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自制细胞冻存液对树突状细胞存活率及活性的影响被引量：7: 1; 作者赵满仓魏文青 +3 位作者刘晶张艳付瑶安萍《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期296-299,共4页; 目的:用自制的改良细胞冻存液冻存树突状细胞(dendritic cells,DCs),观察冻存复苏后DCs的细胞存活率及体外诱导CIK(cytokine induced killer cell)对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:从外周血分离、培养获得DCs,分别用3种冻存液冻存:(1)含10%... 展开更多; 关键词树突状细胞细胞冻存液存活率杀伤活性; 在线阅读下载PDF 职称材料

ErbB4基因miRNA慢病毒载体的构建及其在小鼠海马齿状回的表达被引量：1: 2; 作者李树玲颜慧宫泽辉《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期29-33,共5页; 目的构建靶向ErbB4的miRNA慢病毒载体,包装产生高滴度慢病毒并观察其感染小鼠海马齿状回基因的表达。方法将靶向ErbB4基因的miRNA干扰质粒利用Gateway重组技术构建慢病毒表达质粒,并与慢病毒包装系统共转染HEK293T包装细胞,收获上清并... 展开更多; 关键词慢病毒 ERBB4 海马齿状回; 在线阅读下载PDF 职称材料

多基因真核表达载体的构建及其产物的亚细胞定位被引量：2: 3; 作者靳志平谭晓华《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1044-1047,共4页; 目的构建一种多基因表达载体,实现同一载体单一启动子的调控下表达多个基因以及这些基因在同一细胞不同细胞器中的定位。方法利用存在于某些病毒核酸序列中的不同2A肽,合成1段包括2个2A肽和不同限制性内切酶位点的多肽序列,形成单一的... 展开更多; 关键词真核表达载体基因表达信号肽序列亚细胞定位 2A肽; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪Lp-PLA2多克隆抗体制备: 4; 作者侯小强《中国饲料》北大核心 2015年第23期10-12,共3页; 制备猪脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)多克隆抗体,有利于研究猪Lp-PLA2与炎症发生的相关性。本试验利用基因克隆技术构建猪Lp-PLA2原核表达载体,表达重组蛋白,并对表达条件进行优化;使用Ni-NTA树脂亲和层析纯化该蛋白质,免疫家兔,制备猪Lp... 展开更多; 关键词猪脂蛋白相关磷酯酶A2 原核表达多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名自制细胞冻存液对树突状细胞存活率及活性的影响被引量：7: 1; 作者赵满仓魏文青刘晶张艳付瑶安萍; 机构北京军区总医院中心实验科; 出处《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期296-299,共4页; 文摘目的:用自制的改良细胞冻存液冻存树突状细胞(dendritic cells,DCs),观察冻存复苏后DCs的细胞存活率及体外诱导CIK(cytokine induced killer cell)对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:从外周血分离、培养获得DCs,分别用3种冻存液冻存:(1)含10%二甲基亚砜(DMSO)、20%牛血清的RPMI1640培养液;(2)日本ZENOAQ公司的Cellbanker细胞冻存液;(3)自制细胞冻存液(含DMSO、羟乙基淀粉及细胞稳定剂)。每组DCs分6管,于-80℃和-196℃各冻存3管,分别于冻存后第30、60和180d复苏,用锥虫蓝染色法测定细胞存活率,用MTT法检测冻存复苏后DCs活化的CIK对K562细胞的杀伤活性。结果:每组3种冻存液冻存的DCs随着冻存时间的延长,冻存复苏DCs的存活率和活性均有轻度下降,但经统计学分析3种冻存液的冻存效果无明显差别。结论:自制的改良细胞冻存液能够替代传统冻存液和进口冻存液用于DCs的冻存,有良好的推广前景。; 关键词树突状细胞细胞冻存液存活率杀伤活性; Keywords dendritic cell cell freezing medium survival rate killing activity; 分类号 R730.5 [医药卫生—肿瘤] R392.1 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名ErbB4基因miRNA慢病毒载体的构建及其在小鼠海马齿状回的表达被引量：1: 2; 作者李树玲颜慧宫泽辉; 机构军事医学科学院毒物药物研究所新药评价研究室北京军区总医院中心实验科; 出处《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期29-33,共5页; 基金国家十一五科技重大专项综合性新药研究开发技术平台(2009ZX09301-002)~~; 文摘目的构建靶向ErbB4的miRNA慢病毒载体,包装产生高滴度慢病毒并观察其感染小鼠海马齿状回基因的表达。方法将靶向ErbB4基因的miRNA干扰质粒利用Gateway重组技术构建慢病毒表达质粒,并与慢病毒包装系统共转染HEK293T包装细胞,收获上清并浓缩得到慢病毒浓缩液,通过测定绿色荧光蛋白(GFP)表达水平测定其滴度。所得慢病毒浓缩液经立体定位微量注射感染小鼠海马齿状回。观察鼠脑冰冻切片基因表达情况,并用神经元标志物神经元核抗原(NeuN)和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)特异性抗体行免疫染色分析转导的细胞类型。结果阳性克隆测序结果与设计序列一致,说明靶向ErbB4基因的miRNA慢病毒干扰载体构建成功。包装收获慢病毒。浓缩的慢病毒包装上清感染HEK293T细胞后,流式细胞术检测GFP阳性率,计算得慢病毒活性滴度为1.0×1012转导单位(TU).L-1。小鼠海马齿状回立体定位微量注射1.0×1012TU.L-1慢病毒6个月后,观察到注射部位外源基因的显著表达。免疫荧光染色显示,慢病毒转导的细胞多呈NeuN标记阳性,并与GFAP的表达不重叠。结论靶向ErbB4的miRNA慢病毒载体构建成功,获得了靶向ErbB4基因的高滴度miRNA慢病毒颗粒,并实现了脑实质的局部长期稳定转导,慢病毒转导的主要细胞类型为神经元。; 关键词慢病毒 ERBB4 海马齿状回; Keywords lentivirus ErbB4 hippocampus dentate gyrus; 分类号 R749.3 [医药卫生—神经病学与精神病学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名多基因真核表达载体的构建及其产物的亚细胞定位被引量：2: 3; 作者靳志平谭晓华; 机构北京军区总医院中心实验科第三军医大学研究生管理大队学员天津迪艾细胞与分子医学发展有限公司; 出处《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1044-1047,共4页; 基金国家自然科学基金面上项目(81172162)~~; 文摘目的构建一种多基因表达载体,实现同一载体单一启动子的调控下表达多个基因以及这些基因在同一细胞不同细胞器中的定位。方法利用存在于某些病毒核酸序列中的不同2A肽,合成1段包括2个2A肽和不同限制性内切酶位点的多肽序列,形成单一的开放读码框,插入真核表达载体pcDNA3.1(-)Myc/His(B)相应的多克隆位点中,然后将带有膜定位的红色荧光蛋白(ERFP)、核定位的绿色荧光蛋白(EGFP)和胞浆定位的黄色荧光蛋白(EYFP)顺序插入2A肽之间的位点中,构建多基因真核表达载体pcDNA3.1 RGY。用脂质体转染小鼠成纤维NIH3T3细胞和人肾胚293细胞,利用流式细胞仪、荧光显微镜和共聚焦显微镜检测各种荧光蛋白的表达和亚细胞定位。结果转染24 h后用流式细胞仪检测,可同时检测到EGFP和ERFP的表达,且两种荧光蛋白的表达率十分接近;荧光显微镜下同时观察到绿色和红色荧光;共聚焦显微镜观察到在单一细胞上同时显示3种荧光,ERFP定位在细胞膜上,EGFP在细胞核中,而EYFP在细胞质中。结论通过串联方式将多个2A肽和基因置于同一个开放读码框中可实现在同一启动子的调控下表达多个基因。此外,在每个基因序列中加入不同的信号肽序列可将相应基因同时靶向不同的细胞器,实现同一细胞中不同的亚细胞定位。; 关键词真核表达载体基因表达信号肽序列亚细胞定位 2A肽; Keywords eukaryotic expression vector gene expression signal peptide sequence sub-cellular location 2A peptide; 分类号 Q503 [生物学—生物化学] Q782 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪Lp-PLA2多克隆抗体制备: 4; 作者侯小强; 机构北京军区总医院中心实验科; 出处《中国饲料》北大核心 2015年第23期10-12,共3页; 文摘制备猪脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)多克隆抗体,有利于研究猪Lp-PLA2与炎症发生的相关性。本试验利用基因克隆技术构建猪Lp-PLA2原核表达载体,表达重组蛋白,并对表达条件进行优化;使用Ni-NTA树脂亲和层析纯化该蛋白质,免疫家兔,制备猪Lp-PLA2多克隆抗体;并用western blot对获得的抗体进行免疫检测。电泳结果显示猪Lp-PLA2原核表达载体构建成功;SDS-PAGE结果表明,猪Lp-PLA2在1 mol/L IPTG、37℃条件下,表达于菌体中;western blotting显示,该抗体与猪源Lp-PLA2有良好的交叉反应。因此,该多克隆抗体的制备为进一步利用猪作为动物模型研究炎症性疾病奠定了基础。; 关键词猪脂蛋白相关磷酯酶A2 原核表达多克隆抗体; Keywords swine Lp-PLA2 prokaryotie expression polyelonal antibody; 分类号 S828 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	自制细胞冻存液对树突状细胞存活率及活性的影响	赵满仓魏文青刘晶张艳付瑶安萍	《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心	2009	7	在线阅读下载PDF 职称材料
2	ErbB4基因miRNA慢病毒载体的构建及其在小鼠海马齿状回的表达	李树玲颜慧宫泽辉	《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2013	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	多基因真核表达载体的构建及其产物的亚细胞定位	靳志平谭晓华	《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2012	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	猪Lp-PLA2多克隆抗体制备	侯小强	《中国饲料》北大核心	2015	0	在线阅读下载PDF 职称材料