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甲状腺激素受体βΔ的P-box氨基酸序列与转录激活作用关系的研究
1
作者 谢伟 赵荣兰 +4 位作者 左爱军 梁东春 孙蓓 郭刚 张镜宇 《动物医学进展》 北大核心 2017年第3期89-96,共8页
研究新发现的甲状腺激素受体(TR)TRβΔ的P-box氨基酸序列能否结合甲状腺激素反应元件(TRE)后增强靶基因转录,揭示P-box序列的保守性与TRβΔ转录激活作用的关系,验证TRβΔ的功能性和活性。构建pcDNA3.1-TRβΔ真核表达载体质粒和含有... 研究新发现的甲状腺激素受体(TR)TRβΔ的P-box氨基酸序列能否结合甲状腺激素反应元件(TRE)后增强靶基因转录,揭示P-box序列的保守性与TRβΔ转录激活作用的关系,验证TRβΔ的功能性和活性。构建pcDNA3.1-TRβΔ真核表达载体质粒和含有回文序列TRE的pGL3-Promoter/TRE报告基因载体。突变TRβΔ的P-box氨基酸序列对应的DNA序列,分别构建pcDNA3.1-TRβΔmut1、pcDNA3.1-TRβΔmut2突变质粒。以上质粒分组瞬时共转染至COS-7细胞中,分别用含有T3和不含T3的培养基处理后,检测各组荧光素酶的活性。以上载体经PCR、双酶切和质粒测序证实均构建成功。与TRβ1相比,TRβΔ的P-box序列仅在最后一位不同,但基本保证了完整性。在加入T3后,TRβΔ正常与TRE结合,激活报告基因表达,荧光素酶活性显著增加(P<0.01)。将P-box序列突变为与TRβ1一致的pcDNA3.1-TRβΔmut1,在T3调节下也能显著提高荧光素酶的表达(P<0.01)。但完全破坏P-box序列的pcDNA3.1-TRβΔmut2与TRβΔ相比,其荧光素酶的表达显著降低(P<0.01)。结果证明,TRβΔ只有通过完整保守的P-box氨基酸序列,在T3的调节下才能与TRE正常结合,产生转录激活作用。TRβΔ是有转录因子性质的功能性TR。 展开更多
关键词 甲状腺激素受体新亚型TRβΔ 甲状腺激素反应元件 P-box氨基酸序列 转录激活
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5-Aza-CdR对低氧NG108-15细胞的影响机制研究
2
作者 张柱霞 孙明英 +3 位作者 杨洁 姜树原 闫少春 邵国 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期213-219,共7页
通过使用DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine,5-Aza-Cd R)和低氧干预神经细胞系NG108-15,旨为揭示5-Aza-Cd R、低氧、低氧预适应对NG108-15细胞增殖和细胞周期影响的相... 通过使用DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine,5-Aza-Cd R)和低氧干预神经细胞系NG108-15,旨为揭示5-Aza-Cd R、低氧、低氧预适应对NG108-15细胞增殖和细胞周期影响的相关机制。利用5-Aza-Cd R(10.0μmol/L)孵育NG108-15细胞后进行低氧与低氧预适应处理;使用倒置显微镜观察细胞形态的变化;通过RTCA分析细胞增殖指数;收集细胞后使用流式细胞仪检测各组细胞周期和细胞凋亡的变化情况;利用Real-time PCR检测甲基转移酶DNMTs和细胞周期相关基因在m RNA水平的表达变化情况。结果表明,5-Aza-Cd R和低氧抑制NG108-15细胞增殖,促进细胞早期和晚期凋亡,低氧预适应促进细胞的增殖。然而,5-Aza-Cd R处理后再低氧与低氧预适应,DNMTs和细胞相关周期基因的m RNA转录增加(P<0.05)。10.0μmol/L的5-Aza-Cd R联合低氧处理抑制细胞的增殖,低氧预适应对细胞的增殖有促进作用。 展开更多
关键词 NG108-15细胞 5-氮-2'脱氧胞苷 低氧 低氧预适应
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PP1γ基因DNA甲基化在学习记忆中的作用 被引量：2
3
作者 侯林 许晟迪 +6 位作者 张柱霞 田小莉 姜树原 刘友 巴德仁贵 黄丽华 邵国 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期146-152,共7页
目的研究蛋白磷酸酶1γ(protein serine/threonine phosphatase,PP1γ)和DNA甲基化在学习记忆中的作用。方法通过DNA甲基化转移酶(DNA methytransferases,DNMTs)抑制剂5-aza-cdR处理小鼠,观察小鼠学习记忆情况及其PP1γ表达变化,通过水... 目的研究蛋白磷酸酶1γ(protein serine/threonine phosphatase,PP1γ)和DNA甲基化在学习记忆中的作用。方法通过DNA甲基化转移酶(DNA methytransferases,DNMTs)抑制剂5-aza-cdR处理小鼠,观察小鼠学习记忆情况及其PP1γ表达变化,通过水迷宫测定小鼠的学习记忆能力,Real-time PCR检测小鼠海马区DNMTs和PP1γmRNA转录水平以及Western-Blot测定PP1γ的蛋白质表达水平。为了进一步探讨5-aza-cdR对小鼠学习记忆的影响是否与细胞增殖和凋亡有关,用5-aza-cdR处理NG108-15神经细胞,流式细胞仪、x Celligence系统和荧光素酶报告基因分别检测5-aza-cdR对细胞增殖、凋亡和PP1γ的转录活性的影响。结果侧脑室注射了5-aza-cdR的小鼠空间学习记忆能力增加,同时小鼠海马区的DNMTs和PP1γ的表达降低;10μmol/L 5-aza-cdR抑制细胞增殖,降低PP1γ的转录活性,但是没有诱导细胞凋亡。结论 5-aza-cdR对PP1γ的表达抑制与小鼠学习记忆有关。 展开更多
关键词 蛋白磷酸酶1γ 5-AZA-CDR 海马 学习记忆
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1,10-邻二氮杂菲双过氧钒酸钾对HT22细胞增殖和周期的影响 被引量：1
4
作者 巴德仁贵 田小莉 +5 位作者 鲍牧兰 张晓璐 崔钧贺 许文强 苏娇 邵国 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2019年第5期334-340,共7页
目的探讨1,10-邻二氮杂菲双过氧钒酸钾〔BPV(phen)〕是否通过调节DNA甲基转移酶(DNMT)的表达,调控细胞周期相关基因表达,进而影响细胞周期。方法 BPV(phen)0.3和3.0μmol·L-1处理HT22细胞24 h,MTS法检测细胞存活;流式细胞术方法检... 目的探讨1,10-邻二氮杂菲双过氧钒酸钾〔BPV(phen)〕是否通过调节DNA甲基转移酶(DNMT)的表达,调控细胞周期相关基因表达,进而影响细胞周期。方法 BPV(phen)0.3和3.0μmol·L-1处理HT22细胞24 h,MTS法检测细胞存活;流式细胞术方法检测细胞周期;ELISA法检测DNMT活性;实时荧光定量PCR检测p21,DNMT1,DNMT3A和DNMT3B mRNA表达水平;Western印迹法分别检测相应蛋白表达水平。结果与DMSO对照组相比,BPV(phen)0.3μmol·L-1对细胞存活率无显著影响,BPV(phen)3.0μmol·L-1组细胞存活率显著降低(P<0.05)。细胞周期结果显示,与DMSO对照组相比,BPV(phen)0.3μmol·L-1组各细胞周期百分比无显著差异,BPV(phen)3.0μmol·L-1组S期细胞显著增加,为(76.1±1.6)%(P<0.05),G2期细胞显著降低(P<0.05),为(2.1±1.5)%。与DMSO对照组相比,BPV(phen)3.0μmol·L-1组细胞DNMT活性显著增加(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,与DMSO对照组相比,BPV(phen)0.3μmol·L-1组p21,DNMT1,DNMT3A和DNMT3B mRNA表达水平无显著差异,BPV(phen)3.0μmol·L-1组各基因表达水平均显著增加(P<0.05,P<0.01)。Western印迹结果显示,与DMSO对照组相比,BPV(phen)0.3μmol·L-1组各蛋白表达水平均无显著性差异,只有BPV(phen)3.0μmol·L-1组DNMT3B和P21蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论 BPV能够通过改变DNMT的表达,调节下游与细胞周期相关基因的表达,进而影响HT22细胞的生长和增殖。 展开更多
关键词 1 10-邻二氮杂菲双过氧钒酸钾 DNA甲基转移酶 HT22细胞 DNA甲基化
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5-Aza-CdR和低氧对小鼠海马中蛋白磷酸酶-1γ表达及对学习记忆的影响 被引量：5
5
作者 张柱霞 孙明英 +4 位作者 杨洁 姜树原 刘友 闫少春 邵国 《动物医学进展》 北大核心 2015年第9期59-63,共5页
通过使用去甲基化试剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine,5-Aza-CdR)和低氧处理小鼠,从而揭示低氧和5-Aza-CdR对蛋白磷酸酶1γ(protein serine/threonine phosphatase-1γ,PP1γ)表达的影响以及对小鼠学习记忆的影响。水... 通过使用去甲基化试剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine,5-Aza-CdR)和低氧处理小鼠,从而揭示低氧和5-Aza-CdR对蛋白磷酸酶1γ(protein serine/threonine phosphatase-1γ,PP1γ)表达的影响以及对小鼠学习记忆的影响。水迷宫筛选小鼠,正常小鼠随机分为对照组和试验组2组,分别给小鼠大脑立体定位注射10g/L BSA和10μmol/L 5-Aza-CdR至右侧脑室,休息1周,水迷宫测试小鼠学习记忆能力情况,然后依次处死低氧后3、2、1、0d的小鼠。最后通过Real-time PCR检测蛋白磷酸酶1的转录水平的表达。5-Aza-CdR和低氧分别处理小鼠都会提高小鼠的学习记忆能力,抑制PP1γmRNA的转录水平,但是联合处理对小鼠的PP1γmRNA转录水平却没有影响。说明5-Aza-CdR和低氧抑制PP1γ的转录水平,促进小鼠海马区突触可塑性的形成。 展开更多
关键词 蛋白磷酸酶1 5-AZA-CDR 低氧 小鼠 学习记忆
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5-aza-cdR对神经细胞NG108-15细胞周期的影响 被引量：1
6
作者 张柱霞 孙明英 +4 位作者 杨洁 姜树原 刘友 闫少春 邵国 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期693-697,共5页
目的:观察DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine,5-aza-cdR)对神经细胞系NG108-15细胞周期的作用,并探讨相关的机制。方法:NG108-15细胞用10μmol/L 5-aza-cdR处理,RTCA分析... 目的:观察DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine,5-aza-cdR)对神经细胞系NG108-15细胞周期的作用,并探讨相关的机制。方法:NG108-15细胞用10μmol/L 5-aza-cdR处理,RTCA分析细胞指数,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,8-PCR检测DNMTs及细胞周期相关基因CCND1和CCND2 mRNA的表达。结果:5-aza-cdR能抑制NG108-15细胞的增殖,5-aza-cdR处理细胞后使细胞周期发生变化,同时使DNMT1的表达降低(P<0.05)而DNMT3A和DNMT3B mRNA表达不变,并且CCND1和CCND2 mRNA表达也不变。结论:10μmol/L 5-aza-cdR可以抑制NG08-15细胞的增殖,其抑制作用可能是通过降低DNMT1表达实现的,这种抑制作用不影响CCND1和CCND2的表达。 展开更多
关键词 NG108-15细胞 5-氮-2'脱氧胞苷 细胞周期
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外泌体对低氧/缺血损伤脑神经的保护作用 被引量：1
7
作者 崔钧贺 张晓璐 +1 位作者 吕国蔚 邵国 《生理科学进展》 CAS 北大核心 2019年第1期55-57,共3页
低氧/缺血会对神经系统产生损伤,减轻低氧/缺血状态对脑神经损伤的至关重要的一个方面就是抑制氧自由基和炎性因子的产生,这也是目前治疗的一个重要策略。低氧/缺血预适应可以通过抑制氧自由基和炎性因子来保护神经细胞。低氧/缺血预适... 低氧/缺血会对神经系统产生损伤,减轻低氧/缺血状态对脑神经损伤的至关重要的一个方面就是抑制氧自由基和炎性因子的产生,这也是目前治疗的一个重要策略。低氧/缺血预适应可以通过抑制氧自由基和炎性因子来保护神经细胞。低氧/缺血预适应刺激的外泌体的转运可能是保护作用机制之一,本文通过对外泌体在低氧/缺血状态下发挥的神经保护作用和作用机制等方面进行综述,为低氧/缺血脑神经保护的治疗研究提供新思路。 展开更多
关键词 外泌体 低氧/缺血 神经保护 神经再生
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NR2B亚基1472位点酪氨酸磷酸化在低氧/缺血中的神经保护作用 被引量：1
8
作者 张晓璐 许晟迪 邵国 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期101-104,共4页
N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid,NMDA)离子型谷氨酸受体,NR2B亚基作为其重要组成部分,在大脑的各种生理过程中发挥着重要作用。NR2B亚基包含多个酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸磷酸化位点,在低氧/缺血条件下,通过NR2B磷酸化变换... N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid,NMDA)离子型谷氨酸受体,NR2B亚基作为其重要组成部分,在大脑的各种生理过程中发挥着重要作用。NR2B亚基包含多个酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸磷酸化位点,在低氧/缺血条件下,通过NR2B磷酸化变换使神经细胞对其产生应答。本文对NR2B亚基酪氨酸1472磷酸化及其在低氧/缺血情况下发挥的生理学功能进行综述,为低氧/缺血神经保护研究提供思路。 展开更多
关键词 NR2B亚基 Tyr-1472 低氧/缺血 磷酸化
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