小分子通常指分子量小于1 kD的天然化合物,它们在生物科学、医药卫生和环境科学等多领域有重要的研究价值。适配体(aptamers)作为一种新型的生物识别元件,可特异地与小分子等靶标以高亲和力结合。它们是由指数富集的配体系统进化(system...小分子通常指分子量小于1 kD的天然化合物,它们在生物科学、医药卫生和环境科学等多领域有重要的研究价值。适配体(aptamers)作为一种新型的生物识别元件,可特异地与小分子等靶标以高亲和力结合。它们是由指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术筛选而得的单链短核苷酸序列。与大分子靶标的适配体相比,小分子靶标的适配体常表现出筛选困难、亲和力低和特异性差等缺点。为了解决这些瓶颈问题,本文提供了一些小分子靶标适配体筛选与鉴定的策略。首先,设计小分子靶标适配体的筛选方案时,本文提出需将关注点放在文库设计、SELEX方法、扩增方法、筛选进程监测方法和适配体序列分析方法等关键环节或方法的选择上,依据实际情况选择或设计适宜的策略。其次,适配体的结构与亲和力直接影响着它们的应用,本文简要介绍了适配体二级结构和三级结构的分析方法以及常见的6种亲和力鉴定方法。最后,本文讨论了小分子靶标适配体筛选与鉴定中存在的一些问题,展望了未来发展前景。全文旨在为小分子靶标适配体筛选与鉴定的多个环节提供研究策略,为提高适配体筛选与鉴定效率提供参考。展开更多
目的:基于多重聚合酶链式反应(PCR)技术,建立并评价一种可同时快速特异鉴别熊胆粉生物来源的方法,为鉴别人工模拟混合掺假样品提供依据。方法:利用猪、牛和熊线粒体细胞色素b基因,SDS-蛋白酶K裂解法(SDS-PK)提取胆类DNA,Primer Premier ...目的:基于多重聚合酶链式反应(PCR)技术,建立并评价一种可同时快速特异鉴别熊胆粉生物来源的方法,为鉴别人工模拟混合掺假样品提供依据。方法:利用猪、牛和熊线粒体细胞色素b基因,SDS-蛋白酶K裂解法(SDS-PK)提取胆类DNA,Primer Premier 5.0软件设计可扩增不同大小DNA片段且无交叉反应的物种特异性引物,特异性扩增后,将扩增条带克隆后测序,与GenBank数据库已登记序列比对。建立并优化多重PCR,评价其特异性和灵敏度,并采用该方法鉴别27份模拟混合掺假样品。结果:建立的猪、牛和熊胆粉DNA提取方法可于2 h之内完成操作,DNA纯度分别为2.04、1.69和1.70,浓度分别为158.63、189.34和148.55 mg·L^(-1)。设计可扩增出猪、牛和熊的物种特异性引物。测序结果与GenBank数据库已登记序列同源性达99%以上。PCR体系各物种引物特异性强,无非特异扩增。应用于三重PCR体系中的引物互不干扰,检测灵敏度高,3种靶标样品任意一种DNA浓度降至1 mg·L^(-1)时均可成功检测。27份人工模拟熊胆粉不同物种及不同比例掺假样品的检测结果与预设混合情况相符,盲法随机抽样重复检测5次,结果稳定。结论:成功建立可通过一次实验同时鉴别猪、牛和熊胆粉的方法,具有简便、灵敏及高效的特点,可应用于熊胆粉及其常见动物源性掺伪的鉴别。展开更多
文摘小分子通常指分子量小于1 kD的天然化合物,它们在生物科学、医药卫生和环境科学等多领域有重要的研究价值。适配体(aptamers)作为一种新型的生物识别元件,可特异地与小分子等靶标以高亲和力结合。它们是由指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术筛选而得的单链短核苷酸序列。与大分子靶标的适配体相比,小分子靶标的适配体常表现出筛选困难、亲和力低和特异性差等缺点。为了解决这些瓶颈问题,本文提供了一些小分子靶标适配体筛选与鉴定的策略。首先,设计小分子靶标适配体的筛选方案时,本文提出需将关注点放在文库设计、SELEX方法、扩增方法、筛选进程监测方法和适配体序列分析方法等关键环节或方法的选择上,依据实际情况选择或设计适宜的策略。其次,适配体的结构与亲和力直接影响着它们的应用,本文简要介绍了适配体二级结构和三级结构的分析方法以及常见的6种亲和力鉴定方法。最后,本文讨论了小分子靶标适配体筛选与鉴定中存在的一些问题,展望了未来发展前景。全文旨在为小分子靶标适配体筛选与鉴定的多个环节提供研究策略,为提高适配体筛选与鉴定效率提供参考。
