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重组人白细胞介素-35的真核表达及生物活性 被引量:1
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作者 马娟 谢良志 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期618-622,共5页
目的构建重组人白细胞介素-35[rhIL-35-IgG1(Fc)]蛋白的真核表达载体并表达纯化该蛋白,研究IL-35与其受体糖蛋白130(gp130)的结合作用。方法构建IL-35真核表达载体pSTEP2-IL35-LFc,转染到HEK293T细胞中,采用亲和色谱分离纯化获得重组IL... 目的构建重组人白细胞介素-35[rhIL-35-IgG1(Fc)]蛋白的真核表达载体并表达纯化该蛋白,研究IL-35与其受体糖蛋白130(gp130)的结合作用。方法构建IL-35真核表达载体pSTEP2-IL35-LFc,转染到HEK293T细胞中,采用亲和色谱分离纯化获得重组IL-35蛋白,SDS-PAGE及Western blot法鉴定蛋白表达,ELISA法检测IL-35-Fc与其受体链gp130的结合作用,并在M1小鼠白血病细胞上研究IL-35对gp130的生物学作用。结果获得高纯度的人IL-35-Fc重组蛋白,ELISA法检测结果发现IL-35-Fc与其受体链gp130具有结合作用,并且IL-35在M1小鼠白血病细胞上对gp130具有中和作用。结论成功制备了具有生物活性的人IL-35-IgG1(Fc)重组蛋白,发现IL-35能够与其受体链gp130的结合,在M1小鼠白血病细胞上对gp130也具有中和作用。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-35 糖蛋白130 M1小鼠白血病细胞
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鼠抗人血小板CD36分子单克隆抗体的制备及活性分析
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作者 陈麟凤 张杰 +5 位作者 杨嘉慧 罗圆圆 庄远 李卉 冯倩 汪德清 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期209-213,共5页
本研究旨在制备具有功能活性的重组人血小板表面CD36抗原的鼠抗人单克隆抗体。提取人肝细胞总RNA,经RT-PCR扩增编码人血小板CD36抗原胞外区(Gly30-Asn439)氨基酸残基cDNA,构建于原核表达载体pMD18并转化大肠杆菌DH5α,筛选获得阳性重组... 本研究旨在制备具有功能活性的重组人血小板表面CD36抗原的鼠抗人单克隆抗体。提取人肝细胞总RNA,经RT-PCR扩增编码人血小板CD36抗原胞外区(Gly30-Asn439)氨基酸残基cDNA,构建于原核表达载体pMD18并转化大肠杆菌DH5α,筛选获得阳性重组子pMD18-CD36,提取质粒。经序列测定后,将该基因插入到真核细胞瞬时表达载体pTE2上,构建成为pTE2-s-CD36-10 His真核瞬时表达载体。采用lipofectamine 2000转染法,将重组质粒转染至HEK293细胞,表达产物经Ni2+2NTA柱层析纯化。以制备的重组CD36蛋白免疫BALB/c小鼠后,取脾与小鼠骨髓瘤细胞融合,筛选出阳性克隆,行Western blot检测抗体结合活性。结果显示:RT-PCR扩增获得了1.4 kb的片段。经测序,该序列分析结果与GenBank中的NM_001001547.2完全一致。SDS-PAGE证实转染的HEK293细胞表达了人CD36抗原胞外区蛋白片段。鼠单克隆抗体在Western blot中可以识别重组CD36蛋白,灵敏度达到8 ng。结论:成功制备了抗人血小板CD36单克隆抗体,为临床筛选CD36阴性患者及献血员、深入研究人血小板CD36表面抗原对血小板输注无效的影响提供了实验基础。 展开更多
关键词 CD36抗原 血小板输注无效 真核载体 蛋白表达
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H10N8禽流感病毒血凝素中和抗体的结合位点鉴定
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作者 胡金芳 孙春昀 +1 位作者 饶木顶 谢良志 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期404-410,共7页
目的制备并筛选H10N8型禽流感病毒血凝素蛋白的中和抗体,并对其抗原结合位点进行鉴定。方法采用基因工程技术制备H10N8血凝素蛋白单克隆抗体,通过假病毒微量中和实验筛选中和抗体,ELISA和Western blot实验确定抗体结合血凝素蛋白的区域,... 目的制备并筛选H10N8型禽流感病毒血凝素蛋白的中和抗体,并对其抗原结合位点进行鉴定。方法采用基因工程技术制备H10N8血凝素蛋白单克隆抗体,通过假病毒微量中和实验筛选中和抗体,ELISA和Western blot实验确定抗体结合血凝素蛋白的区域,Discovery Studio 3.5模拟与对接分析软件预测抗原结合位点,进而研究其在H10亚型内的保守性。结果获得1株具有假病毒中和活性的H10N8单克隆抗体,该抗体的结合表位在HA1上,且具有H10亚型内的保守性。结论成功制备1株中和抗体,为H10N8禽流感疫苗和单克隆药物的研究提供了基础。 展开更多
关键词 H10N8禽流感病毒 血凝素蛋白 中和抗体 表位
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