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STAT1干扰慢病毒载体的构建及其基因沉默效应测定
被引量：
2
1
作者
丁治国
何蓓
+5 位作者
陈晓珩
李会龙
高翔
张韬
王鑫
李乃卿
《中国现代普通外科进展》
CAS
2015年第11期841-844,共4页
目的 :构建STAT1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并测定其基因沉默效应。方法 :根据人STAT1基因序列,设计干扰序列,将Oligo退火成双链并连接穿梭载体p LKO-1-EGFP-puro-sh RNA,构建sh RNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α,进行测序...
目的 :构建STAT1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并测定其基因沉默效应。方法 :根据人STAT1基因序列,设计干扰序列,将Oligo退火成双链并连接穿梭载体p LKO-1-EGFP-puro-sh RNA,构建sh RNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L的STAT1过表达瘤株(MHCC97L-stat1),用Real-time PCR和Western Blot检测RNAi组(MHCC97L-stat1-sh RNA-1)和对照组(MHCC97L-stat1)中STAT1基因的表达情况,确定其干扰STAT1表达的有效性。结果:测序证实慢STAT1基因RNAi病毒载体质粒构建成功;慢病毒载体经293T细胞包装成功;慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L-stat1瘤株48 h后,STAT1基因在m RNA水平和蛋白质水平上表达明显降低。结论:STAT1基因RNAi慢病毒载体构建成功,能够在人肝癌细胞MHCC97L-stat1瘤株中表达,并具有显著的基因沉默效果。
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关键词
STAT1基因
慢病毒载体
RNA干扰
MHCC97L细胞
在线阅读
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职称材料
针对人STAT1基因的RNA干扰有效靶点的设计与筛选
被引量：
1
2
作者
丁治国
何蓓
+5 位作者
陈晓珩
李会龙
高翔
张韬
王鑫
李乃卿
《中国现代普通外科进展》
CAS
2015年第12期925-928,共4页
目的:设计并筛选针对人STAT1基因有效的RNA干扰靶点。方法:根据人STAT1基因序列,设计3个干扰序列,将oligo退火成双链并连接穿梭载体pLKO-1-EGFP-puro-shRNA,构建shRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5a,进行测序验证。在脂质体介...
目的:设计并筛选针对人STAT1基因有效的RNA干扰靶点。方法:根据人STAT1基因序列,设计3个干扰序列,将oligo退火成双链并连接穿梭载体pLKO-1-EGFP-puro-shRNA,构建shRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5a,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L的STAT1过表达瘤株(MHCC97L-stat1),用Real-timePCR检测干扰效果。结果:测序证实3个STAT1基因RNAi病毒载体质粒构建成功;慢病毒载体经293T细胞包装成功;3个慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L-stat1瘤株48h后,STAT1基因在mRNA水平表达均受到抑制,其中MHCC9-L-stat1-shRNA-1序列效果最佳,对STAT1基因表达的干扰效率可达81.4%。结论:成功构建并筛选了人STAT1基因RNAi慢病毒载体及有效靶点,为进一步深入研究STAT1基因与抗肿瘤药物药效关系奠定基础。
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关键词
STAT1基因
慢病毒载体
RNA干扰
MHCC97L细胞
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职称材料
题名
STAT1干扰慢病毒载体的构建及其基因沉默效应测定
被引量：
2
1
作者
丁治国
何蓓
陈晓珩
李会龙
高翔
张韬
王鑫
李乃卿
机构
北京中医药大学东直门医院东区外科
北京中医药大学
第三附属
医院
医务处
北京中医药大学东直门医院
外科
出处
《中国现代普通外科进展》
CAS
2015年第11期841-844,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(81001524)
北京市中医药科技项目(QN2013-17)
文摘
目的 :构建STAT1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并测定其基因沉默效应。方法 :根据人STAT1基因序列,设计干扰序列,将Oligo退火成双链并连接穿梭载体p LKO-1-EGFP-puro-sh RNA,构建sh RNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L的STAT1过表达瘤株(MHCC97L-stat1),用Real-time PCR和Western Blot检测RNAi组(MHCC97L-stat1-sh RNA-1)和对照组(MHCC97L-stat1)中STAT1基因的表达情况,确定其干扰STAT1表达的有效性。结果:测序证实慢STAT1基因RNAi病毒载体质粒构建成功;慢病毒载体经293T细胞包装成功;慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L-stat1瘤株48 h后,STAT1基因在m RNA水平和蛋白质水平上表达明显降低。结论:STAT1基因RNAi慢病毒载体构建成功,能够在人肝癌细胞MHCC97L-stat1瘤株中表达,并具有显著的基因沉默效果。
关键词
STAT1基因
慢病毒载体
RNA干扰
MHCC97L细胞
Keywords
STAT1 gene
Lentiviral vector
RNA interference
MHCC97L cells
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
针对人STAT1基因的RNA干扰有效靶点的设计与筛选
被引量：
1
2
作者
丁治国
何蓓
陈晓珩
李会龙
高翔
张韬
王鑫
李乃卿
机构
北京中医药大学东直门医院东区外科
北京中医药大学
第三附属
医院
医务处
北京中医药大学东直门医院
外科
出处
《中国现代普通外科进展》
CAS
2015年第12期925-928,共4页
基金
国家自然科学基金(81001524)
北京市中医药科技项目(QN2013-17)
文摘
目的:设计并筛选针对人STAT1基因有效的RNA干扰靶点。方法:根据人STAT1基因序列,设计3个干扰序列,将oligo退火成双链并连接穿梭载体pLKO-1-EGFP-puro-shRNA,构建shRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5a,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L的STAT1过表达瘤株(MHCC97L-stat1),用Real-timePCR检测干扰效果。结果:测序证实3个STAT1基因RNAi病毒载体质粒构建成功;慢病毒载体经293T细胞包装成功;3个慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L-stat1瘤株48h后,STAT1基因在mRNA水平表达均受到抑制,其中MHCC9-L-stat1-shRNA-1序列效果最佳,对STAT1基因表达的干扰效率可达81.4%。结论:成功构建并筛选了人STAT1基因RNAi慢病毒载体及有效靶点,为进一步深入研究STAT1基因与抗肿瘤药物药效关系奠定基础。
关键词
STAT1基因
慢病毒载体
RNA干扰
MHCC97L细胞
Keywords
STAT1 gene
lentiviral vector
RNA interference
M HCC97L cells
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
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作者
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被引量
操作
1
STAT1干扰慢病毒载体的构建及其基因沉默效应测定
丁治国
何蓓
陈晓珩
李会龙
高翔
张韬
王鑫
李乃卿
《中国现代普通外科进展》
CAS
2015
2
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2
针对人STAT1基因的RNA干扰有效靶点的设计与筛选
丁治国
何蓓
陈晓珩
李会龙
高翔
张韬
王鑫
李乃卿
《中国现代普通外科进展》
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