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两种荧光定量PCR方法检测猪瘟病毒的比较及应用
被引量：
7
1
作者
袁雪梅
陈宁
+6 位作者
陈宇
王萍
童超
李得江
万婧
李肖梁
方维焕
《中国动物传染病学报》
CAS
2010年第3期66-72,共7页
根据猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)5端非编码区保守区域,设计猪瘟病毒特异性的引物和探针,建立了基于SYBR Green和TaqMan探针的两种荧光定量PCR检测方法。灵敏性和特异性试验结果表明,两种方法能够特异性地检测出不同型...
根据猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)5端非编码区保守区域,设计猪瘟病毒特异性的引物和探针,建立了基于SYBR Green和TaqMan探针的两种荧光定量PCR检测方法。灵敏性和特异性试验结果表明,两种方法能够特异性地检测出不同型的猪瘟病毒,而对同属的牛病毒性腹泻病病毒以及其它一些主要猪病病原检测结果均为阴性。两种方法对猪瘟病毒C株的检测下限均为101TCID50,均高于常规的套式PCR。用携带该基因片段的重组质粒为模板进行检测,SYBR Green方法的检测下限为3×100copies,比TaqMan探针方法更加灵敏(3×101copies)。应用建立的SYBR Green方法对2009年采集于浙江地区不同猪场的20份病猪样品进行CSFV检测,有8份样品为阳性,与套式PCR方法检测结果一致。进一步应用SYBR Green方法对不同感染阶段细胞内病毒RNA复制水平进行检测,与病毒滴度的结果基本一致。因此,本研究建立的SYBRGreen荧光定量PCR检测方法能够应用于组织和培养细胞中猪瘟病毒的检测。
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关键词
猪瘟病毒
5非编码区
荧光定量PCR
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职称材料
题名
两种荧光定量PCR方法检测猪瘟病毒的比较及应用
被引量：
7
1
作者
袁雪梅
陈宁
陈宇
王萍
童超
李得江
万婧
李肖梁
方维焕
机构
江西农业大学动物科学技术学院
浙江大学动物预防医学研究所浙江省动物预防医学重点实验室
农标普
瑞纳
(
嘉兴
)
饲料
有限公司
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
2010年第3期66-72,共7页
基金
杭州市科技创新服务平台项目(20082332Y03)
文摘
根据猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)5端非编码区保守区域,设计猪瘟病毒特异性的引物和探针,建立了基于SYBR Green和TaqMan探针的两种荧光定量PCR检测方法。灵敏性和特异性试验结果表明,两种方法能够特异性地检测出不同型的猪瘟病毒,而对同属的牛病毒性腹泻病病毒以及其它一些主要猪病病原检测结果均为阴性。两种方法对猪瘟病毒C株的检测下限均为101TCID50,均高于常规的套式PCR。用携带该基因片段的重组质粒为模板进行检测,SYBR Green方法的检测下限为3×100copies,比TaqMan探针方法更加灵敏(3×101copies)。应用建立的SYBR Green方法对2009年采集于浙江地区不同猪场的20份病猪样品进行CSFV检测,有8份样品为阳性,与套式PCR方法检测结果一致。进一步应用SYBR Green方法对不同感染阶段细胞内病毒RNA复制水平进行检测,与病毒滴度的结果基本一致。因此,本研究建立的SYBRGreen荧光定量PCR检测方法能够应用于组织和培养细胞中猪瘟病毒的检测。
关键词
猪瘟病毒
5非编码区
荧光定量PCR
Keywords
Classical swine fever virus
5-UTR
real-time PCR
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
两种荧光定量PCR方法检测猪瘟病毒的比较及应用
袁雪梅
陈宁
陈宇
王萍
童超
李得江
万婧
李肖梁
方维焕
《中国动物传染病学报》
CAS
2010
7
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