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CRISPR/Cas9介导RB1基因敲除及其在鸡前脂肪细胞分化、增殖中的功能研究 被引量：9
1
作者 张琦 黄娇娇 +4 位作者 杨彩侠 王宇祥 张慧 赵建国 李辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1775-1784,共10页
旨在研究RB1基因在鸡前脂肪细胞分化和增殖过程中的功能,本研究利用CRISPR/Cas9系统在鸡前脂肪细胞中敲除RB1基因,检测鸡前脂肪细胞的分化和增殖能力及相关标志基因的表达水平。结果表明,CRISPR/Cas9系统能够有效介导RB1基因的敲除并引... 旨在研究RB1基因在鸡前脂肪细胞分化和增殖过程中的功能,本研究利用CRISPR/Cas9系统在鸡前脂肪细胞中敲除RB1基因,检测鸡前脂肪细胞的分化和增殖能力及相关标志基因的表达水平。结果表明,CRISPR/Cas9系统能够有效介导RB1基因的敲除并引起RB1基因翻译的提前终止,敲除效率可以达到10%。油红O提取比色和CCK-8的结果显示,敲除RB1基因后,鸡前脂肪细胞的分化能力减弱、增殖能力增强;qRT-PCR结果显示,RB1基因敲除之后脂肪细胞分化标志基因G0S2、FAS、A-FABP的mRNA表达水平下降,尤其是G0S2基因的表达水平在前脂肪细胞分化的各个阶段都表现为显著的下降。同时RB1基因敲除还引起细胞周期相关基因CyclinD1、E2F1、Ki67、PCNA的mRNA表达水平升高。初步推断,RB1基因可能是调控鸡前脂肪细胞分化和增殖的关键调节因子。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 RB1 鸡 脂肪沉积 分化 增殖
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鸡KLF3基因的表达规律及其对脂肪细胞分化的影响研究 被引量：6
2
作者 王海霞 张志威 +4 位作者 贺綦 王宁 王宇祥 曹志平 李辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期26-31,共6页
为研究鸡KLF3(Gallus gallus Krüppel-like factor 3,gKLF3)基因的表达规律及其对脂肪细胞分化的影响,利用qRT-PCR检测了其在肉鸡脂肪组织和脂肪细胞中的表达特点,并利用基因过表达技术研究gKLF3基因对脂肪细胞分化的影响。结果显... 为研究鸡KLF3(Gallus gallus Krüppel-like factor 3,gKLF3)基因的表达规律及其对脂肪细胞分化的影响,利用qRT-PCR检测了其在肉鸡脂肪组织和脂肪细胞中的表达特点,并利用基因过表达技术研究gKLF3基因对脂肪细胞分化的影响。结果显示,gKLF3在2~10周龄肉鸡腹部脂肪组织中持续表达,10周龄高脂肉鸡腹部脂肪组织gKLF3表达量显著高于低脂肉鸡(P<0.05);gKLF3在鸡成熟脂肪细胞的表达量低于前脂肪细胞(P<0.01);体外培养的鸡前脂肪细胞经油酸诱导分化后,gKLF3基因表达量均有低于对照组的趋势;过表达gKLF3基因有抑制脂肪细胞分化,以及抑制C/EBPα、FAS基因表达(P<0.01)的趋势。研究结果表明,gKLF3基因在鸡腹部脂肪组织生长发育过程中发挥重要作用,其可能是通过抑制C/EBPα、FAS基因表达进而抑制脂肪细胞分化实现的。 展开更多
关键词 鸡 KLF3基因 脂肪细胞分化 基因表达
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高、低脂鸡脂肪组织ATGL基因的表达及其激素调控的差异分析 被引量：7
3
作者 史铭欣 荣恩光 +3 位作者 周纬男 史洪岩 李辉 王宁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1874-1881,共8页
为研究脂肪甘油三酯脂肪酶（ATGL）在鸡脂肪沉积中的作用，并分析肾上腺素和胰高血糖素对高、低脂鸡脂肪组织和脂肪细胞ATGL基因表达的影响，本研究利用半定量RT-PCR分析鸡ATGL基因的组织表达谱；利用Real-timeRT-PCR分析ATGL基因及其... 为研究脂肪甘油三酯脂肪酶（ATGL）在鸡脂肪沉积中的作用，并分析肾上腺素和胰高血糖素对高、低脂鸡脂肪组织和脂肪细胞ATGL基因表达的影响，本研究利用半定量RT-PCR分析鸡ATGL基因的组织表达谱；利用Real-timeRT-PCR分析ATGL基因及其活化因子Comparative gene identification-58（CGI-58）基因在1～7周龄东北农业大学肉鸡高、低腹脂双向选择品系（NEAUHLF）第16世代鸡群脂肪组织中的表达差异，以及肾上腺素和胰高血糖素对高、低脂系肉鸡脂肪组织和脂肪细胞ATGL基因表达的影响。结果显示，ATGL基因在鸡腹部脂肪、皮下脂肪、嗉囊周围脂肪、肌胃周围脂肪、肾脏及肝脏中表达量较高；低脂系肉鸡腹部脂肪组织ATGL和CGI-58基因的表达总体均高于高脂系鸡，且均在第2周龄达到显著性差异（P％0．05）；肾上腺素和胰高血糖素都能够上调高脂系鸡脂肪组织和脂肪细胞ATGL基因的表达，并促进机体的脂肪分解，暗示高脂系鸡对2种激素的刺激相对敏感。本研究结果为揭示高、低脂肉鸡脂肪性状差异的原因以及ATGL在鸡脂肪沉积中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 肉鸡 ATGL基因 基因表达 肾上腺素 胰高血糖素
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鸡前脂肪细胞中A-FABP基因表达的变化对PPARγ、perilipin和E-FABP表达的影响 被引量：5
4
作者 张庆秋 石慧 +2 位作者 王宇祥 李辉 王启贵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1531-1538,共8页
本研究以鸡原代前脂肪细胞为实验材料,探讨A-FABP基因在鸡脂类代谢过程中的功能以及该基因与脂类代谢相关7个基因间的调控关系。利用A-FABP基因的shRNA干扰载体和真核表达载体对该基因进行干扰和过表达,分别在干扰和过表达后24、36、48... 本研究以鸡原代前脂肪细胞为实验材料,探讨A-FABP基因在鸡脂类代谢过程中的功能以及该基因与脂类代谢相关7个基因间的调控关系。利用A-FABP基因的shRNA干扰载体和真核表达载体对该基因进行干扰和过表达,分别在干扰和过表达后24、36、48、60和72h时检测脂类代谢相关基因的表达情况。结果表明,干扰A-FABP后,鸡前脂肪细胞中PPARγ和perilipin基因的表达量在24和36h时显著低于对照组,在48h时显著高于对照组,在48和72h时,E-FABP基因表达量显著低于对照组;过表达A-FABP后,鸡前脂肪细胞中PPARγ和perilipin基因的表达量在24和36h时显著高于对照组,在48h时显著低于对照组,在所有检测的时间点E-FABP基因表达均显著下调。结果显示,在前脂肪细胞中,鸡A-FABP表达量的变化影响PPARγ、perilipin和E-FABP的表达。 展开更多
关键词 A-FABP基因 PPARΓ基因 perilipin基因 E-FABP基因 鸡 脂肪细胞
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鸡Perilipin1基因启动子的克隆及分析 被引量：4
5
作者 周纬男 史铭欣 +2 位作者 乔书培 史洪岩 王宇祥 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期249-259,共11页
旨在研究鸡脂滴包被蛋白基因(Perilipin1,Plin)启动子的结构及特征。本研究采用PCR方法扩增了鸡Perilipin1基因5′侧翼区约2kb的DNA片段,并对其进行了克隆、测序及生物信息学分析;同时,构建了其全长及系列截短突变的报告基因表达载体,... 旨在研究鸡脂滴包被蛋白基因(Perilipin1,Plin)启动子的结构及特征。本研究采用PCR方法扩增了鸡Perilipin1基因5′侧翼区约2kb的DNA片段,并对其进行了克隆、测序及生物信息学分析;同时,构建了其全长及系列截短突变的报告基因表达载体,瞬时转染鸡胚成纤维细胞系(DF-1),用双荧光素酶报告基因系统测定了荧光素酶活性,确定了该基因的核心启动子区域。生物信息学分析结果表明,鸡Perilipin1基因的启动子区不存在典型的TATA box结构和CpG岛,但可能存在TFIID、Sp1、AP2、PPAR、RXR、SREBP1、C/EBP、GATA、ER、KLF5等多个转录因子结合位点;报告基因分析结果表明,本研究克隆的鸡Perilipin1基因启动子能够极显著地启动报告基因的表达(P<0.01),并且随着启动子片段由5′端逐渐截短,报告基因活性表现出逐渐增强的趋势,其中-360/-11片段具有最强的报告基因活性。综上表明,鸡Perilipin1基因-360/-11区域的启动子片段具有最强的转录活性,包含该基因的核心启动子序列。 展开更多
关键词 鸡 脂滴包被蛋白 启动子 克隆 分析
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鸡肝细胞中L-BABP基因表达对脂类代谢基因及甘油三酯和总胆固醇的影响 被引量：3
6
作者 高广亮 张庆秋 +1 位作者 李辉 王启贵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期32-40,共9页
本研究以鸡原代肝细胞为试验材料,探讨鸡L-BABP基因对脂类代谢相关基因及生化指标(总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密脂蛋白)的影响。利用RNAi和过表达技术下调和上调该基因的表达,分别在干扰和过表达24、36、48、60和72h时检测... 本研究以鸡原代肝细胞为试验材料,探讨鸡L-BABP基因对脂类代谢相关基因及生化指标(总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密脂蛋白)的影响。利用RNAi和过表达技术下调和上调该基因的表达,分别在干扰和过表达24、36、48、60和72h时检测鸡肝细胞中脂类代谢相关基因的表达量变化及细胞培养基中脂类代谢相关生化指标的变化。结果显示,鸡L-BABP基因表达量的变化显著或极显著影响APOB、APOAΙ和PERILIPIN基因表达,且显著地改变细胞培养基中的甘油三酯和总胆固醇的含量。基于以上结果,本研究推测鸡肝细胞中LBABP基因可能参与禽类脂肪沉积、总胆固醇代谢和脂解过程。 展开更多
关键词 鸡肝细胞 L-BABP基因 APOB基因 APOAI基因 Perilipin基因 总胆固醇 甘油三酯
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鸡L-FABP启动子区C/EBPα结合位点的定点突变分析 被引量：2
7
作者 贺綦 孙婴宁 +1 位作者 李辉 王启贵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1496-1501,共6页
为进一步分析L-FABP启动子区域中的C/EBPα结合位点以确定其在L-FABP转录中的调控作用。本研究采用定点突变方法将L-FABP启动子区域中的C/EBPα结合位点进行有效突变。结果显示,C/EBPα外源过表达可以抑制L-FABP启动子活性,突变L-FABP... 为进一步分析L-FABP启动子区域中的C/EBPα结合位点以确定其在L-FABP转录中的调控作用。本研究采用定点突变方法将L-FABP启动子区域中的C/EBPα结合位点进行有效突变。结果显示,C/EBPα外源过表达可以抑制L-FABP启动子活性,突变L-FABP启动子区域中C/EBPα结合位点后L-FABP的启动子活性明显升高。这些结果表明,鸡L-FABP基因受到C/EBPα基因负调控作用,且C/EBPα很可能通过与该位点结合参与L-FABP的转录调控,为进一步研究C/EBPα在L-FABP基因转录调控中的作用提供重要依据。 展开更多
关键词 鸡 L-FABP基因 启动子 定点突变 C/EBPα基因
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肉鸡腹脂双向选择系中RNA编辑位点的鉴定研究 被引量：5
8
作者 梁浩 李敏 +2 位作者 董翔宇 李辉 杜志强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1611-1623,共13页
旨在准确获得肉鸡腹脂双向选择系脂肪组织中的RNA编辑位点信息,进而为脂肪相关研究提供更多的信息来源。本研究以东北农业大学肉鸡高、低腹脂双向选择品系第十九世代肉鸡为试验材料,使用转录组测序(RNA-seq)和基因组测序数据识别肉鸡腹... 旨在准确获得肉鸡腹脂双向选择系脂肪组织中的RNA编辑位点信息,进而为脂肪相关研究提供更多的信息来源。本研究以东北农业大学肉鸡高、低腹脂双向选择品系第十九世代肉鸡为试验材料,使用转录组测序(RNA-seq)和基因组测序数据识别肉鸡腹部脂肪组织RNA编辑位点。通过生物信息学手段,设定严格的数据过滤与筛选策略,构建RNA编辑位点候选集。结果表明,在候选集中,通过对RNA编辑位点的分类和注释,在低脂系肉鸡脂肪组织中发掘转换型RNA编辑位点28个,颠换型RNA编辑位点101个,插入缺失型RNA编辑位点71个;在高脂系肉鸡脂肪组织中,发掘转换型RNA编辑位点30个,颠换型RNA编辑位点84个,插入缺失型RNA编辑位点77个。绝大多数RNA编辑位点落在内含子、基因间区域及基因上游区域(内含子区41.91%,基因间区域33.08%,基因下游20.59%,基因上游2.94%和外显子区1.47%)。试验验证了4个候选RNA编辑位点,其中3个位点落在与脂肪形成有重要关系的ATP1B3、SLC6A6和FLNB基因区域。本研究鉴定和验证了存在于肉鸡脂肪组织中的RNA编辑位点,为进一步研究RNA编辑影响脂肪组织生长发育的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 肉鸡 脂肪组织 转换与颠换 插入缺失 RNA编辑
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中国美利奴羊皮肤POU2F3基因及其剪接体的克隆与表达分析 被引量：1
9
作者 荣恩光 乔书培 +4 位作者 于磊 闫晓红 杨华 李辉 王宁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1189-1197,共9页
旨在研究绵羊POU2F3(POU class 2homeobox 3)基因的组织表达规律,并克隆中国美利奴羊(新疆军垦型)POU2F3基因多种剪接体的全长编码区(Coding sequence,CDS区)。采用半定量RT-PCR方法分析绵羊POU2F3基因的组织表达特性;采用RT-PCR扩增绵... 旨在研究绵羊POU2F3(POU class 2homeobox 3)基因的组织表达规律,并克隆中国美利奴羊(新疆军垦型)POU2F3基因多种剪接体的全长编码区(Coding sequence,CDS区)。采用半定量RT-PCR方法分析绵羊POU2F3基因的组织表达特性;采用RT-PCR扩增绵羊POU2F3基因的全长CDS区,克隆后进行测序分析。组织表达谱分析表明,POU2F3基因仅在绵羊部分内脏器官和组织中表达,其中在皮肤组织中的表达量较高;POU2F3基因在超细毛品系羊体表不同部位皮肤组织中的表达水平差异不显著(P>0.05),在细毛羊和粗毛羊体侧皮肤中的表达量也不存在显著性差异(P>0.05);序列分析结果表明,POU2F3基因在绵羊皮肤组织中至少存在4种mR-NA剪接形式,相应的开放阅读框(Open reading frame,ORF)长度依次为1 290、1 191、666和666bp,分别编码429、396、221和221个氨基酸。中国美利奴羊(新疆军垦型)POU2F3基因在皮肤组织中具有较高表达水平;绵羊POU2F3基因在皮肤组织中除了全长的POU2F3蛋白外,至少还有2种不同的蛋白剪接体。本研究为阐明绵羊POU2F3基因的功能以及开展优质细毛羊的培育工作奠定了基础。 展开更多
关键词 中国美利奴羊 POU2F3基因 基因表达 基因克隆 蛋白剪接体
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羊毛品质性状相关基因CCNY的验证和分析 被引量：5
10
作者 张文建 马广伟 +7 位作者 张潇飞 褚衍凯 刘静 杨华 闫晓红 李玉茂 李辉 王宁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1389-1400,共12页
旨在验证Cyclin Y(CCNY)基因与羊毛品质性状的相关性,并探索其可能的作用机制。本研究以744只中国美利奴羊(新疆军垦型)为试验材料,采用Sanger法混池测序寻找多态性位点;利用MALDI-TOF-MS方法进行个体基因型鉴定;利用real-time RT-PCR... 旨在验证Cyclin Y(CCNY)基因与羊毛品质性状的相关性,并探索其可能的作用机制。本研究以744只中国美利奴羊(新疆军垦型)为试验材料,采用Sanger法混池测序寻找多态性位点;利用MALDI-TOF-MS方法进行个体基因型鉴定;利用real-time RT-PCR检测基因表达;利用免疫荧光染色技术分析蛋白定位;利用CCK-8方法检测细胞的增殖;利用荧光素酶报告基因技术检测Wnt/β-catenin信号通路的活性。结果表明,本研究鉴定出中国美利奴羊CCNY基因的3个SNPs位点,分别命名为CCNYSNP1(rs613860955)、CCNYSNP2(rs622396422)和CCNYSNP3(rs611417387)。关联分析显示,这3个SNPs及其构建的单倍型均与羊毛细度显著相关(P<0.05);组织表达谱检测分析显示,CCNY基因在睾丸和肺中有较高的表达,在皮肤等组织中有中等程度的表达;免疫荧光分析显示,CCNY主要定位于毛囊的内根鞘和毛母质细胞;CCK-8细胞增殖检测分析显示,过表达CCNY基因显著促进人表皮永生化细胞(HaCaT)和绵羊胎儿成纤维细胞(SFF)的增殖(P<0.05);报告基因分析结果显示,过表达CCNY基因极显著促进Wnt/β-catenin信号通路的活性(P<0.01)。以上结果显示,CCNY是控制羊毛细度的一个重要基因,所鉴定出的CCNY基因3个SNPs有望用于细毛羊的分子辅助选育。 展开更多
关键词 中国美利奴绵羊 CCNY基因 单核苷酸多态性 羊毛品质性状 关联分析
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