表达IFN-α的重组猪繁殖与呼吸综合病毒的构建及生物学特性分析

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作者 黄静 王玉旭 +5 位作者 王豪 陈樱 欧阳康 黄伟坚 黄稳妃 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期48-53,共6页

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害我国生猪业的重要疫病之一,其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),是一种免疫抑制性病毒。干扰素(IFN)是一类具有免疫调节功能和抗病毒作用的细胞因子。IFN-α除更直接的抗病毒作用外,还可以调节宿主... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害我国生猪业的重要疫病之一,其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),是一种免疫抑制性病毒。干扰素(IFN)是一类具有免疫调节功能和抗病毒作用的细胞因子。IFN-α除更直接的抗病毒作用外,还可以调节宿主的先天性和适应性免疫。论文构建表达IFN-α的重组PRRSV,分析重组病毒的生物学特性以及IFN-α的生物学活性。通过反向遗传操作方法将IFN-α插入到PRRSV ORF1b和ORF2a之间,重组质粒转染细胞后可以拯救出重组病毒(rGXAM-P-IFN-α)。插入到PRRSV基因组中的IFN-α可遗传稳定9代。重组病毒生长特性分析可发现rGXAM-P-IFN-α复制能力显著低于亲本病毒。rGXAM-P-IFN-α感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)可显著上调抗病毒基因(PKR,ISG15和ISG54)mRNA表达水平,为进一步研发新型PRRSV疫苗提供参考。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 感染性克隆 Α干扰素 抗病毒基因

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伪狂犬病病毒CD8^(+)T细胞表位的鉴定

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作者 黄香梅 王旭英 +9 位作者 耿鑫梅 奚媖牡 廖奕洁 张广欣 莫筱可 陈樱 欧阳康 韦祖樟 黄伟坚 覃一峰 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期52-58,共7页

伪狂犬病病毒(PRV)是危害养猪业的重要病原,但目前对其感染后诱导的细胞免疫尤其是T细胞抗原表位的鉴定方面研究较少。该研究以C57BL/6小鼠作为PRV感染的动物模型,利用生物信息学软件预测并合成了16条PRV gB、gC和gD蛋白上的H-2b限制性C... 伪狂犬病病毒(PRV)是危害养猪业的重要病原,但目前对其感染后诱导的细胞免疫尤其是T细胞抗原表位的鉴定方面研究较少。该研究以C57BL/6小鼠作为PRV感染的动物模型,利用生物信息学软件预测并合成了16条PRV gB、gC和gD蛋白上的H-2b限制性CD8^(+)T细胞表位,经ELISpot、胞内细胞因子染色和CFSE细胞增殖试验检测发现,位于gD蛋白上的多肽^(371)CVYIFFRL^(378)可显著激活CD8^(+)T细胞产生IFN-γ,并促进CD8^(+)T细胞明显增殖,说明该表位属于PRV特异性CD8^(+)T细胞表位。将该表位氨基酸序列与NCBI上16株参考毒株及作者实验室2株PRV毒株的gD蛋白氨基酸序列进行序列比对,发现研究鉴定的T细胞表位高度保守,提示该表位可刺激机体产生对不同亚型PRV感染的交叉保护力。研究结果将为PRV表位疫苗的研制及PRV感染与免疫机制研究奠定基础。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 CD8^(+)T细胞表位 表位疫苗

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谱系1和8重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定与遗传进化分析

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作者 邹舟 黎颖 +2 位作者 韦莹莹 刘惠僮 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2025年第1期29-37,共9页

2023年从广西疑似发生猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪场的病猪肺脏组织中分离到1株PRRSV,将其命名为GXWZ20230831。采用RT-PCR扩增其全基因组序列并测序,分析遗传进化特点。结果显示,GXWZ20230831能够在Marc-145细胞上增殖,且产... 2023年从广西疑似发生猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪场的病猪肺脏组织中分离到1株PRRSV,将其命名为GXWZ20230831。采用RT-PCR扩增其全基因组序列并测序,分析遗传进化特点。结果显示,GXWZ20230831能够在Marc-145细胞上增殖,且产生明显的细胞病变;该毒株全基因组长度为15019个核苷酸(nt),与基因2型PRRSV谱系1 NADC30-like毒株的同源性最高,为94.0%,与基因1型PRRSV代表毒株Lelystad virus同源性最低,仅为60.0%;通过Nsp2氨基酸序列比对,结果发现GXWZ20230831存在NADC30-like典型的131(111+1+19)个氨基酸的不连续缺失模式;与美洲型代表株VR2332相比,GXWZ20230831的GP5蛋白在非中和抗原表位发生了V27A、V185A以及R191K 3处突变,同时在GP5蛋白中存在4个潜在的N-糖基化位点;构建的全基因组序列、nsp2基因、ORF5基因遗传进化树均显示该毒株处于谱系1的分支;重组分析表明,GXWZ20230831是1株以谱系1经典毒株NADC30为骨架,谱系8毒株提供重组片段的重组毒株,重组断点位于基因组的nsp1(458-1821 nt)和Nsp4(5405-8179 nt)中。研究结果可为掌握广西地区的PRRSV遗传变异规律提供参考,为制定防控措施提供科学依据。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离鉴定 重组 遗传进化分析

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携带H1N1 pdm09基因的重配猪流感病毒分子流行特征研究进展 被引量：1

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作者 余良政 丁仰保 +9 位作者 何剑桥 刘林林 崔柏杨 郭嘉宁 曾昊 郭金凡 韦祖樟 欧阳康 黄伟坚 陈樱 《动物医学进展》 北大核心 2021年第3期87-91,共5页

在2009年甲型H1N1流感(H1N1 pdm09)大流行暴发初期,该病毒就已经成功地潜入到了猪群当中,继而参与到了猪流感病毒(SIV)的进化过程,通过不断地重配和适应,促进了新型SIV变异毒株的产生。目前,世界各地的猪群中普遍流行着携带有H1N1 pdm0... 在2009年甲型H1N1流感(H1N1 pdm09)大流行暴发初期,该病毒就已经成功地潜入到了猪群当中,继而参与到了猪流感病毒(SIV)的进化过程,通过不断地重配和适应,促进了新型SIV变异毒株的产生。目前,世界各地的猪群中普遍流行着携带有H1N1 pdm09基因片段的新型SIV,其重配形式呈现多样化。值得一提的是,由于H1N1 pdm09毒株的内部基因具有广泛的基因相容性,不同亚型、不同谱系的人源流感病毒、禽源流感病毒和本地猪流感病毒更倾向与它们优先发生重组。重配后的子代病毒较亲本毒株容易获得选择优势,能够在猪群中建立稳定的遗传谱系。研究发现H1N1 pdm09部分独特的内部基因片段在其高效的人际间传播过程中发挥着决定性的作用。一旦这类新型SIV成功突破种间屏障,获得适应新的哺乳动物的能力,将会对人类健康造成潜在的威胁。论文综述了携带有H1N1 pdm09基因的新型重配SIV的分子流行情况,特别就H1N1 pdm09内部基因与重组病毒致病性、传播能力等相关的分子基础进行了系统地综述,为防控新型SIV的暴发和保障公共卫生安全提供依据。 展开更多

关键词 H1N1 pdm09 基因 重配猪流感病毒 分子流行特征

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猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立 被引量：1

5

作者 覃建光 姚静 +7 位作者 刘文波 刘嘉琪 陈国昌 任同伟 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2024年第9期1-6,共6页

为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白多克隆抗体,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,通过PCR扩增N蛋白基因,将N蛋白基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pE... 为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白多克隆抗体,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,通过PCR扩增N蛋白基因,将N蛋白基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-N。将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞中,通过IPTG诱导N蛋白表达,将纯化后的重组N蛋白免疫小鼠,获得N蛋白多克隆抗体。将纯化后的N蛋白作为抗原,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,并评估该方法的特异性、重复性和准确性。结果表明,表达的重组N蛋白呈可溶性,制备的N蛋白多克隆抗体ELISA效价能达到1∶2048000,IFA和Western blot结果表明制备的鼠多克隆抗体能特异性识别PRRSV N蛋白。建立的间接ELISA方法特异性良好,重复性试验变异系数均小于10%,且与同类型商品化试剂盒结果比较,符合率达到91.10%,可为PRRSV N蛋白的免疫学检测和结构功能的研究提供参考。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白 原核表达 多克隆抗体 间接ELISA

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表达O型口蹄疫病毒VP1蛋白的重组塞内卡病毒的构建与鉴定 被引量：1

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作者 黄凯 王豪 +7 位作者 牛晨霞 农作荣 莫勇芳 刘文波 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2023年第1期1-7,共7页

A型塞内卡病毒(SVA)是近年来新流行的一种传染性病原,与口蹄疫病毒(FMDV)具有相似的基因组结构,所致临床症状也十分相似。为了研发一种新型的基因工程活载体疫苗,用于预防塞内卡病毒感染和口蹄疫,以SVA全长感染性克隆pSVA-GX01为基础,在... A型塞内卡病毒(SVA)是近年来新流行的一种传染性病原,与口蹄疫病毒(FMDV)具有相似的基因组结构,所致临床症状也十分相似。为了研发一种新型的基因工程活载体疫苗,用于预防塞内卡病毒感染和口蹄疫,以SVA全长感染性克隆pSVA-GX01为基础,在SVA 2A与2B基因之间插入O型FMDV的VP1基因,经双酶切及测序鉴定,成功获得了重组质粒pSVA-FMDV-VP1-O。将重组质粒转染BHK-21细胞,拯救获得重组病毒rSVA-FMDV-VP1-O,间接免疫荧光试验鉴定显示,该重组病毒可在细胞中表达O型FMDV的VP1蛋白。对该重组病毒进行体外生长增殖特性以及遗传稳定性分析表明,重组毒株和亲本毒株在BHK-21细胞上具有相似的增殖特性,插入的FMDV VP1基因可在细胞传代过程中稳定存在6代。研究结果为开发以塞内卡病毒为载体构建表达口蹄疫病毒VP1蛋白的重组基因工程活载体疫苗提供了参考。 展开更多

关键词 A型塞内卡病毒 口蹄疫病毒 VP1蛋白 重组病毒

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塞内卡病毒3D蛋白的截短表达及多克隆抗体的制备 被引量：3

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作者 莫勇芳 王豪 +6 位作者 刘文波 何启杰 隋梦琪 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2023年第9期24-28,共5页

A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是一种能引起猪特发性水疱病(Porcine idiopathic vesicular disease,PIVD)的病原体。SVA 3D蛋白主要编码RNA依赖的RNA聚合酶,与病毒的RNA复制密切相关。为制备3D蛋白的多克隆抗体,试验构建SVA 3D蛋白... A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是一种能引起猪特发性水疱病(Porcine idiopathic vesicular disease,PIVD)的病原体。SVA 3D蛋白主要编码RNA依赖的RNA聚合酶,与病毒的RNA复制密切相关。为制备3D蛋白的多克隆抗体,试验构建SVA 3D蛋白基因截短片段的原核表达质粒pET-32a-3D,将重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,经诱导表达、纯化获得重组蛋白。用重组蛋白免疫新西兰大白兔后收集血清,获得了SVA 3D蛋白的多克隆抗体。将SVA感染BHK-21细胞,用制备的3D蛋白的抗体进行IFA和Western blot检测,结果显示,用制备的3D蛋白抗体能检测在SVA感染细胞中表达的3D蛋白,说明制备的3D蛋白多克隆抗体与3D蛋白反应性良好,为后续SVA致病机制的深入研究提供材料储备。 展开更多

关键词 A型塞内卡病毒 3D蛋白 原核表达 多克隆抗体

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副溶血弧菌与嗜水气单胞菌双重PCR检测方法的建立 被引量：1

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作者 许佳乐 陈忠伟 +11 位作者 陈婷婷 许艺兰 全琛宇 卢冰霞 林森 梁盼 曾家家 江新华 秦毅斌 黄广杰 何颖 欧阳康 《中国动物检疫》 CAS 2023年第5期102-106,120,共6页

为建立一种可精准、快捷鉴别检测副溶血弧菌(VP)及嗜水气单胞菌(AH)的方法,根据GenBank公布的VP Tlh基因及AH aerA基因保守区序列,设计合成两对特异性引物,通过优化反应体系及反应程序,成功建立了一种可同时检测VP与AH的双重PCR方法,并... 为建立一种可精准、快捷鉴别检测副溶血弧菌(VP)及嗜水气单胞菌(AH)的方法,根据GenBank公布的VP Tlh基因及AH aerA基因保守区序列,设计合成两对特异性引物,通过优化反应体系及反应程序,成功建立了一种可同时检测VP与AH的双重PCR方法,并开展了特异性及敏感性试验。结果显示:VP Tlh和AH aerA基因扩增条带大小分别为500、760 bp;反应体系中Tlh与aerA基因引物最优浓度分别为7.5、10.0 nmol/L,反应程序中最佳退火温度为56.8℃;该方法对VP、AH的最低可检出细菌浓度均为1.2×10^(3)CFU/mL;对地衣芽孢杆菌、微小杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡阳芽孢杆菌、普通变形杆菌、维氏气单胞菌、布氏柠檬酸杆菌、豚鼠气单胞菌、霍乱弧菌、拟态弧菌、简氏气单胞菌等其他非目标菌均无交叉反应,仅对VP和AH呈特异性阳性扩增。综上,本研究建立了一种可快速鉴别诊断VP、AH的双重PCR检测方法,其特异性强、灵敏度高,可为VP、AH等细菌性病原引发的水生动物疫病的快速诊断、监测及有效防控提供技术支持。 展开更多

关键词 双重PCR 副溶血弧菌 嗜水气单胞菌 Tlh基因 aerA基因 快速诊断

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美洛昔康在犬乳腺肿瘤诊疗中的应用 被引量：1

9

作者 魏知非 周华波 +3 位作者 黄满 谢旻晋 韦俭 陈樱 《广西畜牧兽医》 2023年第4期175-178,共4页

犬乳腺肿瘤(Canine mammary tumor,CMT)是动物临床上因乳腺细胞癌变导致的一种常见的自发性肿瘤,临床上以犬的乳腺内出现一个或多个肿瘤为特征。不同年龄和品种的犬均有发病,常见诱因是各种因素导致的性腺激素对于靶器官的反馈性调节作... 犬乳腺肿瘤(Canine mammary tumor,CMT)是动物临床上因乳腺细胞癌变导致的一种常见的自发性肿瘤,临床上以犬的乳腺内出现一个或多个肿瘤为特征。不同年龄和品种的犬均有发病,常见诱因是各种因素导致的性腺激素对于靶器官的反馈性调节作用失调[1]。10岁左右的老龄小型犬依然是高发群体,其中以贵宾犬最为多见[2]。犬共有5对乳腺,CMT多发于后两对乳腺,常见治疗手段是手术切除。美洛昔康是新一代烯醇类非甾体类解热镇痛抗炎药,高选择性作用于环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2),适用于类风湿性关节炎和骨关节炎等的疼痛、肿胀及软组织炎症、创伤性疼痛、手术后疼痛的对症治疗,与适宜的抗菌药配伍使用,可辅助治疗急性乳房炎。美洛昔康作为一种在宠物临床中广泛应用的药物,其安全性和有效性得到了宠物医生的一致认可[3]。在手术切除乳腺肿瘤后使用美洛昔康注射液,可高效抗炎、镇痛,甚至起到抑制癌细胞、防止复发的作用,配合抗生素使用效果显著并可减短疗程。南宁市华波宠物医院接诊1例老龄贵宾犬,经检查确诊为恶性CMT复发。经积极治疗,获得良好效果,至今未见复发,现将诊疗情况报告如下。 展开更多

关键词 犬乳腺肿瘤 贵宾犬 诊疗情况 动物临床 小型犬 解热镇痛抗炎药 美洛昔康 抗菌药

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一例猫死胎难产的绝育手术报告

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作者 劳月琪 黄满 +2 位作者 周华波 韦俭 陈樱 《广西畜牧兽医》 2023年第5期227-229,233,共4页

母猫绝育是阻止母猫发情和繁衍后代的有效手段,一般采用手术方法将母猫的卵巢与子宫摘除^([1])。健康猫的手术适宜年龄是5~6月龄,幼猫可以在断奶后6~8周进行手术^([2])。若患上生殖系统疾病需切除卵巢和子宫的不受时间限制。猫难产指母... 母猫绝育是阻止母猫发情和繁衍后代的有效手段,一般采用手术方法将母猫的卵巢与子宫摘除^([1])。健康猫的手术适宜年龄是5~6月龄,幼猫可以在断奶后6~8周进行手术^([2])。若患上生殖系统疾病需切除卵巢和子宫的不受时间限制。猫难产指母猫妊娠期满后不能顺利产出胎儿,胎儿异常、产道狭窄、产力不足等都是难产的常见原因。 展开更多

关键词 生殖系统疾病 绝育手术 难产 切除卵巢 胎儿异常 繁衍后代 幼猫 死胎

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猫皮肤真菌和戈托伊蠕形螨混合感染的诊治报告

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作者 何佳璇 周华波 +2 位作者 黄满 韦俭 陈樱 《广西畜牧兽医》 2023年第6期269-271,共3页

猫皮肤真菌病是临床上常见的疾病,是由真菌感染猫皮肤、被毛和爪甲后,引起猫皮肤出现圆形或不规则的脱毛、红斑、渗出、结痂、鳞屑和瘙痒等症状的一种接触性传染病[1]。猫皮肤真菌病病原主要是犬小孢子菌,传染源为患病猫,健康猫或易感... 猫皮肤真菌病是临床上常见的疾病,是由真菌感染猫皮肤、被毛和爪甲后,引起猫皮肤出现圆形或不规则的脱毛、红斑、渗出、结痂、鳞屑和瘙痒等症状的一种接触性传染病[1]。猫皮肤真菌病病原主要是犬小孢子菌,传染源为患病猫,健康猫或易感猫直接接触患病猫或者间接接触到被患病猫污染的生活用品都有可能导致感染发病。猫一旦感染,不及时治疗则转为慢性感染,使猫常年患病。猫皮肤真菌病可发生于一年四季,特别是在温暖潮湿季节,该病有着更高的发病率[2]。同时该病亦是人畜共患病[2],不仅影响猫的健康,对人类健康也存在一定风险,具有重要的公共卫生意义。猫蠕形螨病是一种由猫蠕形螨引起的疾病,常见的蠕形螨有猫蠕形螨和戈托伊蠕形螨两种,其中戈托伊蠕形螨病是一种接触传染性疾病,临床症状表现为猫体表皮肤出现红斑、皮屑、脱毛和结痂。本院2021年8月接诊一例家庭性猫皮肤病相互感染的病例,经治疗获得痊愈,现对该病例的诊疗过程进行小结,以供同行参考。 展开更多

关键词 皮肤真菌病 接触传染性 人畜共患病 蠕形螨 混合感染 间接接触 潮湿季节 托伊

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