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逆转录环介导等温扩增联合横向流动试纸条快速检测草鱼(Ctenopharyngodon idellus)呼肠孤病毒(GCRV)的研究 被引量:1
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作者 郝贵杰 林锋 +6 位作者 陈智慧 黄小红 潘晓艺 袁雪梅 徐洋 姚嘉赟 沈锦玉 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期183-191,共9页
草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)是一种双链分节段RNA病毒,是引起草鱼出血病的(hemorrhage of grass carp)的病原,目前临床上较为流行的为基因I型和II型GCRV。本研究利用逆转录环介导等温扩增技术(reverse transcription loop... 草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)是一种双链分节段RNA病毒,是引起草鱼出血病的(hemorrhage of grass carp)的病原,目前临床上较为流行的为基因I型和II型GCRV。本研究利用逆转录环介导等温扩增技术(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)进行核酸扩增,通过横向流动试纸条方法(lateral flow dipstick,LFD)进行可视化检测,分别建立了可应用于基因I型和II型GCRV快速检测的RT-LAMP-LFD技术。该技术以基因I型和II型GCRV第六基因为检测靶标,分别设计了2对特异性引物(其中,上游内引物由生物素biotin标记)和1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针。结果表明,RT-LAMP最适反应温度为63oC,扩增时间为40min,从核酸扩增到LFD结果判读仅需50min。利用RT-LAMP-LFD可特异性检出基因I型和II型GCRV,而对鲤疱疹病毒II型(Cy HV-2)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、嗜水气单胞菌等鱼类常见病原的核酸检测结果为阴性,而且两种基因型RT-LAMP-LFD方法只能检测本基因型GCRV,特异性良好。该方法最低可检测到1.19pg的基因I型GCRV的RNA,1.88pg基因II型GCRV的RNA,其灵敏度分别比相应的RT-PCR方法高2个数量级和1个数量级。对实际样品的检测结果表明,两种基因型RT-LAMP-LFD方法检测GCRV与普通RT-PCR扩增并测序的结果一致。因此,该方法可快速、特异地检测出GCRV,而且操作简单,费用低且耗时短,不需特殊仪器设备,有望成为GCRV现场检测的常规技术手段。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒 逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP) 横向流动试纸条(LFD) 特异性 灵敏度
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滨海滩涂南美白对虾与罗氏沼虾生态混养模式研究
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作者 倪蒙 原居林 +1 位作者 刘梅 顾志敏 《科学养鱼》 2018年第7期36-37,共2页
本研究通过对慈溪地区南美白对虾养殖池塘混养不同密度罗氏沼虾池塘水质、浮游植物、南美白对虾生长、饵料系数、罗氏沼虾产量以及经济效益进行了研究,旨在建立南美白对虾与罗氏沼虾混养新模式,以期为长三角地区南美白对虾科学养殖提供... 本研究通过对慈溪地区南美白对虾养殖池塘混养不同密度罗氏沼虾池塘水质、浮游植物、南美白对虾生长、饵料系数、罗氏沼虾产量以及经济效益进行了研究,旨在建立南美白对虾与罗氏沼虾混养新模式,以期为长三角地区南美白对虾科学养殖提供指导和依据。一、材料和方法1.试验条件本试验在浙江省慈溪市龙武渔业专业合作社进行,选择9个面积约10亩的养殖池塘,池塘深度为1.2米. 展开更多
关键词 南美白对虾 罗氏沼虾 混养模式 生态 滩涂 滨海 池塘水质 长三角地区
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黄颡鱼“溃疡综合征”病原的分离鉴定及药敏试验 被引量:33
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作者 徐洋 蔺凌云 +4 位作者 姚嘉赟 盛鹏程 潘晓艺 尹文林 沈锦玉 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2015年第5期100-104,共5页
对湖州地区患"溃疡综合征"的黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)开展病原研究,从典型濒死的病样体内分离到优势菌TH0426,对该菌进行了人工感染试验,并进行了形态特征、理化特性及分子生物学等方面的综合分析。结果显示,人工感... 对湖州地区患"溃疡综合征"的黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)开展病原研究,从典型濒死的病样体内分离到优势菌TH0426,对该菌进行了人工感染试验,并进行了形态特征、理化特性及分子生物学等方面的综合分析。结果显示,人工感染试验成功复制"溃疡综合征"症状,证明该优势菌为黄颡鱼"溃疡综合征"病原菌,其半数致死量(LD50)为3.98×104CFU/m L。生理生化及16 Sr DNA序列分析结果表明该菌为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。药敏试验结果显示头孢曲松、利福平、四环素、多粘菌素B、氟苯尼考、头孢噻吩、强力霉素、头孢西丁、诺氟沙星、头孢拉定、氧氟沙星、环丙沙星、氟罗沙星和恩诺沙星等14种药物对该菌有较好的抑制作用。 展开更多
关键词 黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco) 溃疡综合征 维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)
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不同饲养方式对乌鳢(Ophiocephalus argus)肠道微生物群落结构差异及种类多样性的影响 被引量:12
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作者 盛鹏程 周冬仁 +6 位作者 韩新荣 胡晓波 叶雪平 徐磊 周聃 吴琦芳 郝贵杰 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期148-155,共8页
以乌鳢(Ophiocephalus argus)为研究对象,采用不同日粮饲喂,试验W1组饲喂冰鲜鱼,试验W2组饲喂畜禽内脏。12周后,取肠道内容物,利用16S rDNA技术研究投喂不同饲粮的乌鳢肠道生物群落结构差异和微生物多样性,分别获得W1组和W2组乌鳢肠道... 以乌鳢(Ophiocephalus argus)为研究对象,采用不同日粮饲喂,试验W1组饲喂冰鲜鱼,试验W2组饲喂畜禽内脏。12周后,取肠道内容物,利用16S rDNA技术研究投喂不同饲粮的乌鳢肠道生物群落结构差异和微生物多样性,分别获得W1组和W2组乌鳢肠道细菌有效序列51124和39298条。结果分析表明;W1组和W2组物种注释(operational taxonomic unit,OTU)数目分别为2631和4114条,分类地位明确的细菌种类分别隶属5个属和49个属,W1组和W2组乌鳢肠道细菌种类差异很大。W1组乌鳢肠道细菌的优势类群是邻单胞菌属(Plesiomonas)、狭义梭菌属(Clostridium sensu stricto)、鲸蜡菌属(Cetobacterium);W2组乌鳢肠道细菌的优势类群是狭义梭菌属(Clostridium sensu stricto)、邻单胞菌属(Plesiomonas)、Spartobacteria、甲基副球菌属(Methyloparacoccus)、杆菌属(Alsobacter)、Saccharibacteria、分支杆菌属(Mycobacterium)。W2组乌鳢肠道细菌香农指数高于W1组乌鳢肠道细菌,表明前者肠道细菌多样性大于后者。本实验揭示了畜禽内脏饲喂乌鳢肠道细菌的群落种类多样性、OTU丰富度和物种总数均高于冰鲜鱼饲喂乌鳢;W1组肠道有益菌OTU丰富度大于W2组,且W2组还存在一些潜在致病菌。本研究为乌鳢的健康养殖和后续肠道微生物资源的挖掘提供了理论依据。 展开更多
关键词 乌鳢(Ophiocephalus argus) Illumina MiSeq高通量测序 投喂方式 肠道微生物 群落结构
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三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)半乳糖凝集素PtGAL的基因克隆与原核重组表达 被引量:2
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作者 郝贵杰 林锋 +6 位作者 母昌考 李荣华 姚嘉赟 潘晓艺 袁雪梅 沈锦玉 王春琳 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1241-1249,共9页
半乳糖凝集素(Galectin)是动物凝集素家族的一员,在脊椎动物和无脊椎动物中都参与了重要的免疫防御反应,是一种重要的免疫因子。通过RT-PCR和RACE技术克隆获得了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)半乳糖凝集素基因全长,并命名为PtGa... 半乳糖凝集素(Galectin)是动物凝集素家族的一员,在脊椎动物和无脊椎动物中都参与了重要的免疫防御反应,是一种重要的免疫因子。通过RT-PCR和RACE技术克隆获得了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)半乳糖凝集素基因全长,并命名为PtGal。该基因全长875bp,开放阅读框为669bp,编码222个氨基酸,包含一个糖识别结构域CRD(位于16—142位氨基酸),预测蛋白的分子量(Mw)为23529.4Da,理论等电点(p I)为5.21。同源性比对结果显示,PtGal编码的氨基酸序列与中华绒螯蟹、南美白对虾、日本囊对虾galectin的同源性分别为77%、66%、58%。实时荧光定量PCR(qRT-RCR)结果表明,PtGal在三疣梭子蟹肝胰腺、肌肉、肠、胃、鳃、心脏、性腺中都有表达,其中在性腺中的表达量最高,在肝胰腺中的表达量最低,但人工感染溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)后,肝胰腺的表达呈先升高后降低的趋势。利用原核表达系统对三疣梭子蟹PtGal进行了重组表达,并通过纯化复性获得了重组目的蛋白rPtGal,ELISA检测rPtGal与不同细菌及真菌的结合活性,结果表明,该重组蛋白与革兰氏阳性菌、阴性菌和真菌均有较强的结合。本研究为进一步深入研究三疣梭子蟹半乳糖凝集素的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 三疣梭子蟹 半乳糖凝集素 实时荧光定量PCR 溶藻弧菌 重组蛋白
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虾-菜生态轮作模式试验
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作者 沈斌乾 陈建明 +3 位作者 姜建湖 孙丽慧 黄爱霞 罗华明 《科学养鱼》 2017年第7期28-29,共2页
近年来,我国水产养殖业发展迅速,水产养殖面积不断扩大,截至2014年,全国各类水产养殖面积己达838.6万公顷,然而很多水产品种(尤其是虾类)由于养殖周期短,一年内较多时段池塘处于抛荒闲置的状态,造成土地资源的大量浪费。较多... 近年来,我国水产养殖业发展迅速,水产养殖面积不断扩大,截至2014年,全国各类水产养殖面积己达838.6万公顷,然而很多水产品种(尤其是虾类)由于养殖周期短,一年内较多时段池塘处于抛荒闲置的状态,造成土地资源的大量浪费。较多学者研究认为,开展鱼(虾)粮轮作是一种提高水产养殖土地利用率和经济效益的有效方法之一。 展开更多
关键词 模式试验 虾类 轮作 水产养殖业 生态 养殖面积 土地利用率 养殖周期
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中华鳖肝腹水及肿瘤病可能的原因分析
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作者 杨移斌 艾晓辉 +1 位作者 姚嘉赟 沈锦玉 《科学养鱼》 2017年第3期61-61,共1页
中华鳖,养殖方式主要有鱼鳖混养、池塘单养、工厂化温室养殖等,主产区包括湖南、湖北、江西、安徽、江苏及浙江等省份。随着人们生活水平的提高,国内外市场对中华鳖的需求量越来越大,加速中华鳖的人工繁殖和养殖已成了必然的趋热。... 中华鳖,养殖方式主要有鱼鳖混养、池塘单养、工厂化温室养殖等,主产区包括湖南、湖北、江西、安徽、江苏及浙江等省份。随着人们生活水平的提高,国内外市场对中华鳖的需求量越来越大,加速中华鳖的人工繁殖和养殖已成了必然的趋热。故中华鳖养殖规模及养殖密度不断增大,其生存环境受到极大挑战,变得异常恶劣,随之病害频发,常引起较大经济损失。 展开更多
关键词 中华鳖 肿瘤病 原因 腹水 养殖方式 国内外市场 鱼鳖混养 池塘单养
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基于综合生物标志物响应评价苯并芘对脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)的毒性效应 被引量:9
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作者 李磊 刘金殿 +7 位作者 黄士林 唐峰华 陈玉生 赵永超 许呈林 王云龙 沈新强 蒋玫 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期444-451,共8页
苯并[a]芘(Ba P)是一类典型多环芳烃(PAHs)污染物。为了定量评价Ba P对脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)的毒性效应,采用水体暴露实验,研究了脊尾白虾肝胰脏、肌肉组织的5种生物标志物(EROD、GST、SOD、CAT、MDA)对Ba P暴露的响应,并... 苯并[a]芘(Ba P)是一类典型多环芳烃(PAHs)污染物。为了定量评价Ba P对脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)的毒性效应,采用水体暴露实验,研究了脊尾白虾肝胰脏、肌肉组织的5种生物标志物(EROD、GST、SOD、CAT、MDA)对Ba P暴露的响应,并应用综合生物标志物响应(IBR)定量评价了Ba P对肝胰脏、肌肉组织的毒性差异。结果显示:肝胰脏、肌肉组织的EROD、GST、SOD、CAT活性整体呈现诱导-抑制的规律性变化,除了0.05μg/L实验组CAT外,其余各实验组肝胰脏组织生物标志物活性在实验结束时均显著高于对照组(P<0.05),除了0.45μg/L实验组EROD、CAT外,其余各浓度组肌肉组织生物标志物活性在实验结束时均与对照组无显著性差异(P>0.05),MDA含量呈现持续上升的趋势,在实验结束时各实验组均显著高于对照组(P<0.05);IBR值存在时间效应和剂量效应。研究结果表明,肝胰脏、肌肉组织对Ba P的暴露响应存在差异性,肝胰脏生物标志物综合应激活性高于肌肉组织。 展开更多
关键词 苯并芘 脊尾白虾 综合生物标志物响应
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