在蓝藻中表达迟缓爱德华氏菌Eta1-L-Gapdh融合蛋白。提取迟缓爱德华氏菌基因组DNA为模板,用PCR技术分别扩增两个已知具有较强免疫原性的基因eta1和gapdh,再采用重叠延伸PCR将这两个基因融合,获得目的融合基因eta1-L-gapdh。将目的基因...在蓝藻中表达迟缓爱德华氏菌Eta1-L-Gapdh融合蛋白。提取迟缓爱德华氏菌基因组DNA为模板,用PCR技术分别扩增两个已知具有较强免疫原性的基因eta1和gapdh,再采用重叠延伸PCR将这两个基因融合,获得目的融合基因eta1-L-gapdh。将目的基因连接到表达载体pRL489的两个Bam H I酶切位点之间构建表达载体,用质粒提取、PCR、酶切、测序等手段对表达载体进行验证。验证正确的表达载体通过三亲接合转化野生鱼腥藻PCC7120,用新霉素抗性筛选出转基因藻落,通过质粒提取和PCR验证转基因藻。用RT-PCR和Western-blot分别从转录水平和翻译水平对转基因藻中融合基因的表达进行了检测。结果表明,含目的基因的表达载体构建成功,目的基因在蓝藻中转录并表达蛋白,该蛋白在蓝藻中的表达量为2.46%。展开更多
目的:探讨鲜壁虎水提物(aqueous extracts of gecko,AG)与化疗药物环磷酰胺(CTX)联用对人肝癌细胞株BEL-7402增殖的抑制作用,比较两药联用的疗效是否优于单药,并检测两种药物联用对BEL-7402细胞P-糖蛋白(permeability-glycoprotein,P-gp...目的:探讨鲜壁虎水提物(aqueous extracts of gecko,AG)与化疗药物环磷酰胺(CTX)联用对人肝癌细胞株BEL-7402增殖的抑制作用,比较两药联用的疗效是否优于单药,并检测两种药物联用对BEL-7402细胞P-糖蛋白(permeability-glycoprotein,P-gp)表达的影响,为二者临床联用提供实验依据。方法:MTT法检测药物对BEL-7402细胞株的增殖抑制作用,通过计算药物联合作用指数(combination index,CI)分析两种药物联用的效应;Western Blot检测两药联用后BEL-7402细胞株P-gp表达的变化,Quantity One软件对结果进行半定量分析。结果:当抑制率达到90%时,0.830或0.996 mg/m L的AG分别与10或5μmol/m L CTX合用显示为低度协同作用;CTX与AG联用后可降低BEL-7402细胞P-gp的表达,当4μmol/m L CTX与1.162 mg/m L的AG联用时抑制率达67.3%。结论:AG与CTX联合后对BEL-7402细胞增殖的抑制作用优于二者单用,显示为低度协同作用;同时能降低细胞P-gp的表达水平,提示AG与CTX联用可能有较好的抗肿瘤效果,并可逆转由Pgp介导的肿瘤细胞耐药的作用。展开更多
文摘在蓝藻中表达迟缓爱德华氏菌Eta1-L-Gapdh融合蛋白。提取迟缓爱德华氏菌基因组DNA为模板,用PCR技术分别扩增两个已知具有较强免疫原性的基因eta1和gapdh,再采用重叠延伸PCR将这两个基因融合,获得目的融合基因eta1-L-gapdh。将目的基因连接到表达载体pRL489的两个Bam H I酶切位点之间构建表达载体,用质粒提取、PCR、酶切、测序等手段对表达载体进行验证。验证正确的表达载体通过三亲接合转化野生鱼腥藻PCC7120,用新霉素抗性筛选出转基因藻落,通过质粒提取和PCR验证转基因藻。用RT-PCR和Western-blot分别从转录水平和翻译水平对转基因藻中融合基因的表达进行了检测。结果表明,含目的基因的表达载体构建成功,目的基因在蓝藻中转录并表达蛋白,该蛋白在蓝藻中的表达量为2.46%。
基金The project supported by Foundation of Beijing University of Chinese Medicine(2009JYBZZ-2JS038),Foundation of Beijing University of Chinese Medicine(2011JYBZZ-XS037),Foundation of Beijing University of Chinese Medicine(2011JYBZZ-XS045)~~
文摘目的:探讨鲜壁虎水提物(aqueous extracts of gecko,AG)与化疗药物环磷酰胺(CTX)联用对人肝癌细胞株BEL-7402增殖的抑制作用,比较两药联用的疗效是否优于单药,并检测两种药物联用对BEL-7402细胞P-糖蛋白(permeability-glycoprotein,P-gp)表达的影响,为二者临床联用提供实验依据。方法:MTT法检测药物对BEL-7402细胞株的增殖抑制作用,通过计算药物联合作用指数(combination index,CI)分析两种药物联用的效应;Western Blot检测两药联用后BEL-7402细胞株P-gp表达的变化,Quantity One软件对结果进行半定量分析。结果:当抑制率达到90%时,0.830或0.996 mg/m L的AG分别与10或5μmol/m L CTX合用显示为低度协同作用;CTX与AG联用后可降低BEL-7402细胞P-gp的表达,当4μmol/m L CTX与1.162 mg/m L的AG联用时抑制率达67.3%。结论:AG与CTX联合后对BEL-7402细胞增殖的抑制作用优于二者单用,显示为低度协同作用;同时能降低细胞P-gp的表达水平,提示AG与CTX联用可能有较好的抗肿瘤效果,并可逆转由Pgp介导的肿瘤细胞耐药的作用。
