利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增出地皮菜(Nostoc commune Vauch.)一种新型水应激蛋白(water stress protein,WSP)的基因(GenBank序列号:KF003026),连接到原核表达载体pET28a上,测序鉴定后转化入大肠杆菌BL21,...利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增出地皮菜(Nostoc commune Vauch.)一种新型水应激蛋白(water stress protein,WSP)的基因(GenBank序列号:KF003026),连接到原核表达载体pET28a上,测序鉴定后转化入大肠杆菌BL21,获得一种新型水应激蛋白表达工程菌;经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达及镍离子亲和层析柱(Ni-NTA)纯化后,得到了带6×His标签、分子质量大小为40 kD的可溶性目的蛋白,称其为重组水应激蛋白1(recombinant water stress protein 1,Re-WSP1)。细胞增殖抑制实验结果表明,Re-WSP1蛋白可以抑制结肠癌细胞SW480的增殖,而对正常结肠上皮FHC细胞无明显作用;DAPI细胞核染色结果表明,该蛋白能够诱导SW480细胞凋亡小体的形成;Western blotting结果显示,Re-WSP1蛋白能够促进Procaspase-3和Procaspase-8的活化剪切。以上结果表明:Re-WSP1蛋白能够明显的抑制结肠癌SW480细胞的增殖,并可能通过Caspase依赖途径诱导SW480细胞凋亡。展开更多
文摘利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增出地皮菜(Nostoc commune Vauch.)一种新型水应激蛋白(water stress protein,WSP)的基因(GenBank序列号:KF003026),连接到原核表达载体pET28a上,测序鉴定后转化入大肠杆菌BL21,获得一种新型水应激蛋白表达工程菌;经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达及镍离子亲和层析柱(Ni-NTA)纯化后,得到了带6×His标签、分子质量大小为40 kD的可溶性目的蛋白,称其为重组水应激蛋白1(recombinant water stress protein 1,Re-WSP1)。细胞增殖抑制实验结果表明,Re-WSP1蛋白可以抑制结肠癌细胞SW480的增殖,而对正常结肠上皮FHC细胞无明显作用;DAPI细胞核染色结果表明,该蛋白能够诱导SW480细胞凋亡小体的形成;Western blotting结果显示,Re-WSP1蛋白能够促进Procaspase-3和Procaspase-8的活化剪切。以上结果表明:Re-WSP1蛋白能够明显的抑制结肠癌SW480细胞的增殖,并可能通过Caspase依赖途径诱导SW480细胞凋亡。
