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一种高效稳定的微生物总RNA提取方法 被引量:6
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作者 吴思琪 宋静颐 +5 位作者 秦倩 张策 金君华 谢远红 刘慧 张红星 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期517-523,共7页
本研究通过对玻璃珠-酚仿RNA提取方法进行改进优化,实现对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌这3类微生物RNA高效稳定的提取。结果表明,玻璃珠-酚仿提取法能有效提取的RNA最低菌体细胞量为1×107个,远低于试验所选商业化试剂盒所需... 本研究通过对玻璃珠-酚仿RNA提取方法进行改进优化,实现对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌这3类微生物RNA高效稳定的提取。结果表明,玻璃珠-酚仿提取法能有效提取的RNA最低菌体细胞量为1×107个,远低于试验所选商业化试剂盒所需细胞量。以1×107个细胞量为例,利用Beadbeater仪破碎30 s,使用直径100μm的玻璃珠破碎提取得到的细菌RNA浓度显著高于使用直径500μm的玻璃珠提取的。使用2种直径的玻璃珠所得酵母菌RNA浓度无显著性差异。在直径100μm的条件下,破碎30 s即可保证RNA的高效提取,对于长双歧杆菌、大肠杆菌和酵母菌,破碎时间长达150 s也不会引起RNA降解。本法所提RNA的A260/A280为1.96~2.10,A260/A230为2.03~2.44,浓度和纯度均优于试验所选商业化试剂盒所提的RNA。 展开更多
关键词 微生物 RNA提取 玻璃珠-酚仿
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基于抗体-适配体夹心生物传感器检测大肠杆菌O157:H7 被引量:4
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作者 侯炜辰 叶柯 +4 位作者 李洁 张洋子 许文涛 朱龙佼 李相阳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期81-89,共9页
大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7)是一种重要的与公共卫生相关的食源性病原体。抗体分子是体液免疫应答中最重要的效应分子,具有多种生物学活性,最主要的生物学功能是与相应抗原特异性结合。适配体是体外合成的较短DNA序列,... 大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7)是一种重要的与公共卫生相关的食源性病原体。抗体分子是体液免疫应答中最重要的效应分子,具有多种生物学活性,最主要的生物学功能是与相应抗原特异性结合。适配体是体外合成的较短DNA序列,可通过识别特定区域和靶标特异性结合。利用抗体和适配体的特异性识别功能及免疫磁珠的捕获作用和磁分离,并通过多克隆抗体和裁剪得到的适配体搭建生物传感器,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)可以实现对靶标在(8×10^(3))-(8×10^(6))CFU/mL范围内的定量检测,检测限为800 CFU/mL。 展开更多
关键词 多克隆抗体 适配体 裁剪 免疫磁珠 大肠杆菌O157:H7
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液质联用法检测粮谷制品中4种单端孢霉烯类真菌毒素 被引量:3
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作者 张家宁 丁轲 +2 位作者 郭思梦 韩涛 陈湘宁 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第12期153-157,162,共6页
建立粮谷制品中4种单端孢霉烯类真菌毒素的液相色谱—质谱联用分析方法。样品经乙腈/水溶液(84︰16,v/v)提取后用MycoSep?226多功能柱净化,Agilent ZORBAX Bonus-RP色谱柱分离,液相色谱—质谱联用(LC-MS/MS)测定。结果表明,样... 建立粮谷制品中4种单端孢霉烯类真菌毒素的液相色谱—质谱联用分析方法。样品经乙腈/水溶液(84︰16,v/v)提取后用MycoSep?226多功能柱净化,Agilent ZORBAX Bonus-RP色谱柱分离,液相色谱—质谱联用(LC-MS/MS)测定。结果表明,样品中4种单端孢霉烯类真菌毒素在各自的线性范围内线性关系良好,相关系数均不低于0.995,检出限为2~5 μg/kg,3个加标水平下平均回收率为73.19%~107.39%,相对标准偏差为1.46%~13.24%。表明该方法净化效果好、灵敏度高,适用于同时检测单种粮谷制品中4种单端孢霉烯类真菌毒素的残留量。 展开更多
关键词 单端孢霉烯类真菌毒素 液相色谱-串联质谱 粮谷制品
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酸枣仁微量生物碱成分的筛查方法研究 被引量:5
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作者 胡彦周 丁轲 +1 位作者 韩涛 陈湘宁 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1165-1170,共6页
为了准确、迅速地筛查并确定酸枣仁中微量生物碱成分,运用含氮有机物(生物碱)分析包中的色谱柱建立酸枣仁生物碱成分的高效液相色谱在线分离方法,然后利用Mass Works分子识别软件和LC-ESI-MS/MS对在线分离的生物碱成分进行确认,共筛查到... 为了准确、迅速地筛查并确定酸枣仁中微量生物碱成分,运用含氮有机物(生物碱)分析包中的色谱柱建立酸枣仁生物碱成分的高效液相色谱在线分离方法,然后利用Mass Works分子识别软件和LC-ESI-MS/MS对在线分离的生物碱成分进行确认,共筛查到3种阿朴芬类生物碱:酸枣仁碱K(C_(17)H_(19)NO_3)、山矾碱(C_(17)H_(17)NO_2)和N-甲基巴婆碱(C_(18)H_(19)NO_2);2种环肽类生物碱:酸枣仁碱F(C_(31)H_(42)N_4O_5)和酸枣仁碱A(C_(31)H_(42)N_4O_4);还有一对同分异构体阿朴芬生物碱:木兰花碱和酸李碱(C_(20)H_(24)NO_4)有待进一步确定。 展开更多
关键词 酸枣仁 生物碱 MassWorks LC-ESI-MS/MS
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品质因子和益生菌对草莓品质和贮藏的影响 被引量:2
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作者 贾宇 董晨阳 +6 位作者 周绪宝 谢远红 金君华 李浩 庞博 田炜玮 张红星 《农产品加工》 2019年第13期12-15,共4页
运用品质因子和EM菌肥对草莓生长进行干预,通过代替传统的化学肥料来改善草莓的营养品质,降低草莓采后的腐烂率,一定程度上延长贮藏货架期,使草莓尽可能持续保鲜。结果表明,经过品质因子和EM菌肥处理的草莓,在6d的贮藏期间,腐烂率下降20... 运用品质因子和EM菌肥对草莓生长进行干预,通过代替传统的化学肥料来改善草莓的营养品质,降低草莓采后的腐烂率,一定程度上延长贮藏货架期,使草莓尽可能持续保鲜。结果表明,经过品质因子和EM菌肥处理的草莓,在6d的贮藏期间,腐烂率下降20.30%,营养品质处理组与对照组相比,除可溶性糖含量的表征没有显著性差异外,其余表征均呈现显著性差异(p<0.05)。进一步证实品质因子和EM菌肥对草莓的品质和贮藏具有一定的影响作用。 展开更多
关键词 草莓 果实 品质因子 品质 贮藏
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不同净化柱处理对小麦粉中4种镰刀菌毒素的净化效果 被引量:4
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作者 张家宁 丁轲 +1 位作者 韩涛 陈湘宁 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第14期316-322,共7页
比较MycoSep~?226多功能净化柱、DZT MS-PREP免疫亲和柱和实验室制备聚苯乙烯-二乙烯苯树脂免疫亲和柱在检测小麦粉中4种镰刀菌毒素(玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素、HT-2毒素)过程中的前处理效果。选择MycoSep~?226多功能... 比较MycoSep~?226多功能净化柱、DZT MS-PREP免疫亲和柱和实验室制备聚苯乙烯-二乙烯苯树脂免疫亲和柱在检测小麦粉中4种镰刀菌毒素(玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素、HT-2毒素)过程中的前处理效果。选择MycoSep~?226多功能净化柱、DZT MS-PREP免疫亲和柱和实验室制备聚苯乙烯-二乙烯苯树脂免疫亲和柱,通过不同的提取和前处理方法,以及建立高效液相色谱-串联质谱检测法,对小麦粉中的4种镰刀菌毒素进行测定。DZT MS-PREP免疫亲和柱处理小麦粉样品所得的回收率为88.01%~107.31%,相对标准偏差为1.09%~14.42%;聚苯乙烯-二乙烯苯树脂免疫亲和柱的回收率为70.05%~112.80%,相对标准偏差为3.42%~12.25%;MycoSep~?226多功能净化柱的回收率为69.42%~111.12%,相对标准偏差为1.46%~13.24%。免疫亲和柱具有重复利用,有机溶剂耗用量少、特异性强等显著优势,且聚苯乙烯-二乙烯苯树脂免疫亲和柱为新载体免疫亲和柱的制备提供了依据。 展开更多
关键词 镰刀菌毒素 高效液相色谱-串联质谱 MycoSep^(■)226多功能净化柱 聚苯乙烯-二乙烯苯树脂免疫亲和柱 DZT MS-PREP免疫亲和柱
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以聚苯乙烯-二乙烯苯为载体的多目标免疫亲和柱的制备及应用 被引量:1
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作者 张家宁 丁轲 +1 位作者 韩涛 陈湘宁 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第20期172-176,共5页
选取3 种不同聚苯乙烯-二乙烯苯基材,通过硝基化、氨基化、活化、偶联抗体等步骤制备免疫亲和柱,用于4 种镰刀菌毒素(玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素、HT-2毒素)的同时纯化,并将3 种基材制备的免疫亲和柱进行比较.以Clean... 选取3 种不同聚苯乙烯-二乙烯苯基材,通过硝基化、氨基化、活化、偶联抗体等步骤制备免疫亲和柱,用于4 种镰刀菌毒素(玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素、HT-2毒素)的同时纯化,并将3 种基材制备的免疫亲和柱进行比较.以Cleanert PS型聚苯乙烯-二乙烯苯为基材制备的免疫亲和柱与抗体偶联的偶联率为97.64%,且其空白柱对样品的吸附作用最小,3 个加标水平下的回收率为66.16%~112.80%,相对标准偏差为3.09%~12.25%,可应用于实际样品的纯化. 展开更多
关键词 聚苯乙烯-二乙烯苯 免疫亲和柱 镰刀菌毒素
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多香果粉对肉丸中N-亚硝胺的抑制作用 被引量:6
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作者 朱倩颖 王宗义 +2 位作者 高哲 丁轲 韩涛 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第20期62-67,共6页
为降低肉制品中N-亚硝胺的含量,探究不同浓度的多香果粉对肉丸中挥发性N-亚硝胺的影响,以及与亚硝酸盐残留量、脂肪氧化值(TBARS值)、挥发性盐基氮(TVB-N值)、p H 4个指标的相关性。结果表明,利用气相色谱串联质谱法(GC-MS/MS)测定了肉... 为降低肉制品中N-亚硝胺的含量,探究不同浓度的多香果粉对肉丸中挥发性N-亚硝胺的影响,以及与亚硝酸盐残留量、脂肪氧化值(TBARS值)、挥发性盐基氮(TVB-N值)、p H 4个指标的相关性。结果表明,利用气相色谱串联质谱法(GC-MS/MS)测定了肉丸中8种挥发性N-亚硝胺,仅二甲基亚硝胺(NDMA)、亚硝基哌啶(NPIP)、亚硝基吡咯烷(NPYR)被检出,在5 d冷藏中0.02%、0.04%、0.08%多香果粉添加对肉丸中N-亚硝胺的含量具有降低作用,对NDMA、NPIP、NPYR抑制率最高分别为93.1%、80.3%、60%,多香果粉最高抑制的添加浓度为0.08%。添加多香果粉后,肉制品中NDMA、NPIP、NPYR与亚硝酸盐残留量、TBARS、TVB-N等指标相关性发生了改变,NDMA与TVB-N相关性上升、NPIP与TBARS相关性上升、NPYR与亚硝酸盐相关性上升、N-亚硝胺总量与TBARS和TVB-N相关性上升。 展开更多
关键词 多香果 N-亚硝胺 肉丸 贮藏
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抗菌适配体的筛选与应用进展 被引量:1
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作者 李典典 粟元 +2 位作者 李洁 许文涛 朱龙佼 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期126-132,共7页
现代医学及分子生物技术当前所面临的一个重大挑战是探索新的治疗方案来应对细菌感染。因多重耐药细菌的比率不断增加,同时结合抗菌药物的功效、研发进程及成本,更加重了细菌感染治疗形势的严峻性。针对这一形势,最有希望的解决方案是... 现代医学及分子生物技术当前所面临的一个重大挑战是探索新的治疗方案来应对细菌感染。因多重耐药细菌的比率不断增加,同时结合抗菌药物的功效、研发进程及成本,更加重了细菌感染治疗形势的严峻性。针对这一形势,最有希望的解决方案是寻找抗菌药物的替代来源,而经SELEX筛选获得的抗菌适配体是极具潜力的替代品。抗菌适配体可通过干扰细菌生化进程、控制细菌菌膜形成、阻断毒素侵染等机制降低细菌的致病能力。目前,基于适配体的抗菌策略主要包括单一适配体抑菌、适配体复合纳米材料、适配体复合抗生素等。本文总结了关于常见致病菌细胞或其相关成分适配体的筛选策略,并从适配体的裁剪修饰、抑菌机制及其在抑菌治疗中的应用等方面展开论述,展望了基于抗菌适配体的抑菌策略在感染治疗中的发展前景,旨在为致病菌引发的感染性疾病的诊治提供新思路。 展开更多
关键词 抗菌适配体 筛选 抑菌机制 治疗
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天然Mozzarella干酪和再制Mozzarella干酪理化特性和功能特性的比较 被引量:12
10
作者 李开鑫 纪晓宇 王芳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第13期55-60,共6页
对天然Mozzarella干酪和再制Mozzarella干酪的理化特性(蛋白质、脂肪和水分质量分数及p H值)和功能特性(质构特性、拉伸性、熔化性、油脂析出性和流变特性)进行分析。结果表明:天然Mozzarella干酪的蛋白质量分数显著高于再制Mozzarella... 对天然Mozzarella干酪和再制Mozzarella干酪的理化特性(蛋白质、脂肪和水分质量分数及p H值)和功能特性(质构特性、拉伸性、熔化性、油脂析出性和流变特性)进行分析。结果表明:天然Mozzarella干酪的蛋白质量分数显著高于再制Mozzarella干酪,水分质量分数和p H值显著低于再制Mozzarella干酪,脂肪质量分数随干酪品牌的不同存在差异;天然Mozzarella干酪的硬度、拉伸性、熔化性和油脂析出性都显著高于再制Mozzarella干酪;动态温度扫描显示天然Mozzarella干酪和再制Mozzarella干酪的损耗角正切都随着温度的升高呈现先增加后降低的趋势,天然Mozzarella干酪的损耗角正切在50~60℃时达到1,再制Mozzarella干酪的损耗角正切始终低于1。研究发现天然Mozzarella干酪更适宜作为制作比萨、焗饭等需要焙烤食品的原料,再制Mozzarella干酪可以应用于三明治等不需要焙烤的食品中。 展开更多
关键词 干酪 理化特性 功能特性
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高效抑制大肠埃希氏菌的芽孢杆菌的发酵培养基及发酵条件优化 被引量:4
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作者 张子豪 康建依 +5 位作者 谢远红 易欣欣 刘慧 侯爽 马祎 高秀芝 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第19期114-118,共5页
本研究从土壤中筛选对大肠埃希氏菌具有高抑菌活性的芽孢杆菌,采用单因素实验与正交试验,对发酵培养基及发酵条件进行优化。结果表明,经筛选得到一株对大肠埃希氏菌具有显著抑菌活性的芽孢杆菌G3E,经菌种鉴定为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(B... 本研究从土壤中筛选对大肠埃希氏菌具有高抑菌活性的芽孢杆菌,采用单因素实验与正交试验,对发酵培养基及发酵条件进行优化。结果表明,经筛选得到一株对大肠埃希氏菌具有显著抑菌活性的芽孢杆菌G3E,经菌种鉴定为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum); G3E表达抑菌物质的最佳发酵培养基配方为:淀粉10 g/L、氯化钙4 g/L、酵母浸出物4 g/L、胰蛋白胨4 g/L、尿素2 g/L;最佳发酵条件为:发酵温度40℃,发酵时间40 h,pH=7.0,此时,抑菌圈直径可达(25.5±0.5) mm。 展开更多
关键词 解淀粉芽孢杆菌 发酵培养基 发酵条件 抑菌活性 大肠埃希氏菌
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