数字PCR技术在动物疫苗研究中的应用前景 被引量：2

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作者 于晓璐 楚电峰 +2 位作者 夏娜 李振 孙化露 《中国动物检疫》 CAS 2022年第7期91-96,共6页

数字PCR(digital PCR,dPCR)技术是基于“有限稀释”和“泊松分布”原理迅速发展的第三代PCR技术,无需标准品即可实现样品的绝对定量,灵敏度高、操作简单,在疫病检测、转基因鉴定、食品检测等方面得到快速发展,而在动物疫苗研究领域也被... 数字PCR(digital PCR,dPCR)技术是基于“有限稀释”和“泊松分布”原理迅速发展的第三代PCR技术,无需标准品即可实现样品的绝对定量,灵敏度高、操作简单,在疫病检测、转基因鉴定、食品检测等方面得到快速发展,而在动物疫苗研究领域也被越来越多用于质控、筛查和定量。本文从动物疫苗研究的角度,阐述了数字PCR在动物疫苗基因变异检测、基因定量、效价测定、疫苗效果评价等方面的发展潜力。该技术将有助于解决动物疫苗研究过程中的病毒生长曲线和疫苗效价测定以及基因变异分析等重点难点问题,未来将成为疫苗研发的有力工具。 展开更多

关键词 数字PCR 基因变异检测 绝对定量 效价测定

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表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗在小鼠体内的存留时间分析 被引量：1

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作者 熊贝嘉 张会 +3 位作者 孙永科 范根成 张恒 杨玉艾 《动物医学进展》 北大核心 2019年第3期49-53,共5页

研究E0-E2基因和表达蛋白及抗体水平在小鼠体内的最长存留时间,以确定表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在小鼠体内的存留规律。本试验选用30只SPF级别的健康小鼠,随机分为A、B组,各免疫组以1×106 IFU/只剂量接种rAd... 研究E0-E2基因和表达蛋白及抗体水平在小鼠体内的最长存留时间,以确定表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在小鼠体内的存留规律。本试验选用30只SPF级别的健康小鼠,随机分为A、B组,各免疫组以1×106 IFU/只剂量接种rAd-E0-E2,对照组注射生理盐水。A组20只于接种后不同特定时间(2只/次)采集血液和组织进行PCR和IFA检测E0-E2基因及表达蛋白残留情况;B组10只于接种后1、3、5、7、10、14、21、28d采集血清检测猪瘟抗体水平。PCR和IFA检测显示,在接种12、24、36h后肝、脾、肾组织和血清中E0-E2基因和蛋白检出率为100%,接种48h后小鼠肝、脾组织检出率为50%,肾组织和血清检出率为100%。接种72h以后,小鼠血液和组织检测均为阴性。接种后7d试验组体内抗体阳性率为40%,接种后10d小鼠体内抗体阳性率为100%,抗体阻断率在43%～51.2%,接种后28d,猪瘟抗体阳性率为100%,抗体阻断率在75.6%～87.5%。表明rAd-E0-E2在小鼠体内的存留时间最长72h,接种时间与E2抗体水平呈正相关。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E0-E2基因 重组腺病毒疫苗 存留规律

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禽脑脊髓炎、鸡痘二联活疫苗安全性、最小免疫剂量及免疫效力试验 被引量：3

3

作者 王红 曹志 +7 位作者 毛娅卿 吴涛 宋新宇 宫晓 张恒 马爽 李慧姣 范根成 《中国兽药杂志》 2018年第7期16-21,共6页

为确定禽脑脊髓炎(AE)、鸡痘(AP)二联活疫苗的安全性、最小免疫剂量及免疫效力,自制3批二联活疫苗进行研究。结果显示,鸡接种10倍剂量疫苗后精神、食欲及发育均正常,临床表现和剖检均无异常;AEV YBF02株的最小免疫剂量为100 EID50,鸡痘... 为确定禽脑脊髓炎(AE)、鸡痘(AP)二联活疫苗的安全性、最小免疫剂量及免疫效力,自制3批二联活疫苗进行研究。结果显示,鸡接种10倍剂量疫苗后精神、食欲及发育均正常,临床表现和剖检均无异常;AEV YBF02株的最小免疫剂量为100 EID50,鸡痘鹌鹑化弱毒株的最小免疫剂量为10 EID50;3批疫苗AEV YBF02株的病毒含量均≥103.2EID50/羽份,鸡痘鹌鹑化弱毒株的病毒含量均≥103.4EID50/羽份,攻毒后保护指数为89~100。试验表明,自制二联活疫苗安全、有效、质量可控,可用于预防禽脑脊髓炎和鸡痘。 展开更多

关键词 禽脑脊髓炎 鸡痘 安全性 最小免疫剂量 免疫效力

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗(TJM-F92株)安全性调查及有效性和干扰性试验 被引量：2

4

作者 刘晓东 郝尧光 +5 位作者 王宗升 王辉之 范根成 杜元钊 董雅琴 高丰 《中国动物检疫》 CAS 2019年第7期62-67,共6页

为了解我国高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗(TJM-F92株)的安全性、有效性,以便进一步优化免疫程序,利用ELISA抗体检测与现场跟踪调查的方法,进行了弱毒疫苗(TJM-F92株)安全性调查及有效性和干扰性试验。结果显示:弱毒疫苗(TJM-F92株... 为了解我国高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗(TJM-F92株)的安全性、有效性,以便进一步优化免疫程序,利用ELISA抗体检测与现场跟踪调查的方法,进行了弱毒疫苗(TJM-F92株)安全性调查及有效性和干扰性试验。结果显示:弱毒疫苗(TJM-F92株)对母猪的采食量、体温、返情率及死胎与木乃伊胎数量均无影响,免疫后各阶段猪群的免疫抗体均达到了合格水平;弱毒疫苗(TJM-F92株)与猪瘟疫苗(脾苗)同时免疫,两种疫病的抗体水平均表现正常,与分开免疫无明显差异。结果表明,弱毒疫苗(TJM-F92株)具有良好的安全性和有效性,普免不会使母猪出现不良反应,对各阶段猪群都有良好的保护性,同时可与猪瘟脾苗联合免疫。因此,猪场可以按程序对各阶段猪群开展弱毒疫苗(TJM-F92株)免疫,同时可以尝试与猪瘟疫苗同时免疫,以优化猪场免疫程序,节省人力,减少应激。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征 弱毒疫苗 安全性 有效性 干扰性

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鹅星状病毒的分离鉴定及全基因组序列分析 被引量：30

5

作者 张玉杰 孙宁 +13 位作者 刘东 于静 刘红祥 于可超 任衍倍 高天佐 杨少燕 宫晓 邹敏 张宇龙 王玉超 钟声 马冬 杜元钊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期2765-2777,共13页

2017年10月—2019年5月,本实验室从广东、四川、河北、山东、安徽、辽宁等广大养鹅地区采集了67份典型雏鹅痛风样品进行了实验室检测以及病原的分离鉴定,检测结果表明:所有样品中均检测到了鹅星状病毒,并且约有94.03%的样品为两个不同... 2017年10月—2019年5月,本实验室从广东、四川、河北、山东、安徽、辽宁等广大养鹅地区采集了67份典型雏鹅痛风样品进行了实验室检测以及病原的分离鉴定,检测结果表明:所有样品中均检测到了鹅星状病毒,并且约有94.03%的样品为两个不同种的鹅星状病毒混合感染。病原分离结果表明:鹅星状病毒FLX株的变异株病毒(命名为SCCD)可以在鹅胚上稳定增殖,并且能稳定致死10日龄鹅胚,致病力较鹅星状病毒FLX增强;新型鹅星状病毒株(命名为SDPD)不能在鹅胚和SPF鸡胚上稳定增殖。病毒的基因组测序结果表明:鹅星状病毒FLX株与鹅星状病毒FLX的变异株病毒SCCD株、新型鹅星状病毒SDPD株全基因组核苷酸相似性分别为89.7%、58.1%,ORF1b基因氨基酸相似性分别为98.4%、61.0%,ORF2基因氨基酸相似性分别为81.0%、42.5%。将新分离的鹅星状病毒株接种1日龄健康雏鹅,结果表明,鹅星状病毒SCCD株和鹅星状病毒SDPD株虽然能使雏鹅发生死亡,引起肝炎、肾肿胀和增重减少等变化,但雏鹅均无典型痛风(脏器尿酸盐沉积)表现,而两种鹅星状病毒株混合攻毒能使44%的雏鹅发生典型痛风,并与临床发病症状一致。因此,临床上引起雏鹅痛风的病原可能是两种鹅星状病毒,即新型鹅星状病毒和鹅星状病毒FLX的变异株病毒。 展开更多

关键词 雏鹅痛风 两种鹅星状病毒 分离鉴定 序列分析

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基于VP6蛋白的牛轮状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量：3

6

作者 刘广阔 邹敏 +5 位作者 吴发兴 于皓同 王凯茸 张锐铮 张琪 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第1期1-6,共6页

为了建立牛轮状病毒(BRV)血清抗体的检测方法,从病料中克隆牛轮状病毒VP6基因,构建其表达载体,利用原核表达技术表达重组VP6蛋白,建立牛轮状病毒血清抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组VP6蛋白大小为40 ku,以包涵体形式表达,Western ... 为了建立牛轮状病毒(BRV)血清抗体的检测方法,从病料中克隆牛轮状病毒VP6基因,构建其表达载体,利用原核表达技术表达重组VP6蛋白,建立牛轮状病毒血清抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组VP6蛋白大小为40 ku,以包涵体形式表达,Western blot证实重组VP6蛋白有良好的反应原性;以4μg/mL浓度的抗原包被酶标板,一抗血清50倍稀释,酶标二抗稀释10000倍稀释,为最佳工作条件,阴阳临界值为0.233,表明该方法具有良好的特异性和敏感性。建立的检测BRV抗体的间接ELISA可用于临床BRV感染的检测。 展开更多

关键词 牛轮状病毒 VP6蛋白 原核表达 间接酶联免疫吸附试验

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2022年我国部分省份猪瘟猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病流行病学调查 被引量：3

7

作者 段坦然 刘红祥 +7 位作者 刘华阳 王玉超 杨雪 吕宁宁 许春雨 杨少艳 吴美丽 刘东 《中国动物检疫》 CAS 2024年第9期9-15,共7页

为了解我国不同地区不同生长阶段及不同规模猪场猪群的猪瘟CSF猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪伪狂犬病(PR)流行情况,对2022年收集的6172份血清样品和2301份病原检测样品分别进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及伪狂犬... 为了解我国不同地区不同生长阶段及不同规模猪场猪群的猪瘟CSF猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪伪狂犬病(PR)流行情况,对2022年收集的6172份血清样品和2301份病原检测样品分别进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及伪狂犬病病毒(PRV)抗体及抗原检测。结果显示:CSFV、PRRSV、PRV-g E抗体阳性率分别为94.15%、63.06%和8.55%,病原检出率分别为0.13%、8.50%和0.80%。育肥场的PRRSV抗原检出率最高,且S/P≥2.5占比最高;5~6胎母猪的PRV-g E抗体阳性率(60.87%)显著高于其他生长阶段猪群(P<0.05)。结果表明:CSF整体免疫防控效果良好,疫情发生风险较低;PRRSV免疫抗体阳性率不高,特别要警惕育肥场13~21周龄育肥猪的PRRSV感染;高胎龄母猪的PRV带毒情况严重,建议做好后备猪的更新与高胎次母猪的淘汰工作,并大力推进PR净化。 展开更多

关键词 猪瘟 猪繁殖与呼吸综合征 伪狂犬 流行病学 抗体

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2020—2022年我国部分地区鸡传染性喉气管炎流行病学调查

8

作者 金卫 鄂伟 +8 位作者 刘红祥 刘华阳 周建超 张翔 赵成龙 李彬 桑圣云 宋姗姗 刘东 《中国动物检疫》 CAS 2024年第7期1-5,共5页

为了解我国部分地区鸡传染性喉气管炎(ILT)的流行特点,2020-2022年对安徽、北京、福建等29个省级行政区部分养殖场(户)送检的47 210份疑似鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染样品进行了PCR检测,并对检测结果进行了空间、时间、群间分布统... 为了解我国部分地区鸡传染性喉气管炎(ILT)的流行特点,2020-2022年对安徽、北京、福建等29个省级行政区部分养殖场(户)送检的47 210份疑似鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染样品进行了PCR检测,并对检测结果进行了空间、时间、群间分布统计分析。结果显示:共检出413份ILTV阳性样品,阳性检出率为0.87%;2020-2022年ILTV阳性检出率分别为1.41%、0.72%和0.56%;每月均有ILTV检出,10月-次年5月阳性检出率较高;大多数省份均有ILTV阳性检出,养鸡密集省份的阳性率较高;4种品种鸡均易感,其中黄羽鸡(1.56%)和蛋鸡(1.11%)阳性率较高;> 3~9以及> 18~24周龄鸡群阳性率较高。结果说明:我国鸡群中ILTV流行范围较广,阳性检出率呈逐年下降趋势,低温季节和小周龄鸡群感染风险相对较高,建议加强鸡群的饲养管理,并持续开展ILT流行病学监测,以期为ILT防控策略调整和研发新型疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 鸡传染性喉气管炎 流行病学调查 禽病毒性传染病

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猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化及鉴定 被引量：11

9

作者 王席 李国攀 +2 位作者 陈清清 徐保娟 荣俊 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第6期1792-1800,共9页

为获得较高纯度的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)Cap蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)并对其进行结构和功能研究,本试验以大肠杆菌表达系统表达了PCV2重组Cap(PCV2 rCap)蛋白,通过硫酸铵分级沉淀、Sephacry... 为获得较高纯度的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)Cap蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)并对其进行结构和功能研究,本试验以大肠杆菌表达系统表达了PCV2重组Cap(PCV2 rCap)蛋白,通过硫酸铵分级沉淀、Sephacryl S-300 HR凝胶过滤层析、Capto Q离子交换层析、CsCl密度梯度离心等方法对其进行了纯化。通过Western blotting对纯化所得蛋白进行免疫反应性鉴定,透射电镜(TEM)观察纯化蛋白的粒径及形态,高效液相尺寸排阻色谱(HPSEC)检测其组分分布。结果显示,纯化后PCV2 rCap蛋白经SDS-PAGE检测,可见28 ku的目的蛋白带,灰度扫描法检测其纯度为97.53%。Western blotting结果显示,该处的特异性蛋白条带有明显的免疫反应性;TEM检测其为粒径17.35~19.24 nm的规则球形颗粒,表明所获得的PCV2 rCap蛋白在表达时能在菌体内自我装配成VLPs,且在纯化过程中没有被破坏而解聚,仍保持天然状态;HPSEC检测纯化样品中VLPs含量为92.67%。本试验结果为进一步研究PCV2 VLPs的空间结构及其免疫保护机制提供了参考依据。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) 病毒样颗粒(VLPs) 纯化 鉴定 凝胶过滤层析 离子交换层析

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诱导猪肺泡巨噬细胞CD163受体表达的细胞因子筛选 被引量：1

10

作者 刘源 马卓媛 +3 位作者 樊港 楚电峰 张仕强 王妍 《动物医学进展》 北大核心 2022年第4期12-18,共7页

猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)中的CD163受体作为明星分子不仅参与正常的生理活动,而且作为重要的病毒受体介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)入侵宿主靶细胞... 猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)中的CD163受体作为明星分子不仅参与正常的生理活动,而且作为重要的病毒受体介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)入侵宿主靶细胞,因此其表达调控的研究备受关注。为了探讨巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素10(IL-10)、白介素3(IL-3)和地塞米松(dexamethasone)及其组合对PAM中CD163受体表达的促进作用,通过RT-qPCR和免疫荧光染色在原代PAM中从mRNA和蛋白水平对不同因子及其组合中CD163受体的表达情况进行检测。结果显示,M-CSF、GM-CSF、TGF-β1、IL-10、IL-3和dexamethasone都能在一定范围内促进CD163受体的表达,通过组合发现dexamethasone+IL-10对于CD163受体表达的促进作用最为显著,为进一步开展CD163的表达调控研究奠定了基础。 展开更多

关键词 肺泡巨噬细胞 CD163 地塞米松 白介素10 猪

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1群4型禽腺病毒的分离鉴定及Fiber-2蛋白的免疫效果分析 被引量：6

11

作者 程增青 范根成 +4 位作者 窦小龙 刘红祥 申茂欣 徐全刚 杨汉春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2463-2471,共9页

旨在鉴定河南某蛋鸡场以心包积液、肝肿大出血为特征的病原,并对病原的免疫原性蛋白进行表达和效果分析。本研究采用病毒分离、血清学试验、PCR检测及测序分析、动物回归试验、大肠杆菌表达、蛋白纯化、攻毒保护等方法进行研究。结果显... 旨在鉴定河南某蛋鸡场以心包积液、肝肿大出血为特征的病原,并对病原的免疫原性蛋白进行表达和效果分析。本研究采用病毒分离、血清学试验、PCR检测及测序分析、动物回归试验、大肠杆菌表达、蛋白纯化、攻毒保护等方法进行研究。结果显示,所采集样品经卵黄囊途径接种7日龄SPF鸡胚,盲传2代后获得病毒;PCR可扩增出约900 bp的Hexon基因片段,经测序,其Hexon基因与血清C4型毒株的相似性为100%;血清中和试验结果表明分离的禽腺病毒为1群血清4型禽腺病毒,命名为HN-ZK株。该毒株可在鸡胚原代肝细胞上产生CPE,病毒含量可达10^(7.5)TCID50·0.1 mL^-1。动物回归试验表明,该分离毒株可使35日龄SPF鸡100%(10/10)表现出发病症状。以分离株的DNA为模板,利用大肠杆菌原核表达系统,获得相对分子质量约为33 ku的Fiber-2蛋白,离心浓缩、纯化后蛋白含量为300 mg·mL^-1。将表达的Fiber-2蛋白用不同的剂量免疫SPF鸡,结果表明20μg·只^-1的剂量能使鸡完全抵抗强毒株的攻击,说明Fiber-2蛋白具有较好的免疫原性。本研究可为禽心包积水-肝炎综合征的诊断和基因工程亚单位疫苗的研制提供数据参考。 展开更多

关键词 I群禽腺病毒 鉴定 Fiber-2蛋白 亚单位疫苗

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兽医生物制品中常用灭活剂和冻干保护剂研究进展 被引量：6

12

作者 赵成龙 王素春 +12 位作者 庄青叶 李阳 潘子豪 孙瑞妮 张富友 肖志宇 梁晚枫 孙福亮 汪洋 黄禹丰 陈海燕 刘华雷 王楷宬 《中国动物检疫》 CAS 2021年第8期69-74,共6页

微生物灭活和冻干是兽医生物制品制备过程中的常用技术,其对生物制品的抗原含量、核酸含量、免疫原性、稳定性和保存期影响较大。了解不同灭活和冻干技术的原理和适用性,对优化生物制品制备工艺,提高制品质量均有重要意义。常用的灭活... 微生物灭活和冻干是兽医生物制品制备过程中的常用技术,其对生物制品的抗原含量、核酸含量、免疫原性、稳定性和保存期影响较大。了解不同灭活和冻干技术的原理和适用性,对优化生物制品制备工艺,提高制品质量均有重要意义。常用的灭活剂有β-丙内酯、甲醛、烷化剂、Trizol试剂等,其中使用最多的是甲醛,但其存在破坏免疫原性、有致癌风险、灭活时间长等缺点;常用的冻干保护剂有糖类、氨基酸、蛋白质和大分子明胶等,其中糖类保护剂可使细菌存活率达到83%左右,蛋白质保护剂最高可达94.90%。未来需要研制安全、有效、可控性高的新型灭活剂以及常温的冻干保护剂和稳定的液态保护剂。本文综述了兽医生物制品制备过程中常用灭活剂和冻干剂研究进展,以期为提升生物制品的质量和制备工艺提供参考。 展开更多

关键词 兽用生物制品 灭活剂 冻干保护剂 研究进展

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检测鸡毒支原体抗体的间接ELISA方法和HI试验方法的建立及初步应用 被引量：4

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作者 陈杨 孟林春 +6 位作者 郭梦娇 张成成 薄宗义 楚电峰 曹永忠 吴艳涛 张小荣 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2062-2072,共11页

本研究旨在建立一种检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)抗体的间接ELISA方法,结合HI试验,为MG感染的监测和净化提供一套有效的组合技术方案。以原核表达的VlhA 3.03重组蛋白(rVlhA)作为包被抗原,使用单一稀释法构建了关于血... 本研究旨在建立一种检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)抗体的间接ELISA方法,结合HI试验,为MG感染的监测和净化提供一套有效的组合技术方案。以原核表达的VlhA 3.03重组蛋白(rVlhA)作为包被抗原,使用单一稀释法构建了关于血清抗体滴度与1∶500血清稀释度处S/P值的回归方程lg(抗体滴度)=1.257×lg(1∶500处S/P值)+3.709,R^(2)=0.9176,S/P临界值为0.32,临界滴度是1200。经验证,rVlhA-ELISA方法具有良好的特异性、重复性,最低能检出1∶2000稀释的阳性血清。选择国内MG分离株SH/2020-1作为血凝抑制抗原建立HI试验方法。使用rVlhA-ELISA方法联合HI试验进行血清样品检测,IDEXX-MG方法作为对照,借助RT-qPCR方法监测MG感染情况。结果表明rVlhA-ELISA方法和IDEXX-MG监测的血清抗体趋势与HI复核结果均一致;rVlhA-ELISA与HI联合判定结果与IDEXX-MG符合率可达91.53%。上述结果显示,本研究建立的rVlhA-ELISA方法和HI试验具有较好的临床应用价值,可以初步应用于MG感染的临床大规模、快速筛查并对结果进行复核。 展开更多

关键词 鸡毒支原体 VlhA蛋白 抗体检测 间接ELISA

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鸭坦布苏病毒RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：4

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作者 邹敏 张青 +4 位作者 王红 刘东 刘新文 范根成 吴发兴 《中国兽药杂志》 2018年第11期14-18,共5页

为建立一种能快速检测鸭坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)的分子生物学方法,从GenBank中下载了51个具有代表性的黄病毒全基因组序列及白洋淀病毒等5个禽源黄病毒株E基因序列,进行了黄病毒E基因序列分析,应用Primer 5.0软件设计了一对引物... 为建立一种能快速检测鸭坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)的分子生物学方法,从GenBank中下载了51个具有代表性的黄病毒全基因组序列及白洋淀病毒等5个禽源黄病毒株E基因序列,进行了黄病毒E基因序列分析,应用Primer 5.0软件设计了一对引物,扩增目的片段为549 bp,进行了TMUV RT-PCR检测方法的特异性、敏感性、重复性试验,建立了TMUV RT-PCR检测方法应用该方法对收集的14份临床疑似蛋鸭鸭坦布苏病毒病发病样品进行了检测,共检出6份TMUV核酸阳性样品,检出率达42.86%。结果表明,该方法可用于水禽坦布苏病毒病的临床快速诊断、检测及流行病学调查。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 E基因 RT-PCR

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2012年—2015年我国部分地区禽偏肺病毒的分子流行病学分析 被引量：12

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作者 朱艳梅 宫晓 +6 位作者 郭伟伟 徐保娟 李陆梅 郎枫 刘红祥 刘东 范根成 《动物医学进展》 北大核心 2016年第10期30-34,共5页

为了调查鸡群中禽偏肺病毒（aMPV）的流行情况,本研究从江苏、辽宁、河南、山东、河北等地有肿头症状的鸡群中取其鼻甲骨和鼻黏液进行RT-PCR检测,随机选取9株PCR阳性产物对其F基因进行序列测定与遗传进化分析。结果表明,280份病料中检... 为了调查鸡群中禽偏肺病毒（aMPV）的流行情况,本研究从江苏、辽宁、河南、山东、河北等地有肿头症状的鸡群中取其鼻甲骨和鼻黏液进行RT-PCR检测,随机选取9株PCR阳性产物对其F基因进行序列测定与遗传进化分析。结果表明,280份病料中检出阳性样品142份,阳性检出率达50.7%;9个试验毒株之间F基因同源性为99.4%～100%,与B型aMPV代表株的同源性为97.7%～99.9%,而与A型、C型和D型aMPV代表株的同源性为71.9%～79.4%;由遗传进化树可见,这9株aMPV均属于B型分支。说明我国鸡群中目前存在aMPV感染,B型毒株是优势流行基因型,从而为禽偏肺病毒疫苗的开发提供了流行病学资料。 展开更多

关键词 禽偏肺病毒 流行病学 F基因 同源性

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2019—2021年我国29个省级行政区鸡传染性支气管炎流行病学调查 被引量：14

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作者 李彬 韩晓青 +7 位作者 刘红祥 宋姗姗 于静 范庆增 张宇龙 谭鹏 杜元钊 刘东 《中国动物检疫》 CAS 2022年第4期19-25,共7页

为了解鸡传染性支气管炎病毒(IBV)在我国的流行规律,通过RT-PCR方法,对2019—2021年从我国29个省级行政区送检的38442份疑似IBV感染样品进行病原检测和鉴定,对检出的阳性样品进行S1基因测序分型,然后对检测结果进行时间、空间和群间统... 为了解鸡传染性支气管炎病毒(IBV)在我国的流行规律,通过RT-PCR方法,对2019—2021年从我国29个省级行政区送检的38442份疑似IBV感染样品进行病原检测和鉴定,对检出的阳性样品进行S1基因测序分型,然后对检测结果进行时间、空间和群间统计分析。结果显示:共检出6436份IBV阳性样本,阳性检出率为16.7%。2019—2021年的IBV阳性检出率分别为12.5%、16.4%、21.0%,呈逐年增长趋势:阳性检出率呈现一定的季节性变化特点,7—9月检出率(11.3%~15.4%)较低,而3—6月(17.3%~19.3%)和10—12月(17.5%~19.0%)较高。全国29个省级行政区中有27个检出阳性样品,其中东部和中部家禽养殖密集区阳性检出率较高,而西部和北部地区较低。白羽肉鸡阳性检出率最高(28.9%),肉种鸡阳性检出率最低(5.0%),0~6周龄阶段IBV感染较为严重。共检出5种基因型,其中QX型(66.5%)、GVI型(27.7%)占比较高,为当前流行的优势基因型;不同品种鸡群中流行的基因型存在一定差异,白羽肉鸡群中以QX和GVI型为主,而其他鸡群中流行的基因型较为复杂;QX型0~3周龄(33.2%)、GVI型3~6周龄(66.4%)阳性检出数量占比较高,6周龄以后占比均较低(<14.0%)。结果表明:我国鸡群中IBV感染普遍,尤其是家禽养殖密集区,且流行呈逐年加重趋势;冬春或秋冬季节多发,小日龄鸡群感染严重;流行基因型复杂,以QX型和GVI型多见。结果提示,我国的IB防控面临较大压力与挑战,需要加强优势基因型疫苗的研发,重点做好小日龄鸡群的IB防控。 展开更多

关键词 鸡传染性支气管炎 基因型 流行病学调查

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2020-2021年我国部分省份禽呼肠孤病毒分子流行病学调查 被引量：11

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作者 李彬 韩晓青 +8 位作者 刘平 刘红祥 宋姗姗 于静 范庆增 张宇龙 谭鹏 杜元钊 刘东 《中国动物检疫》 CAS 2022年第8期6-11,共6页

近年来,禽呼肠孤病毒(ARV)在我国白羽肉鸡群中的感染率呈上升趋势,流行范围较广,给我国肉鸡养殖企业带来了较大经济损失。ARV易变异重组,因此全面了解其分子流行病学特征具有十分重要的意义。为了解我国白羽肉鸡群中ARV的遗传变异特点,2... 近年来,禽呼肠孤病毒(ARV)在我国白羽肉鸡群中的感染率呈上升趋势,流行范围较广,给我国肉鸡养殖企业带来了较大经济损失。ARV易变异重组,因此全面了解其分子流行病学特征具有十分重要的意义。为了解我国白羽肉鸡群中ARV的遗传变异特点,2020—2021年从山东、河北、福建、安徽、辽宁、江苏等6个省份收集疑似ARV感染样品,采用RT-PCR方法筛选阳性样本,然后对阳性样本进行σC基因(1088 bp)测序,根据测序结果分析ARV不同基因型分布规律及占比。结果显示:2020—2021年,从6个省份中,经RT-PCR检测,检出ARV阳性样品157份,总阳性检出率为62.1%,不同省份的阳性检出率为44.4%~77.3%。157份阳性样品可分为6个基因型,其中基因1型61份(38.85%)、基因2型41份(26.11%)、基因3型15份(9.56%)、基因4型9份(5.73%),基因5型30份(19.11%),基因6型1份(0.64%);61份基因1型样品中,38份与标准ARV疫苗株(S1133)属于同一亚分支,另外23份与4599参考株处于单独的另一亚分支。结果表明:我国肉鸡群中存在一定程度的ARV流行;流行的ARV基因型较为复杂,且存在基因1型变异毒株,当前的疫苗株已不能对其提供足够的保护。结果提示,今后需要进一步开展ARV感染监测,评估其流行及变异情况,调整免疫策略,加快新疫苗等防疫技术及产品研发。本研究初步了解了我国部分省份的ARV分子流行病学特征,对我国ARV感染的防控具有重要意义,也为变异株新型疫苗研发提供了依据。 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒 分子流行病学 σC基因

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猪细小病毒PCR检测方法的建立与应用 被引量：7

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作者 邹敏 李陆梅 +3 位作者 宫晓 王红 杨旭兵 范根成 《中国动物检疫》 CAS 2016年第8期94-97,共4页

参考Gen Bank中发表的猪细小病毒(PPV)VP2基因序列,应用Primer5.0软件设计了一对引物,预期目的条带约591 bp。对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了试验,建立了PPV的PCR检测方法。符合性实验结果表明,该PCR方法优于HA、VI以及IHA。... 参考Gen Bank中发表的猪细小病毒(PPV)VP2基因序列,应用Primer5.0软件设计了一对引物,预期目的条带约591 bp。对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了试验,建立了PPV的PCR检测方法。符合性实验结果表明,该PCR方法优于HA、VI以及IHA。使用该方法对215份病料进行了检测,检出阳性样品25份,检出率为11.63%。结果表明,该方法可用于PPV的诊断及流行病学监测。 展开更多

关键词 猪细小病毒 VP2基因 聚合酶链式反应 检测

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2012—2018年山东省部分地区猪瘟分子流行病学研究 被引量：6

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作者 邹敏 宫晓 +7 位作者 张青 杨旭兵 于可超 刘东 刘蕾 李陆梅 刘拥军 范根成 《中国动物检疫》 CAS 2019年第10期20-26,共7页

为了解山东省不同地区猪群中猪瘟病毒(CSFV)分子流行病学特点,采用RT-PCR方法,对2012—2018年收集到的79份临床疑似猪瘟病例组织样品,进行E2基因主要抗原区域扩增与序列测定,对获取的59个CSFVE2基因主要抗原区域序列进行遗传演化分析,... 为了解山东省不同地区猪群中猪瘟病毒(CSFV)分子流行病学特点,采用RT-PCR方法,对2012—2018年收集到的79份临床疑似猪瘟病例组织样品,进行E2基因主要抗原区域扩增与序列测定,对获取的59个CSFVE2基因主要抗原区域序列进行遗传演化分析,并构建了遗传发育进化树。结果显示:7株CSFV属1.1亚型,其中有3个毒株的E2基因与疫苗株E2基因几乎一致,提示这7个毒株可能来自疫苗毒或为类疫苗毒株;SDJZ-15株归属2.1b亚型,其E2基因推导氨基酸仅A51(丙氨酸)突变为V51(缬氨酸);其他51个毒株属2.1d亚型,与2型CSFV的E2基因主要抗原区(28~90aa)氨基酸序列相比发生了4处突变,总体保持稳定。研究结果表明,2.1亚群中的2.1d分支CSFV是山东省当前的优势流行毒株。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2基因 基因型 遗传变异

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2020年我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征分子流行病学调查 被引量：11

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作者 梁俊超 赵翔 +7 位作者 刘红祥 袁飞 李坤 郝尧光 王宗升 王辉之 刘东 杜元钊 《中国动物检疫》 CAS 2022年第8期17-25,共9页

为了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行及遗传变异情况,2020年对来自7个省的570份疑似PRRSV感染样品进行RT-PCR检测,并对60个PRRSV阳性样品进行ORF5基因测序及分析比较。... 为了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行及遗传变异情况,2020年对来自7个省的570份疑似PRRSV感染样品进行RT-PCR检测,并对60个PRRSV阳性样品进行ORF5基因测序及分析比较。RT-PCR检测结果显示,2020年送检样品中,PRRSV阳性检出率为23.68%(135/570),其中保育猪病料的阳性检出率最高,为32.24%(108/335)。同源性对比及遗传进化分析结果显示,60个PRRSV均为PRRSV2(美洲株),主要属于谱系1和谱系8,占比分别为51.67%和43.33%。氨基酸分析结果显示,60个PRRSV的GP5蛋白氨基酸以点突变为主,其中10个PRRSV的GP5蛋白氨基酸出现缺失突变,且非中和表位、中和表位、潜在毒力位点及N-糖基化位点均发生不同程度的变异。结果表明,保育猪群为PRRSV高发病群体,谱系1 PRRSV或已成为国内流行优势毒株,且PRRSV不断发生变异,这或许会影响现有疫苗的免疫保护效果。因此,针对PRRS需要综合防控,除选用安全有效的PRRSV弱毒活疫苗进行免疫外,加强猪场生物安全及饲养管理也极其重要。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征 ORF5基因 分子遗传变异

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