【目的】旨在建立1种定量检测狸猫支原体的荧光定量PCR检测方法。【方法】比对狸猫支原体16S rRNA基因组序列,选取保守区域片段合成质粒P400,设计与验证1对特异性引物后,以10倍梯度浓度的P400质粒为模板,应用SYBR Green I荧光染料进行...【目的】旨在建立1种定量检测狸猫支原体的荧光定量PCR检测方法。【方法】比对狸猫支原体16S rRNA基因组序列,选取保守区域片段合成质粒P400,设计与验证1对特异性引物后,以10倍梯度浓度的P400质粒为模板,应用SYBR Green I荧光染料进行荧光定量PCR扩增,绘制标准曲线与回归方程,之后进行特异性、敏感性、重复性检测以及临床样品检测。【结果】建立了1种定量检测狸猫支原体的荧光定量PCR检测方法,该方法对衣原体等常见猫上呼吸道DNA病原无非特异扩增,其检测灵敏度为10拷贝,标准曲线回归方程的决定系数为0.9998,重复性检测的变异系数小于5%。该方法检测临床样本的阳性率显著(P<0.05)高于常规PCR方法。【结论】建立了1种特异性好、敏感性高、重复性高的可定量检测狸猫支原体的FQ-PCR检测方法。展开更多
文摘【目的】旨在建立1种定量检测狸猫支原体的荧光定量PCR检测方法。【方法】比对狸猫支原体16S rRNA基因组序列,选取保守区域片段合成质粒P400,设计与验证1对特异性引物后,以10倍梯度浓度的P400质粒为模板,应用SYBR Green I荧光染料进行荧光定量PCR扩增,绘制标准曲线与回归方程,之后进行特异性、敏感性、重复性检测以及临床样品检测。【结果】建立了1种定量检测狸猫支原体的荧光定量PCR检测方法,该方法对衣原体等常见猫上呼吸道DNA病原无非特异扩增,其检测灵敏度为10拷贝,标准曲线回归方程的决定系数为0.9998,重复性检测的变异系数小于5%。该方法检测临床样本的阳性率显著(P<0.05)高于常规PCR方法。【结论】建立了1种特异性好、敏感性高、重复性高的可定量检测狸猫支原体的FQ-PCR检测方法。
