吉西他滨对人非小细胞肺癌HCC827活性和凋亡的影响 被引量：8

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作者 张婧婧 赵庆伟 +2 位作者 杨景瑞 段巨洪 于海川 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1450-1453,共4页

目的：研究吉西他滨对人非小细胞肺癌HCC827细胞活性以及凋亡的影响,以及与Bcl-2表达的关系。方法：采用cell counting kit-8法、细胞核Hochest33258染色法、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法等多种方法,体外研究吉西他滨对人非小细... 目的：研究吉西他滨对人非小细胞肺癌HCC827细胞活性以及凋亡的影响,以及与Bcl-2表达的关系。方法：采用cell counting kit-8法、细胞核Hochest33258染色法、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法等多种方法,体外研究吉西他滨对人非小细胞肺癌HCC827的活性、凋亡和细胞周期的影响;采用Western blot法,观察药物作用后细胞中Bcl-2蛋白表达的变化。结果：吉西他滨（0.1～1 000 ng/ml）对人非小细胞肺癌HCC827活性具有抑制作用,并有促凋亡效应。此外,可以将细胞阻滞在S期。在吉西他滨诱导的细胞凋亡过程中,凋亡因子Bcl-2蛋白的表达下调。结论：吉西他滨可以抑制人非小细胞肺癌HCC827细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,S期周期阻滞,其诱导的凋亡可能是其杀死肿瘤细胞的主要机制之一,此外,凋亡与相关基因Bcl-2蛋白的表达具有一定关系。 展开更多

关键词 细胞凋亡 人非小细胞肺癌HCC827细胞 吉西他滨 BCL-2蛋白

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长链非编码RNA HOTAIR通过调控PIK3R3促进肝癌HepG2细胞的转移和侵袭 被引量：7

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作者 张婧婧 吴伟 +3 位作者 王鹏 杨景瑞 段巨洪 于海川 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1775-1781,共7页

目的:探讨长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)对肝癌Hep G2细胞转移和侵袭的影响。方法:运用免疫组化技术检测磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基3(phosphoinositide-3-kinase regulatory subunit 3,PIK3R3)在正常肝脏组织和肝癌组织的表达;运... 目的:探讨长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)对肝癌Hep G2细胞转移和侵袭的影响。方法:运用免疫组化技术检测磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基3(phosphoinositide-3-kinase regulatory subunit 3,PIK3R3)在正常肝脏组织和肝癌组织的表达;运用q PCR和Western blot检测慢病毒LV3-sh HOTAIR和LV3-sh PIK3R3对HOTAIR和PIK3R3基因的沉默效率;Transwell侵袭实验检测HOTAIR和PIK3R3的表达对肝癌细胞Hep G2侵袭能力的影响;划痕实验检测HOTAIR和PIK3R3的表达对肝癌细胞Hep G2迁移能力的影响;q PCR检测沉默HOTAIR和PIK3R3后miR-214的表达;q PCR检测转染miR-214 mimics和miR-214 inhibitor后HOTAIR和PIK3R3的表达;双萤光素酶报告基因系统检测miR-214对HOTAIR和PIK3R3转录活性的影响。结果:和正常肝组织比较,PIK3R3在肝癌组织中的表达明显增加;沉默HOTAIR和PIK3R3基因后,肝癌细胞株Hep G2的侵袭和转移能力明显降低;沉默HOTAIR和PIK3R3基因后,miR-214表达上调;转染miR-214 mimics后,HOTAIR和PIK3R3的表达降低;转染miR-214 inhibitor后,HOTAIR和PIK3R3的表达上调;双萤光素酶报告基因系统检测结果显示miR-214可以直接调控HOTAIR和PIK3R3的转录活性。结论:HOTAIR可以通过miR-214调控PIK3R3的表达。 展开更多

关键词 HOX转录反义RNA 肝癌 磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基3

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基于CRISPR对大肠埃希菌O157∶H7的检测 被引量：5

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作者 梁文娟 张荣光 +6 位作者 段广才 王颖芳 洪丽娟 张冰 王鹏飞 郗园林 杨海燕 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期748-753,共6页

目的基于成簇的规律间隔短回文重复序列（CRISPR）,建立对大肠埃希菌O157∶H7的新型检测方法。方法应用PCR扩增实验室保存的443株肠道细菌（310株非O157∶H7大肠埃希菌、35株大肠埃希菌O157∶H7、89株志贺菌和9株沙门菌）的CRISPR1和CRI... 目的基于成簇的规律间隔短回文重复序列（CRISPR）,建立对大肠埃希菌O157∶H7的新型检测方法。方法应用PCR扩增实验室保存的443株肠道细菌（310株非O157∶H7大肠埃希菌、35株大肠埃希菌O157∶H7、89株志贺菌和9株沙门菌）的CRISPR1和CRISPR2,并将PCR产物测序;提取CRISPR database数据库中（标准法）100株肠道细菌（47株非O157∶H7大肠埃希菌、5株大肠埃希菌O157∶H7、9株志贺菌和39株沙门菌）的CRISPR1和CRISPR2序列。使用CRISPR Finder在线软件分析PCR产物测序序列和CRISPR database数据库的CRISPR序列。Clustal X软件进行间隔序列比对。比较标准法和PCR扩增CRISPR两种方法检测大肠埃希菌O157∶H7的一致性。结果共分析543株肠道细菌,其中75.6%的非O157∶H7大肠埃希菌、75.5%志贺菌、91.7%沙门菌和95%O157∶H7大肠埃希菌含有CRISPR1,其间隔序列数目为3～26、2～9、2～32、3。57.1%的非O157∶H7大肠埃希菌、77.6%志贺菌、85.4%沙门菌和100%O157∶H7大肠埃希菌含有CRISPR2,其间隔序列数目为1～20、1～6、2～27、1或4个。95%的O157∶H7大肠埃希菌的CRISPR1和90%CRISPR2分别含有3条独特间隔序列（S1-1,S1-2,S1-3）和1条独特间隔序列（S2-1）。间隔序列比对结果显示,S1-1＋S1-2＋S1-3和S2-1检测O157∶H7大肠埃希菌的特异性分别是100%和99.6%。标准法检测和PCR扩增CRISPR1和CRISPR2检测大肠埃希菌O157∶H7的一致性分别达99.6%和99.3%。基于CRISPR检测大肠埃希菌O157∶H7在模拟样品中的应用,结果显示在原样品大肠埃希菌O157∶H7浓度约2.3CFU/mL时,经12h增菌后即能检测出来。大肠埃希菌O157∶H7聚类分析显示,40株O157∶H7大肠埃希菌可分为3类。结论基于CRISPR的大肠埃希菌O157∶H7的检测方法,可以作为监测大肠埃希菌O157∶H7感染和高毒株大肠埃希菌O157∶H7有价值的流行病学工具。 展开更多

关键词 大肠埃希菌O157∶H7 成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR) 聚合酶链反应 检测

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志贺菌成簇的规律间隔短回文重复序列的检测及同源性分析 被引量：4

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作者 王鹏飞 王颖芳 +5 位作者 段广才 王琳琳 郭向娇 薛泽润 郗园林 杨海燕 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期261-268,I0003,共9页

目的:检测志贺菌成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR),并与GenBank全基因组中志贺菌重复序列和间隔序列对比,分析其结构特征及同源性。方法:利用PCR法扩增获得志贺菌CRISPR,采用生物信息学方法对重复序列及间隔序列进行同源性分析;运... 目的:检测志贺菌成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR),并与GenBank全基因组中志贺菌重复序列和间隔序列对比,分析其结构特征及同源性。方法:利用PCR法扩增获得志贺菌CRISPR,采用生物信息学方法对重复序列及间隔序列进行同源性分析;运用多序列比对分析间隔序列特点及其与侧翼序列间的联系;BLAST分析间隔序列与质粒和噬菌体的同源性;weblogo分析重复序列碱基频率及RNAfold预测其RNA二级结构;重复序列的同源聚类分析并用BLAST分析重复序列与其他细菌的同源性。结果:被测3株临床志贺菌及9株全基因组志贺菌中均含有不同数量CRISPR;同一个CRISPR中,间隔序列有的相似、有的完全不同,某些CRISPR间隔序列的部分序列与CRISPR侧翼序列存在同源性,某些间隔序列可能是信息基因和操纵基因的拼接重组;重复序列保守性不一致,可能与细菌进化存在一定的联系,重复序列碱基的差异影响茎的长度,从而影响二级结构的稳定性及CRISPR的功能。重复序列与个别远缘菌种具有较高的同源性。结论:志贺菌存在多样的CRISPR结构,不同CRISPR的重复序列保守性不同。某些间隔序列部分与CRISPR侧翼序列同源,某些间隔序列是多基因拼接而成。 展开更多

关键词 志贺菌 成簇的规律间隔短回文重复序列 重复序列 间隔序列 同源性

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基于BPNN的手足口病重症化进程中的相关因素变化及预测分析 被引量：2

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作者 马晓梅 闫国立 +5 位作者 刘颖 孙春阳 隋美丽 任静朝 郗园林 段广才 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期721-725,共5页

目的探讨BP神经网络（BPNN）模型在儿童手足口病（HFMD）重症化进程预测中的应用价值,为HFMD重症病例早期识别提供参考依据。方法采用MATLAB 7.0软件对2013年4～6月河南郑州某医院收治的445例HFMD患儿临床资料构建BPNN模型,得出平均影... 目的探讨BP神经网络（BPNN）模型在儿童手足口病（HFMD）重症化进程预测中的应用价值,为HFMD重症病例早期识别提供参考依据。方法采用MATLAB 7.0软件对2013年4～6月河南郑州某医院收治的445例HFMD患儿临床资料构建BPNN模型,得出平均影响值（MIV）排序并归一化;从中挑选32例符合重症标准且自发病到重症的病例作为重症组,对照组纳入60例普通病例,以较大MIV值的因素为变量重新整理数据,统计分析得出单个因素水平和综合因素水平在重症化期间的变化趋势,阐述其与HFMD重症早期识别的关系。结果在HFMD重症化进程中,精神差、颈强直、易惊的变化是先上升,重症当天及前一天平稳且至最高,随后下降;呼吸频率、心率、嗜睡、热程≥3d及血糖水平的变化是先升后降,重症当天最高;手足抖动的变化是先升后降,重症前一天最高;呕吐呈下降趋势;热峰大致呈下降趋势,重症当天略微回升,之后降至正常体温;白细胞计数变化基本不大,均高于正常值范围,在重症次日恢复至正常值水平;综合因素水平是先上升至重症当天并达到最高,之后下降。结论 BPNN模型可用于分析HFMD重症化进程中的相关因素变化,可为重症病例的早期识别提供参考依据。 展开更多

关键词 BPNN HFMD 重症化 MIV

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mTORC1信号促进前成骨细胞MC3T3-E1的分化成熟 被引量：2

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作者 张婧婧 张楠 +4 位作者 吴伟 王鹏 杨景瑞 段巨洪 于海川 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1573-1577,共5页

目的:研究mTORC1信号对前成骨细胞MC3T3-E1向成骨细胞分化成熟的调控作用。方法:通过向MC3T3-E1转染pcDNA3.1-Raptor,对mTORC1信号相关蛋白Raptor进行过表达。向MC3T3-E1转染Raptor siRNA,对mTORC1信号蛋白Raptor进行基因沉默。通过Real... 目的:研究mTORC1信号对前成骨细胞MC3T3-E1向成骨细胞分化成熟的调控作用。方法:通过向MC3T3-E1转染pcDNA3.1-Raptor,对mTORC1信号相关蛋白Raptor进行过表达。向MC3T3-E1转染Raptor siRNA,对mTORC1信号蛋白Raptor进行基因沉默。通过Real-time PCR方法测定Raptor的基因表达,通过蛋白免疫印迹法测定Raptor蛋白水平,并通过茜素红染色检测成骨矿化情况,以测定成骨分化程度。通过Real-time PCR检测成骨分化指标的基因表达。结果:与对照组相比,Raptor过表达组的Raptor mRNA和蛋白水平明显增加;茜素红染色结果显示Raptor过表达组染色更深,说明成骨矿化程度更高;荧光定量PCR结果显示,Raptor过表达组的成骨分化标记基因以及成骨转录因子的表达量均高于对照组。与对照组相比,Raptor siRNA组的Raptor mRNA和蛋白水平明显降低;茜素红染色结果显示Raptor siRNA组染色更浅,说明成骨矿化程度更低;荧光定量PCR结果显示,Raptor siRNA组的成骨分化标记基因以及成骨转录因子的表达量均低于对照组。结论:mTORC1信号促进前成骨细胞MC3T3-E1向成骨细胞分化成熟。 展开更多

关键词 mTORC1信号 成骨分化 前成骨细胞

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豫北地区汉族无偿献血者血小板特异性抗原多态性研究 被引量：4

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作者 孙学兰 杨志美 +4 位作者 张婧婧 袁志军 李俊英 庞桂芝 张晨光 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期602-606,共5页

目的:研究豫北地区汉族无偿献血人群血小板抗原(HPA-1-5、15)系统多态性,构建一定规模的血小板HPA基因资料库,为临床提供匹配的单采血小板。方法:随机采集豫北5地区500名汉族无偿献血者外周血,用PCR-SSP方法进行HPA-1-5、15系统基因分... 目的:研究豫北地区汉族无偿献血人群血小板抗原(HPA-1-5、15)系统多态性,构建一定规模的血小板HPA基因资料库,为临床提供匹配的单采血小板。方法:随机采集豫北5地区500名汉族无偿献血者外周血,用PCR-SSP方法进行HPA-1-5、15系统基因分型。基因及基因型频率采用直接计数法检测,HPA基因频率的群体分布情况采用Hardy-weinberg平衡检验,与其他地区和种族比较采用χ~2检验。结果:豫北地区无偿献血人群HPA-1-5、15血型系统基因分别为1a0.985、1b0.015;2a0.924、2b0.076;3a0.469、3b0.531;4a1.000;5a1.000;15a0.532、15b0.468。HPA-1-5、15基因型频率分别为1aa0.970、1ab0.030;2aa0.848、2ab0.152;3aa0.222、3ab0.494、3bb0.284;4aa1.000;5aa1.000;15aa0.282、15ab0.500、15bb0.218。与中国汉族人群相比,豫北地区无偿献血人群HPA-3b、5a增高,差异有统计学意义(P﹤0.05);与中国少数民族人群相比,HPA-3b、5a也升高,但HPA-2a降低(P﹤0.05)。与国外不同种族人群相比,HPA-1a、2a、3a、5a均有不同程度的升高。结论:豫北地区无偿献血人群HPA基因分布符合Hardy-weinberg平衡定律。与其他地区和国家资料相比,HPA显示出种族和地域性差异。豫北地区无偿献血人群HPA-3、15最具多态性。这为研究同种免疫性血小板减少症和开展血小板同型输注的相关研究提供理论依据。 展开更多

关键词 豫北地区 汉族献血者 血小板抗原

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BCYRN1调控miR-503通过Notch1信号通路对肺癌迁移和侵袭的影响 被引量：5

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作者 张婧婧 张轶 +7 位作者 姬颖华 张敏 李伟伟 杨庆辉 王瑾 于海川 路平 王向鹏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1453-1457,1463,共6页

目的:探讨BCYRN1调控miR-503通过Notch1信号通路对肺癌迁移和侵袭的影响机制。方法:q PCR检测不同肺癌细胞株中BCYRN1和miR-503的表达情况;免疫荧光和q PCR检测慢病毒BCYRN1+siRNA转染肺癌细胞的转染效率;双荧光素酶报告基因检测BCYRN1... 目的:探讨BCYRN1调控miR-503通过Notch1信号通路对肺癌迁移和侵袭的影响机制。方法:q PCR检测不同肺癌细胞株中BCYRN1和miR-503的表达情况;免疫荧光和q PCR检测慢病毒BCYRN1+siRNA转染肺癌细胞的转染效率;双荧光素酶报告基因检测BCYRN1与miR-503的相互作用;Transwell侵袭实验和划痕实验检测沉默BCYRN1后肺癌细胞侵袭和迁移能力的变化;Western blot检测沉默BCYRN1后Notch1信号通路蛋白的表达情况;裸鼠皮下成瘤检测沉默BCYRN1后肺癌细胞裸鼠体内成瘤能力的影响。结果:在肺癌细胞H1299中BCYRN1表达水平最高,miR-503的表达水平相对较高;免疫荧光及mRNA水平证明BCYRN1+siRNA慢病毒可以有效转染进入H1299细胞内;BCYRN19能与miR-503的3'-UTR特异性结合;沉默BCYRN1可以抑制肺癌H1299细胞的侵袭和迁移能力;沉默BCYRN1后Notch1通路蛋白表达情况相应下调;与NC组相比,BCYRN1-siRNA组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显减小。结论:BCYRN1可以靶向调节miR-503通过Notch1信号通路影响肺癌H1299细胞的侵袭和迁移能力。 展开更多

关键词 BCYRN1 肺癌 miR-503 TRANSWELL

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高脂饮食对小鼠内脏脂肪组织T细胞亚群的影响 被引量：3

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作者 邹倩蕾 张国俊 +5 位作者 郑雅静 张会杰 王瑞芳 王侠 宋向凤 王辉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期314-317,共4页

目的:探讨高脂饮食诱导的营养性肥胖小鼠脂肪组织内CD4+T淋巴细胞的变化。方法:将6周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分成2组,即正常对照组和高脂饮食组,分别饲养16周后眼底取血分离血清检测血糖、CHOL、TG、HDL和LDL水平,ELISA检测血清中TNF-... 目的:探讨高脂饮食诱导的营养性肥胖小鼠脂肪组织内CD4+T淋巴细胞的变化。方法:将6周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分成2组,即正常对照组和高脂饮食组,分别饲养16周后眼底取血分离血清检测血糖、CHOL、TG、HDL和LDL水平,ELISA检测血清中TNF-α水平;游离附睾垫脂肪组织分离细胞,流式检测CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的数量及亚群的比例。结果:与对照组比较,高脂饮食组体重、增加体重、附睾垫脂肪重量、肾周脂肪重量、血脂、血糖和TNF-α水平均有显著增加,但胸腺指数和脾脏指数两组间没有显著差别。脂肪组织内CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞数均较对照组有所增高,其中CD8+T淋巴细胞增多最显著。在CD4+T淋巴细胞中,Th1和Th17细胞显著增多,而Th2细胞未见显著变化。结论:高脂饮食可诱导脂肪组织内T淋巴细胞的增多,并向Th1和Th17方向极化。 展开更多

关键词 高脂饮食 血脂 胸腺指数 脾脏指数 T淋巴细胞

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长链非编码RNA基因CCAT2抑制TGF-β信号通路促进非小细胞肺癌细胞的增殖 被引量：2

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作者 张婧婧 化瑞芳 +7 位作者 姬颖华 张敏 李伟伟 杨庆辉 王瑾 于海川 路平 王向鹏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期122-129,共8页

目的通过体内体外实验探讨结肠癌相关转录本2(colon cancer-associated transcript 2,CCAT2)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖的影响及其调控机制。方法利用shRNA干扰NSCLC细胞(A549和H1299)CCAT2表达。实时定... 目的通过体内体外实验探讨结肠癌相关转录本2(colon cancer-associated transcript 2,CCAT2)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖的影响及其调控机制。方法利用shRNA干扰NSCLC细胞(A549和H1299)CCAT2表达。实时定量PCR(quantitative real-time reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测CCAT2表达。肿瘤成球实验和CCK-8实验检测细胞增殖。蛋白印记法检测细胞增殖标记蛋白-细胞增殖核抗原-67(antigen identified by monoclonal antibody,Ki-67)和增殖细胞核抗原(proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA),TGF-β信号通路相关蛋白转化生长因子(transforming growth factor beta,TGF-β),细胞信号转导分子Smad2(suppressor of mothers against decapentaplegic 2)和α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)的表达。结果 NSCLC细胞系(A549、H1299、H1650和H358)中CCAT2的表达显著高于正常肺脏细胞系BEAS-2B(P<0.01)。与对照组相比,转染CCAT2 shRNA后A549和H1299细胞中CCAT2的表达显著降低(P<0.01)。A549和H1299细胞中CCAT2 shRNA组细胞增殖倍数明显低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,A549和H1299细胞中CCAT2 shRNA组细胞增殖标记蛋白Ki-67和PCNA表达显著降低(P<0.01),TGF-β信号通路相关蛋白TGF-β、Smad2和α-SMA表达显著升高(P<0.01)。与对照组相比,CCAT2 shRNA组肿瘤体积显著变小(P<0.01),肿瘤组织中TGF-β信号通路相关蛋白TGF-β、Smad2和α-SMA表达显著升高(P<0.01)。结论 CCAT2可通过抑制TGF-β信号通路促进NSCLC细胞增殖和肿瘤生长。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 结肠癌相关转录本2 增殖 TGF-Β信号通路

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T细胞亚群在肥胖引起炎症中的作用 被引量：5

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作者 董莉君 王辉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1292-1295,共4页

肥胖是一种以慢性炎症为主要特征的代谢性疾病,这种炎症的发生发展与各免疫细胞如巨噬细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞等关系密切。T细胞作为一种重要的免疫细胞对肥胖时炎症的发生发挥关键作用,肥胖时各个T细胞... 肥胖是一种以慢性炎症为主要特征的代谢性疾病,这种炎症的发生发展与各免疫细胞如巨噬细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞等关系密切。T细胞作为一种重要的免疫细胞对肥胖时炎症的发生发挥关键作用,肥胖时各个T细胞亚群如CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞等比例失衡;T细胞分泌的炎症性细胞因子增多;T细胞相关基因表达异常等,这些变化可通过激活相关炎症信号通路来促进炎症的发生发展。本文综述了各个T淋巴细胞亚群在肥胖引起的炎症中的不同作用及其利用免疫细胞等治疗肥胖引起炎症的策略。 展开更多

关键词 肥胖 炎症 TH1细胞 调节性T细胞 CD8+T细胞 综述

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