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禽病毒活载体基因工程疫苗的研究进展 被引量:1
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作者 刘毅 金宁一 《国外兽医学(畜禽传染病)》 1998年第4期13-18,共6页
关键词 禽病 病毒活载体 基因工程 疫苗
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人尿激酶原乳腺定位转基因小鼠的建立 被引量:3
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作者 岳军明 张宏权 +6 位作者 李宝林 户荣良 俞炜源 王会信 殷震 李华 王太一 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第2期140-143,共4页
应用大鼠β乳酪蛋白基因的上游调控序列和人尿激酶原cDNA构建成功了乳腺定位表达载体.用显微注射的手段导入到受精卵的雄前核,从注射的300枚受精卵中,140枚被移植到9只假孕的受体小鼠.结果从获得的子一代小鼠中,经PC... 应用大鼠β乳酪蛋白基因的上游调控序列和人尿激酶原cDNA构建成功了乳腺定位表达载体.用显微注射的手段导入到受精卵的雄前核,从注射的300枚受精卵中,140枚被移植到9只假孕的受体小鼠.结果从获得的子一代小鼠中,经PCR和Southernblot证实,有3只转基因阳性的小鼠. 展开更多
关键词 乳腺定位表达载体 转基因 人尿激酶原cDNA
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转基因技术在医学研究中的应用
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作者 李华 刘维全 王太一 《中国实验动物学杂志》 1997年第2期112-114,共3页
关键词 转基因技术 医学研究 基因治疗 应用前景 发病机理 生物医学 基因表达
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HIV-1基质蛋白P17的原核表达与纯化 被引量:1
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作者 李钟洙 金宁一 +4 位作者 王宏伟 郭志儒 李萍 杨翰仪 殷震 《白求恩医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期19-21,共3页
目的 :HIV- 1p17基因在大肠杆菌中高效表达并纯化目的蛋白。方法 :1PCR法扩增的 HIV-1p17基因片段克隆至 p ET2 8c质粒 ;2重组质粒分别在大肠杆菌 BL 2 1、BL 2 1(DE3)、BL 2 1(DE3) plys S及 HMS174 (DE3)中表达 ;3用 Ni- NTA金属树脂... 目的 :HIV- 1p17基因在大肠杆菌中高效表达并纯化目的蛋白。方法 :1PCR法扩增的 HIV-1p17基因片段克隆至 p ET2 8c质粒 ;2重组质粒分别在大肠杆菌 BL 2 1、BL 2 1(DE3)、BL 2 1(DE3) plys S及 HMS174 (DE3)中表达 ;3用 Ni- NTA金属树脂层析法纯化目的蛋白 ;4用酶联免疫法和免疫印迹法检测纯化蛋白的特异性。结果 :重组质粒在 BL (DE3)中表达量最高 ,目的蛋白表达量占全菌体裂解物的32 % ,纯化后其纯度达 95% ,纯化蛋白可与 p17Mc Ab和 HIV- 1阳性血清发生特异反应。结论 :带有HIV- 1p17片段的重组质粒 p ET2 8c在大肠杆菌 BL2 1(DE3)中获得高效表达 ,蛋白表达量可满足其免疫、生物活性的进一步研究 ;用 Ni- NTA金属树脂层析法纯化蛋白 ,方法简便 ,蛋白丢失少 ,纯度高 ;纯化的重组蛋白 HIV- 1p17可用来临床早期诊断 HIV- 1感染者 ,同时可预测患者的临床进程。 展开更多
关键词 基因表达 纯化 HIV-1 p17蛋白 酶联免疫法 免疫印迹法
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HIV-1Gag蛋白在大肠杆菌和重组杆状病毒系统中的高效表达及通用型温控原核表达载体的构建 被引量:1
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作者 金宁一 王宏伟 +3 位作者 张应玖 张东威 邹啸环 王铁东 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1999年第3期1-2,共2页
将中国株HIV-1B亚型的gag全基因序列,克隆到杆状病毒表达载体pfastbacI中,构建了重组质粒pfastGag,利用细菌/杆状病毒表达系统筛选重组杆状病毒,在昆虫细胞中高效表达了HIV-1Gag蛋白。通过改造原核表达载体pBV220和pET28,构建... 将中国株HIV-1B亚型的gag全基因序列,克隆到杆状病毒表达载体pfastbacI中,构建了重组质粒pfastGag,利用细菌/杆状病毒表达系统筛选重组杆状病毒,在昆虫细胞中高效表达了HIV-1Gag蛋白。通过改造原核表达载体pBV220和pET28,构建了一种新的通用型温控原核表达载体质粒pVV5,该载体携带PrPl串联温控启功子及His—Tag纯化标签,利于目的蛋白表达与纯化。将HIV-1gag基因的1148一1857编码序列,分别插入到pVV5b、pET28b的相应位点,构建了重组表达质粒pEG1b、pEG7b,二者在不同受体菌中,表达重组蛋白的量分别占全菌体蛋白总量的42%和28%。利用IMAC金属螯合层析柱,对包涵体中的重组p24蛋白进行纯化,纯度超过80%;纯化后的重组蛋白可与HIV-1型标准阳性血清发生较强的免疫学反应。 展开更多
关键词 HIV-1 GAG蛋白 表达 纯化 大肠杆菌
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人促红细胞生成素的表达调控 被引量:2
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作者 梅柱中 岳军明 +1 位作者 侯世宽 殷震 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期87-89,共3页
人促红细胞生成素是控制红细胞生长发育的一种重要的细胞因子,在人体内具发育阶段特异性、分泌的诱导性等特点,是研究真核基因表达的理想模型。本文从细胞水平的调控、基因结构以及基因3′和5′侧翼序列的调控元件对人促红细胞生成... 人促红细胞生成素是控制红细胞生长发育的一种重要的细胞因子,在人体内具发育阶段特异性、分泌的诱导性等特点,是研究真核基因表达的理想模型。本文从细胞水平的调控、基因结构以及基因3′和5′侧翼序列的调控元件对人促红细胞生成素表达的影响作用进行了讨论。 展开更多
关键词 人促红细胞生成素 表达 调控
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HIV-1核心蛋白p24在大肠杆菌中的表达与纯化
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作者 王宏伟 金宁一 +3 位作者 戴炜 李体远 郭志儒 殷震 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第9期394-396,共3页
目的:探索进一步提高HIV1 p24 gag 蛋白在大肠杆菌中的表达效率,增加产物的纯化手段。方法:通过改造原核表达载体pBV220 和pET28 ,构建了一种新的通用型温控原核表达载体pVV5 ,将HIV1 gag 基... 目的:探索进一步提高HIV1 p24 gag 蛋白在大肠杆菌中的表达效率,增加产物的纯化手段。方法:通过改造原核表达载体pBV220 和pET28 ,构建了一种新的通用型温控原核表达载体pVV5 ,将HIV1 gag 基因的1 148 ~1 857 编码序列,插入到pVV5b 和pET28b 的相应位点中,构建了重组表达质粒pEG1b 和pEG7b ,转化到大肠杆菌中进行表达,产物利用IMAC 金属螯合层析柱进行纯化,纯化的表达产物用HIV1 标准阳性血清进行鉴定。结果:构建的重组表达质粒pEG1b 和pEG7b 在相应受体菌中表达重组蛋白的量为41 % 和28 % ,表达的外源蛋白经IMAC 柱一步纯化后纯度超过80 % ,纯化后的重组蛋白可与HIV1 阳性血清发生ELISA 反应。结论:构建的通用型温控原核表达载体可以高效地表达外源蛋白,在大肠杆菌中高效地表达HIV1 p24 可用于制备HIV1 感染的诊断试剂。 展开更多
关键词 原核载体 人免疫缺陷病毒 核心蛋白 纯化
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