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Neuritin毕赤酵母表达系统的构建及其对PC12细胞的影响
被引量：
6
1
作者
张树军
赵臣
+4 位作者
狄建军
穆莎茉莉
仙玲玲
于娜
黄瑾
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期148-152,共5页
旨在构建Neuritin的毕赤酵母表达系统获得大量有活性的Neuritin蛋白,研究其神经生物学功能。PCR扩增编码neuritin基因cDNA序列,并纯化回收,通过酶切和连接插入穿梭载体pPIC9K中,转化大肠杆菌DH5α,neuritin-pPIC9k重组质粒经PCR与测序...
旨在构建Neuritin的毕赤酵母表达系统获得大量有活性的Neuritin蛋白,研究其神经生物学功能。PCR扩增编码neuritin基因cDNA序列,并纯化回收,通过酶切和连接插入穿梭载体pPIC9K中,转化大肠杆菌DH5α,neuritin-pPIC9k重组质粒经PCR与测序鉴定后,使用SalⅠ酶切使其线性化,电击转化酵母菌GS115,经筛选与鉴定,成功构建了Neuritin的毕赤酵母表达系统。结果表明,使用甲醇诱导其表达,SDS-PAGE和Western blot分析得到11 kD的Neuritin蛋白,纯化的Neuritin蛋白加入PC12细胞培养液中,能促进其突起的生长。
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关键词
NEURITIN
PPIC9K
毕赤酵母表达系统
PC12细胞
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职称材料
Neuritin蛋白的纯化及其对PC12细胞和鸡胚DRG神经元生长的影响
被引量：
1
2
作者
张树军
赵臣
+4 位作者
黄凤兰
仙玲玲
于娜
杨磊
黄瑾
《神经解剖学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期217-221,共5页
目的:纯化毕赤酵母表达的Neuritin蛋白,通过观察其对PC12细胞和鸡胚背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的作用,研究其神经生物学功能。方法:采用镍离子金属螯合亲和层析法纯化Neuritin蛋白,Bradford法对纯化的Neuritin蛋白进行定量,...
目的:纯化毕赤酵母表达的Neuritin蛋白,通过观察其对PC12细胞和鸡胚背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的作用,研究其神经生物学功能。方法:采用镍离子金属螯合亲和层析法纯化Neuritin蛋白,Bradford法对纯化的Neuritin蛋白进行定量,然后加入到PC12细胞和DRG的培养液中,通过观察PC12细胞突起的生长情况和细胞形态的变化,研究其促进细胞突起生长的功能;通过观察鸡胚DRG的神经纤维生长情况,研究其促进DRG神经纤维生长活性;通过观察鸡胚背根神经节的裂解时间,研究其阻止细胞退化和凋亡的活性。结果:纯化后的Neuritin蛋白经SDS-PAGE电泳显示,获得11 kDa左右的唯一蛋白条带,即Neuritin蛋白;Bradford定量法计算出其浓度为490μg/ml。纯化的Neuritin蛋白加入到PC12细胞培养液中,PC12细胞长出突起,发生类神经元样改变;鸡胚DRG培养液中加入Neuritin蛋白后,长出神经纤维,裂解时间也延长,并与浓度呈正相关。结论:毕赤酵母表达的Neuritin蛋白得到有效纯化,纯化的Neuritin蛋白能促进细胞突起的生长,阻止细胞的退化和凋亡,延长细胞的存活时间,这为进一步研究neuritin的功能及作用机制奠定了良好的实验基础。
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关键词
NEURITIN
毕赤酵母
鸡胚背根神经节
PC12细胞
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职称材料
题名
Neuritin毕赤酵母表达系统的构建及其对PC12细胞的影响
被引量：
6
1
作者
张树军
赵臣
狄建军
穆莎茉莉
仙玲玲
于娜
黄瑾
机构
内蒙古民族大学生命科学学院
内蒙古自治区高校蓖麻产业工程研究中心
包头北方医院普外科
石河子大学医学院新疆地方与民族高发病重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期148-152,共5页
基金
内蒙古自治区高校蓖麻产业工程研究中心资助项目(BMYJ2010007)
文摘
旨在构建Neuritin的毕赤酵母表达系统获得大量有活性的Neuritin蛋白,研究其神经生物学功能。PCR扩增编码neuritin基因cDNA序列,并纯化回收,通过酶切和连接插入穿梭载体pPIC9K中,转化大肠杆菌DH5α,neuritin-pPIC9k重组质粒经PCR与测序鉴定后,使用SalⅠ酶切使其线性化,电击转化酵母菌GS115,经筛选与鉴定,成功构建了Neuritin的毕赤酵母表达系统。结果表明,使用甲醇诱导其表达,SDS-PAGE和Western blot分析得到11 kD的Neuritin蛋白,纯化的Neuritin蛋白加入PC12细胞培养液中,能促进其突起的生长。
关键词
NEURITIN
PPIC9K
毕赤酵母表达系统
PC12细胞
Keywords
Neuritin pPIC9K
Pichia pastoris expression system
PC 12 cell
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
Neuritin蛋白的纯化及其对PC12细胞和鸡胚DRG神经元生长的影响
被引量：
1
2
作者
张树军
赵臣
黄凤兰
仙玲玲
于娜
杨磊
黄瑾
机构
内蒙古民族大学生命科学学院
内蒙古大学
包头北方医院普外科
石河子大学医学院
出处
《神经解剖学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期217-221,共5页
基金
兵团博士基金(04)
内蒙古自治区研究生科研创新项目(1402020201)
文摘
目的:纯化毕赤酵母表达的Neuritin蛋白,通过观察其对PC12细胞和鸡胚背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的作用,研究其神经生物学功能。方法:采用镍离子金属螯合亲和层析法纯化Neuritin蛋白,Bradford法对纯化的Neuritin蛋白进行定量,然后加入到PC12细胞和DRG的培养液中,通过观察PC12细胞突起的生长情况和细胞形态的变化,研究其促进细胞突起生长的功能;通过观察鸡胚DRG的神经纤维生长情况,研究其促进DRG神经纤维生长活性;通过观察鸡胚背根神经节的裂解时间,研究其阻止细胞退化和凋亡的活性。结果:纯化后的Neuritin蛋白经SDS-PAGE电泳显示,获得11 kDa左右的唯一蛋白条带,即Neuritin蛋白;Bradford定量法计算出其浓度为490μg/ml。纯化的Neuritin蛋白加入到PC12细胞培养液中,PC12细胞长出突起,发生类神经元样改变;鸡胚DRG培养液中加入Neuritin蛋白后,长出神经纤维,裂解时间也延长,并与浓度呈正相关。结论:毕赤酵母表达的Neuritin蛋白得到有效纯化,纯化的Neuritin蛋白能促进细胞突起的生长,阻止细胞的退化和凋亡,延长细胞的存活时间,这为进一步研究neuritin的功能及作用机制奠定了良好的实验基础。
关键词
NEURITIN
毕赤酵母
鸡胚背根神经节
PC12细胞
Keywords
neuritin
Pichia pastoris
chicken embryonic dorsal root ganglion
PC12 cell
分类号
R329.2 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Neuritin毕赤酵母表达系统的构建及其对PC12细胞的影响
张树军
赵臣
狄建军
穆莎茉莉
仙玲玲
于娜
黄瑾
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
Neuritin蛋白的纯化及其对PC12细胞和鸡胚DRG神经元生长的影响
张树军
赵臣
黄凤兰
仙玲玲
于娜
杨磊
黄瑾
《神经解剖学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
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职称材料
已选择
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