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题名登革1型病毒NS1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
被引量：1
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作者
梅竹
邓永强
曹飞
于曼
朱舜亚
秦成峰
秦鄂德
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机构
北京军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室
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出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期659-661,共3页
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基金
国家自然科学基金(30972613)
国家“十一五”传染病重大专项子课题(2008ZX10004-014
2008ZX10004-015)
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文摘
目的重组表达登革1型病毒NS1蛋白并制备多克隆抗体。方法通过RT-PCR扩增编码登革1型病毒NS1蛋白的基因序列,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)后经酶切测序鉴定,获得重组质粒pET-NS1。进一步使用IPTG诱导表达,经免疫印迹鉴定后,采用蛋白浸提方法从SDS-PAGE胶中纯化回收融合蛋白,并通过透析对目的蛋白进行复性;纯化复性后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接免疫荧光法测定抗体效价。结果成功构建了高效表达登革1型病毒NS1蛋白的原核表达载体,表达的重组NS1蛋白占菌体蛋白总量的50%以上,以包涵体形式存在;免疫印迹表明表达的重组NS1蛋白能够为登革病毒兔抗血清识别,纯化后纯度可达95%以上;免疫小鼠后获得了效价>1∶1000的抗登革病毒NS1蛋白的鼠多克隆抗体。结论原核表达的重组NS1蛋白具有良好的免疫原性,诱导产生的多克隆抗体能够有效识别天然NS1蛋白,为进一步研究登革病毒NS1蛋白及其抗体的生物学功能奠定了基础。
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关键词
登革热病毒
病毒非结构蛋白质类
重组表达
抗体
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Keywords
dengue virus
nonstructural protein 1 （NS1）
recombinant expression
antibodies
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分类号
R512.82
[医药卫生—内科学]
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