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转基因玉米59122品系的特异性检测
被引量:
8
1
作者
许文涛
杨蓉
+4 位作者
陆姣
张南
罗云波
何景
黄昆仑
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011年第4期139-142,共4页
使用反向聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了转基因玉米59122的外源基因与玉米基因组之间的两段侧翼序列,并据其左侧侧翼序列设计了具品系特异性的引物,运用半巢式PCR技术建立了59122的品系特异性二重PCR检测方法,扩增片段100bp,横跨pat终...
使用反向聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了转基因玉米59122的外源基因与玉米基因组之间的两段侧翼序列,并据其左侧侧翼序列设计了具品系特异性的引物,运用半巢式PCR技术建立了59122的品系特异性二重PCR检测方法,扩增片段100bp,横跨pat终止子与转基因玉米侧翼基因之间。以转基因玉米59122、MON863、MON810、GA21、NK603,转基因大豆Roundup Ready和转基因油菜GT73等为材料,证明本方法与其他转基因作物具有高特异性。本方法在检测59122时,确定出连接体系中线性DNA的最佳质量浓度为1ng/μL左右,检出限达到0.1%,灵敏度为38个单倍体基因组拷贝数。因此可准确、快速、高效地检测转基因玉米及其产品,或作为常规PCR定性检测后的验证方法。
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关键词
转基因作物
品系特异性检测
半巢式聚合酶链式反应
反向聚合酶链式反应
二重聚合酶链式反应
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职称材料
标准分子构建及其在转基因玉米59122定量检测中的应用
被引量:
3
2
作者
陆姣
杨蓉
+4 位作者
黄昆仑
赵薇维
罗云波
元延芳
许文涛
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011年第2期136-140,共5页
根据转基因作物59122的外源基因与玉米基因组之间的左侧侧翼序列设计具品系特异性的荧光探针及引物,以实时荧光PCR技术建立59122的品系特定量检测方法,以重组PCR技术成功获得了标准分子(整合了内标基因序列与左侧翼序列)梯度范围为10^...
根据转基因作物59122的外源基因与玉米基因组之间的左侧侧翼序列设计具品系特异性的荧光探针及引物,以实时荧光PCR技术建立59122的品系特定量检测方法,以重组PCR技术成功获得了标准分子(整合了内标基因序列与左侧翼序列)梯度范围为10^1~10^5,定量范围为0.01%~100%;建立了玉米内源基因与侧翼序列的标准曲线,变异系数CV值、标准偏差SD以及相关系数R2均可接受;检测5个已知转基因含量(0.1%、0.5%、1%、2%、5%)的混合样品中的转基因含量,结果分别为0.12%、0.56%、1.04%、1.61%、4.66%,实验误差小于25%,结果可信。
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关键词
品系特异性
实时荧光PCR
转基因玉米
标准分子
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职称材料
提取鼠肠道内微生物基因组DNA的方法研究
被引量:
8
3
作者
李丽婷
许文涛
+2 位作者
郭星
姚业成
黄昆仑
《中国粮油学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期122-127,共6页
通过改进鼠肠道微生物基因组DNA提取方法以期更全面地反映鼠肠道菌群的真实情况。采用CTAB和SDS结合的方法裂解细胞,同时改进了传统的酚/氯仿抽提方法,提取全过程控制在2 h以内。通过紫外分光光度计,细菌通用引物PCR,总菌群实时定量PCR...
通过改进鼠肠道微生物基因组DNA提取方法以期更全面地反映鼠肠道菌群的真实情况。采用CTAB和SDS结合的方法裂解细胞,同时改进了传统的酚/氯仿抽提方法,提取全过程控制在2 h以内。通过紫外分光光度计,细菌通用引物PCR,总菌群实时定量PCR,变性梯度凝胶电泳(DGGE)对改进方法及两种试剂盒法提取DNA的结果进行比较,评价了所建立的高效提取方法。与试剂盒相比,改进的方法DNA得率较高,简便快速,成本低廉。同时后续的PCR鉴定及DGGE菌群多样性分析显示,改进的方法可以更好地揭示鼠肠道菌群分布和特性。
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关键词
鼠肠道微生物
DNA提取方法
CTAB/SDS实时定量PCR
变性梯度凝胶电泳
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职称材料
微生物菌群多样性分析方法的研究进展
被引量:
47
4
作者
许文涛
郭星
+1 位作者
罗云波
黄昆仑
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2009年第7期258-265,共8页
随着现代科学技术的进步,对微生物多样性的研究已经提升到了一个新的高度,特别是由于分子生物学在该分支学科中的应用,使得在微生物菌群多样性的研究中克服了传统培养的缺点,使分析方法取得了长足的进步。本文主要介绍了微生物多样性研...
随着现代科学技术的进步,对微生物多样性的研究已经提升到了一个新的高度,特别是由于分子生物学在该分支学科中的应用,使得在微生物菌群多样性的研究中克服了传统培养的缺点,使分析方法取得了长足的进步。本文主要介绍了微生物多样性研究的多种方法,将其简要划分为三大部分:(1)传统纯培养技术;(2)现代分子生物学技术;(3)上述两种方法的联合使用,并重点阐述了这些方法的优缺点,展望了微生物多样性研究方法的发展前景。
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关键词
微生物
菌群
多样性
分子生物学方法
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职称材料
题名
转基因玉米59122品系的特异性检测
被引量:
8
1
作者
许文涛
杨蓉
陆姣
张南
罗云波
何景
黄昆仑
机构
中国
农业
大学食品科学与营养工程学院食品安全实验室
农业部
转基因
产品检验
监督
测试中心
(
北京
)
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011年第4期139-142,共4页
基金
国家"863"计划项目(2006AA10Z440)
国家自然科学基金项目(30800770)
国家转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX08012-001)
文摘
使用反向聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了转基因玉米59122的外源基因与玉米基因组之间的两段侧翼序列,并据其左侧侧翼序列设计了具品系特异性的引物,运用半巢式PCR技术建立了59122的品系特异性二重PCR检测方法,扩增片段100bp,横跨pat终止子与转基因玉米侧翼基因之间。以转基因玉米59122、MON863、MON810、GA21、NK603,转基因大豆Roundup Ready和转基因油菜GT73等为材料,证明本方法与其他转基因作物具有高特异性。本方法在检测59122时,确定出连接体系中线性DNA的最佳质量浓度为1ng/μL左右,检出限达到0.1%,灵敏度为38个单倍体基因组拷贝数。因此可准确、快速、高效地检测转基因玉米及其产品,或作为常规PCR定性检测后的验证方法。
关键词
转基因作物
品系特异性检测
半巢式聚合酶链式反应
反向聚合酶链式反应
二重聚合酶链式反应
Keywords
genetically modified crop
event-specific transgenic detection
semi-nested polymerase chain reaction
inverse polymerase chain reaction
duplex polymerase chain reaction
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
S513 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
标准分子构建及其在转基因玉米59122定量检测中的应用
被引量:
3
2
作者
陆姣
杨蓉
黄昆仑
赵薇维
罗云波
元延芳
许文涛
机构
中国
农业
大学食品科学与营养工程学院食品安全实验室
农业部
转基因
产品检验
监督
测试中心
(
北京
)
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011年第2期136-140,共5页
基金
国家“863”计划项目(2006AA10Z440)
国家自然科学基金项目(30800770)
国家转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX08012-001)
文摘
根据转基因作物59122的外源基因与玉米基因组之间的左侧侧翼序列设计具品系特异性的荧光探针及引物,以实时荧光PCR技术建立59122的品系特定量检测方法,以重组PCR技术成功获得了标准分子(整合了内标基因序列与左侧翼序列)梯度范围为10^1~10^5,定量范围为0.01%~100%;建立了玉米内源基因与侧翼序列的标准曲线,变异系数CV值、标准偏差SD以及相关系数R2均可接受;检测5个已知转基因含量(0.1%、0.5%、1%、2%、5%)的混合样品中的转基因含量,结果分别为0.12%、0.56%、1.04%、1.61%、4.66%,实验误差小于25%,结果可信。
关键词
品系特异性
实时荧光PCR
转基因玉米
标准分子
Keywords
event-specific
real-time PCR
genetically modified maize
standard reference molecule
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
S513 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
提取鼠肠道内微生物基因组DNA的方法研究
被引量:
8
3
作者
李丽婷
许文涛
郭星
姚业成
黄昆仑
机构
中国
农业
大学食品科学与营养工程学院
农业部
转基因
产品检验
监督
测试中心
出处
《中国粮油学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期122-127,共6页
基金
国家高技术研究发展计划863项目(2006AA10Z440)
国家自然科学基金项目(2007-Z8)
文摘
通过改进鼠肠道微生物基因组DNA提取方法以期更全面地反映鼠肠道菌群的真实情况。采用CTAB和SDS结合的方法裂解细胞,同时改进了传统的酚/氯仿抽提方法,提取全过程控制在2 h以内。通过紫外分光光度计,细菌通用引物PCR,总菌群实时定量PCR,变性梯度凝胶电泳(DGGE)对改进方法及两种试剂盒法提取DNA的结果进行比较,评价了所建立的高效提取方法。与试剂盒相比,改进的方法DNA得率较高,简便快速,成本低廉。同时后续的PCR鉴定及DGGE菌群多样性分析显示,改进的方法可以更好地揭示鼠肠道菌群分布和特性。
关键词
鼠肠道微生物
DNA提取方法
CTAB/SDS实时定量PCR
变性梯度凝胶电泳
Keywords
rat intestinal microflora, DNA extraction method, CTAB/SDS, real- time quantitative PCR, DGGE
分类号
Q-33 [生物学]
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职称材料
题名
微生物菌群多样性分析方法的研究进展
被引量:
47
4
作者
许文涛
郭星
罗云波
黄昆仑
机构
中国
农业
大学食品科学与营养工程学院食品安全检测与风险评估实验室
农业部转基因产品检验监督测试中心北京
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2009年第7期258-265,共8页
基金
国家“863”计划项目(2006AA10Z440)
农业部“948”项目(2007-Z8)
文摘
随着现代科学技术的进步,对微生物多样性的研究已经提升到了一个新的高度,特别是由于分子生物学在该分支学科中的应用,使得在微生物菌群多样性的研究中克服了传统培养的缺点,使分析方法取得了长足的进步。本文主要介绍了微生物多样性研究的多种方法,将其简要划分为三大部分:(1)传统纯培养技术;(2)现代分子生物学技术;(3)上述两种方法的联合使用,并重点阐述了这些方法的优缺点,展望了微生物多样性研究方法的发展前景。
关键词
微生物
菌群
多样性
分子生物学方法
Keywords
microorganism
flora
diversity
molecular biological methods
分类号
TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
转基因玉米59122品系的特异性检测
许文涛
杨蓉
陆姣
张南
罗云波
何景
黄昆仑
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
标准分子构建及其在转基因玉米59122定量检测中的应用
陆姣
杨蓉
黄昆仑
赵薇维
罗云波
元延芳
许文涛
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
提取鼠肠道内微生物基因组DNA的方法研究
李丽婷
许文涛
郭星
姚业成
黄昆仑
《中国粮油学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
微生物菌群多样性分析方法的研究进展
许文涛
郭星
罗云波
黄昆仑
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2009
47
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职称材料
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