具有更强的促细胞凋亡作用。该新型表达质粒的构建为探讨细胞凋亡提供了新工具,新思路。 展开更多

关键词 逆转录病毒载体 细胞凋亡 bcl—2 bcl—Xs

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直接从外周血或骨髓进行定量RT－PCR

13

作者 颜世庆 白桃 王申五 《北京医科大学学报》 CSCD 1996年第1期58-58,共1页

直接从外周血或骨髓进行定量ＲＴ－ＰＣＲ北京医科大学人民医院中心实验室颜世庆，白桃，王申五ＰＣＲ方法是基因表达定量和定性检测的简便方法，外周血和骨髓是临床检测和遗传研究中常用标本。通常是利用白细胞分离液从全血中制备白细... 直接从外周血或骨髓进行定量ＲＴ－ＰＣＲ北京医科大学人民医院中心实验室颜世庆，白桃，王申五ＰＣＲ方法是基因表达定量和定性检测的简便方法，外周血和骨髓是临床检测和遗传研究中常用标本。通常是利用白细胞分离液从全血中制备白细胞，然后提取白细胞总ＲＮＡ，检测基... 展开更多

关键词 聚合酶链反应 外周血 骨髓 CDNA 合成

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复制缺陷型腺病毒AdE1CMV-NGF的制备

14

作者 刘世全 张薇 +4 位作者 贾东辉 王申五 郑姝颖 王薇 张惠蓉 《首都医科大学学报》 CAS 2001年第1期24-26,共3页

通过DNA重组技术 ,经亚克隆和克隆过程构建分泌表达型重组腺病毒穿梭质粒pAdE1CMV NGF ;制备完整高纯度辅助病毒 pJM1 7。将 pAdE1CMV NGF和 pJM1 7在 2 93细胞中同源重组 ,获得复制缺陷型腺病毒重组体AdE1CMV NGF。梯度系列稀释测得滴... 通过DNA重组技术 ,经亚克隆和克隆过程构建分泌表达型重组腺病毒穿梭质粒pAdE1CMV NGF ;制备完整高纯度辅助病毒 pJM1 7。将 pAdE1CMV NGF和 pJM1 7在 2 93细胞中同源重组 ,获得复制缺陷型腺病毒重组体AdE1CMV NGF。梯度系列稀释测得滴度为 4 .6× 1 0 10 PFU/mL。 展开更多

关键词 NGF基因 腺病毒载体 基因转移 同源重组 基因治疗 AdE1CMV-NGF

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