家蚕、野桑蚕线粒体Cyt b基因片段序列分析及分子进化研究 被引量：17

1

作者 李爱玲 徐安英 +3 位作者 沈兴家 唐顺明 张志芳 潘沈元 《蚕业科学》 CAS CSCD 2004年第1期80-84,共5页

以家蚕中系一化地理品种延吉、印度多化品种迈索尔、欧系一化品种法 4 0 8油和中国镇江地区野桑蚕为材料 ,采用PCR技术扩增了其线粒体 (mitochondrialDNA ,mtDNA)细胞色素b(cytochromeb ,Cytb)基因 ,测定其 5′端5 91bp的核苷酸序列 ,并... 以家蚕中系一化地理品种延吉、印度多化品种迈索尔、欧系一化品种法 4 0 8油和中国镇江地区野桑蚕为材料 ,采用PCR技术扩增了其线粒体 (mitochondrialDNA ,mtDNA)细胞色素b(cytochromeb ,Cytb)基因 ,测定其 5′端5 91bp的核苷酸序列 ,并从GenBank中调取中系家蚕品种C10 8、夏芳 ,日系家蚕品种青熟 ,韩国家蚕品种Backokjam和日本野桑蚕的相应序列 ,进行同源性比较 ,发现日系家蚕品种青熟 ,印度家蚕品种迈索尔 ,欧系家蚕品种法 4 0 8油 ,韩国家蚕品种Backokjam和中系家蚕品种C10 8、延吉序列间的同源性最高 ,相互间均为 10 0 % ;日本野桑蚕与各家蚕品种序列间的同源性约 94 %～ 95 % ;中国野桑蚕与各家蚕品种序列间同源性约 98%～ 99%。分子进化树分析显示日本野桑蚕和各家蚕品种相应序列的分歧时间远远早于中国野桑蚕与各家蚕品种序列的分歧时间 ,这是在分子水平上证实家蚕起源于中国野桑蚕的证据之一。 展开更多

关键词 家蚕 野桑蚕 线粒体 Cytb基因片段 序列分析 分子进化 细胞色素B基因

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家蚕翅原基的一些发育规律研究 被引量：8

2

作者 周庆祥 易咏竹 +3 位作者 张志芳 陈寅 何家禄 吕鸿声 《蚕业科学》 CAS CSCD 2004年第1期44-49,共6页

为进一步解明家蚕的生长发育机制 ,调查了家蚕 5龄幼虫及蛹期翅原基的大小和形态变化 :翅原基在 5龄前期生长缓慢 ,变态前生长最快 ,2～ 3d及 8～ 11d为形态变化最大的两个时期 ;蛹期翅芽基本不变 ,3d始见初生鳞毛 ,5d时已经呈浓密的毛... 为进一步解明家蚕的生长发育机制 ,调查了家蚕 5龄幼虫及蛹期翅原基的大小和形态变化 :翅原基在 5龄前期生长缓慢 ,变态前生长最快 ,2～ 3d及 8～ 11d为形态变化最大的两个时期 ;蛹期翅芽基本不变 ,3d始见初生鳞毛 ,5d时已经呈浓密的毛状 ,8d时翅面鳞毛发育成柳叶状 ,之后逐渐出现分叉 ,9d花纹清晰可见 ,化蛾后翅面鳞片呈现棕榈叶状。进行翅原基摘除和异位移植发现 :4个翅原基全部摘除后家蚕仍能正常生长并发育成蛹和具有交配及产卵能力的蛾 ,表明家蚕血球和造血器官有很强的再生能力 ,家蚕血球细胞的生成可能具有更复杂的机制 ,由此证明了家蚕翅原基异位移植的可行性。 展开更多

关键词 家蚕 翅原基 发育规律 血球细胞生成 异位移植 造血器官 再生能力

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纳豆激酶基因在家蚕生物反应器中的表达 被引量：6

3

作者 陈寅 林旭瑷 +3 位作者 张志芳 易咏竹 何家禄 吴祥甫 《中国蚕业》 2003年第1期67-68,共2页

纳豆由枯草杆菌(Bacillussubtilis)或纳豆菌(Bacillusnatto)发酵大豆而成.1987年,日本学者须见洋行等首次从传统食品纳豆中发现了一种具有溶栓活性的酶制剂,并命名为纳豆激酶(nattokinase,NK).

关键词 纳豆激酶 家蚕 生物反应器 基因表达 抗栓药物 杆状病毒表达载体

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家蚕、野桑蚕海藻糖酶基因启动子的特性及其滞育激素的转录调节 被引量：7

4

作者 沈兴家 唐顺明 +4 位作者 易咏竹 赵巧玲 张志芳 李奕仁 何家禄 《蚕业科学》 CAS CSCD 2004年第2期147-150,共4页

以pGEM 3Z为载体 ,分别构建了家蚕 (Bombyxmori)和野桑蚕 (Bombyxmandarina)海藻糖酶基因启动子控制的荧光素酶基因报告质粒 ,利用昆虫细胞瞬时表达系统进行启动子特性分析 ,并就家蚕滞育激素对海藻糖酶基因启动子转录活性的调节作用进... 以pGEM 3Z为载体 ,分别构建了家蚕 (Bombyxmori)和野桑蚕 (Bombyxmandarina)海藻糖酶基因启动子控制的荧光素酶基因报告质粒 ,利用昆虫细胞瞬时表达系统进行启动子特性分析 ,并就家蚕滞育激素对海藻糖酶基因启动子转录活性的调节作用进行了研究。结果表明 :家蚕和野桑蚕海藻糖酶基因启动子在家蚕Bm5细胞、Sf2 1细胞中都有转录活性 ,但是活性都很低 ;家蚕滞育激素在体外条件下对家蚕海藻糖酶基因启动子活性的调节有明显的剂量效应 ,13～ 33nmol/L时有明显的增强作用 ,由此推测来自家蚕卵巢的Bm5细胞可能存在与滞育激素作用的受体。 展开更多

关键词 家蚕 野桑蚕 海藻糖酶基因 启动子 滞育激素

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野桑蚕、家蚕LSP基因5'侧翼区的克隆与序列分析 被引量：1

5

作者 唐顺明 沈兴家 +2 位作者 张志芳 李奕仁 何家禄 《蚕业科学》 CAS CSCD 2003年第2期142-147,共6页

根据已报道的家蚕朝日×东海的幼虫血清蛋白LSP基因序列设计1对引物,以野桑蚕、家蚕苏·菊×明·虎的基因组DNA为模板,分别克隆了野桑蚕、家蚕苏·菊×明·虎的LSP,基因5’侧翼区,约1.9kb,并进行了序列测... 根据已报道的家蚕朝日×东海的幼虫血清蛋白LSP基因序列设计1对引物,以野桑蚕、家蚕苏·菊×明·虎的基因组DNA为模板,分别克隆了野桑蚕、家蚕苏·菊×明·虎的LSP,基因5’侧翼区,约1.9kb,并进行了序列测定与分析。结果表明:克隆的野桑蚕、家蚕苏·菊×明·虎的LSP基因5’侧翼区涵盖了第一内含子、第一外显子、启动子区及其5’上游区;野桑蚕LSP基因5’侧翼区与朝日×东海LSP,基因5’侧翼区的同源性达96.4％,其中第一内含子、第一外显子的同源性分别为91.6％,100％;家蚕苏·菊×明·虎的LSP基因5’侧翼区与朝日×东海LSP基因5’侧翼区的同源性达98.9％,其中第一内含子、第一外显子的同源性都为100％,核心启动子区具有典型的TATA盒,还有数种昆虫脂肪体内组织特异性表达基因的共有序列和推定的激素响应元件等功能元件;野桑蚕的LSP基因启动子的5’上游区(-304～598bp)与J139家蚕丝素轻链基因第一内含子区域(7639～7933bp)的同源性达90.6％,-913～-1383bp为失活的部分水手转座子元件。 展开更多

关键词 野桑蚕 家蚕 LSP基因 5′侧翼区 基因克隆 序列分析 血液蛋白 完全变态

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家蚕杆状病毒半胱氨酸蛋白酶基因的序列分析及表达 被引量：1

6

作者 林旭瑷 张志芳 +2 位作者 李卫国 何家禄 尚金燕 《蚕业科学》 CAS CSCD 2002年第4期308-312,共5页

通过PCR扩增技术克隆了家蚕核型多角体病毒 (BombyxmoriNuclearPolyhedrosisVirus ,BmNPV)ZJ8株的半胱氨酸蛋白酶 (cysteineproteinase ,CP)基因 (BmNPVZJ8 CP)。序列分析表明 ,该蛋白酶基因的ORF为 972个核苷酸 ,编码 32 3个氨基酸。... 通过PCR扩增技术克隆了家蚕核型多角体病毒 (BombyxmoriNuclearPolyhedrosisVirus ,BmNPV)ZJ8株的半胱氨酸蛋白酶 (cysteineproteinase ,CP)基因 (BmNPVZJ8 CP)。序列分析表明 ,该蛋白酶基因的ORF为 972个核苷酸 ,编码 32 3个氨基酸。同源性分析表明 ,BmNPVZJ8 CP在DNA水平上与其它来源的CP具有较高的同源性 ,根据已知的杆状病毒半胱氨酸蛋白酶序列构建了该基因的进化树 ,发现BmNPVZJ8 CP与人的木瓜蛋白酶超家族的CP在同一进化分支上 ,与BmNPV T3株、AcNPV的半胱氨酸蛋白酶基因的核苷酸同源性最高。该基因在大肠杆菌中表达的产物对大肠杆菌具有生理毒性 ,从而限制了该基因的表达。 展开更多

关键词 家蚕杆状病毒 半胱氨酸蛋白酶 序列分析 进化 基因表达 同源性

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家蚕茧丝纤度性状基因效应分析 被引量：9

7

作者 赵巧玲 魏兆军 +1 位作者 夏定国 叶夏裕 《中国蚕业》 2001年第1期43-43,共1页

关键词 家蚕 茧丝纤度性状 基因效应 世代平均值多元回归方法

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苜蓿尺蠖核多角体病毒对家蚕核多角体病毒在蚕体内复制的干扰 被引量：5

8

作者 王厚伟 林水中 +2 位作者 张志芳 李卫国 何家禄 《中国蚕业》 2001年第2期19-19,共1页

关键词 苜蓿尺蠖核多角体病毒 家蚕核多角体病毒 体内复制 干扰作用

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铜离子对家蚕杆状病毒表达系统外源基因表达量的影响 被引量：3

9

作者 林水中 张志芳 +1 位作者 魏兆军 何家禄 《中国蚕业》 2000年第3期24-25,共2页

关键词 铜离子 家蚕杆状病毒 表达

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家蚕地理系统间茧丝蛋白酶抑制剂含量的比较分析

10

作者 裘智勇 赵巧玲 +3 位作者 张志芳 徐安英 叶夏裕 何家禄 《蚕业科学》 CAS CSCD 2002年第2期94-98,共5页

以中国系统、日本系统、欧洲系统、多化性系统品种各 11个及丝胶茧 (Nd s)、裸蛹 (Nd)等为材料 ,对茧丝蛋白酶抑制剂的含量、热稳定性及与其它主要经济性状的相关性进行了研究。结果表明 :不同家蚕品种间茧丝蛋白酶抑制剂的含量差异极显... 以中国系统、日本系统、欧洲系统、多化性系统品种各 11个及丝胶茧 (Nd s)、裸蛹 (Nd)等为材料 ,对茧丝蛋白酶抑制剂的含量、热稳定性及与其它主要经济性状的相关性进行了研究。结果表明 :不同家蚕品种间茧丝蛋白酶抑制剂的含量差异极显著 ,且中国系统 >日本系统 >欧洲系统 >多化性系统 ,中、日、欧 3个系统的茧丝蛋白酶抑制剂含量与多化性系统间有极显著的差异 ;中系品种C12 和日系品种J12 茧丝蛋白酶抑制剂的热稳定性很强 ,欧系品种罗尼 9号和多化性品种四海茧丝蛋白酶抑制剂的热稳定性相对较弱 ;丝胶茧 (Nd s)中有少量蛋白酶抑制剂存在 ,裸蛹 (Nd)所吐的少量丝胶中无蛋白酶抑制剂存在 ;家蚕茧丝蛋白酶抑制剂的含量与茧层量、茧层率呈极显著的正相关 ,与全茧量、死笼率、幼生率、虫蛹率无显著的相关性。 展开更多

关键词 含量 比较分析 家蚕 地理系统 茧丝 蛋白酶抑制剂

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半胱氨酸蛋白酶基因在家蚕杆状病毒表达系统中的表达 被引量：1

11

作者 林旭瑷 李卫国 +3 位作者 陈寅 易咏竹 张志芳 何家禄 《蚕业科学》 CAS CSCD 2003年第3期241-245,共5页

为了探讨杆状病毒的致病机理、改善杆状病毒表达系统的表达效率 ,将来源于家蚕核型多角体病毒ZJ8株的半胱氨酸蛋白酶 (cystenineprotease,CP)基因克隆到转移载体pVL 1393上 ,获得重组转移载体pVL cp ,与线性化的Bm BacPAK6病毒DNA共转... 为了探讨杆状病毒的致病机理、改善杆状病毒表达系统的表达效率 ,将来源于家蚕核型多角体病毒ZJ8株的半胱氨酸蛋白酶 (cystenineprotease,CP)基因克隆到转移载体pVL 1393上 ,获得重组转移载体pVL cp ,与线性化的Bm BacPAK6病毒DNA共转染家蚕Bm 5贴壁细胞。通过蓝白斑筛选、纯化后得到的重组病毒经PCR鉴定证明 ,cp基因已被正确导入 ,注射感染家蚕 5龄幼虫 12 0h后表达产物活性达到最高。对表达产物进行SDS PAGE及酶活力分析 ,检测到半胱氨酸蛋白酶在家蚕生物反应器中的表达 ,其表达量约为 16 0 0U/mL。 展开更多

关键词 半胱氨酸蛋白酶 家蚕杆状病毒表达系统 基因表达 致病机理 生物反应器 生物杀虫剂

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昆虫杆状病毒egt基因研究进展 被引量：6

12

作者 沈兴家 张志芳 李奕仁 《中国蚕业》 2004年第2期4-7,共4页

昆虫杆状病毒基因组中存在一个编码蜕皮甾醇尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶(ecdysteroid UDP-glucosyltransferase,EGT)的基因egt.

关键词 昆虫杆状病毒 基因组 EGT基因 蜕皮甾醇尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶 双链DNA病毒

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昆虫细胞培养研究进展 被引量：4

13

作者 周亚竞 张志芳 +1 位作者 张元兴 何家禄 《蚕业科学》 CAS CSCD 2000年第z1期74-78,共5页

综述了昆虫细胞培养技术、生物反应器、病毒感染与重组蛋白的表达 ,以及无血清和无蛋白培养基的开发、昆虫细胞的稳定性表达等方面的研究进展。

关键词 昆虫细胞系 培养 基因表达

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桑树叶绿体基因组DNA的提取及部分序列分析 被引量：9

14

作者 赵卫国 赵巧玲 +3 位作者 张志芳 肖庆利 潘一乐 何家禄 《蚕业科学》 CAS CSCD 2001年第4期303-305,共3页

改进Milligan法 ,提取了桑树叶绿体基因组DNA(cpDNA)。利用特异性引物 ,从cpDNA基因组扩增出tRNL tRNF基因。再用随机引物对同一种桑基因组DNA及cpDNA进行RAPD分析 ,表明提取的DNA是具有相当纯度的cpDNA。进一步用XbaⅠ和HindⅢ进行了cp... 改进Milligan法 ,提取了桑树叶绿体基因组DNA(cpDNA)。利用特异性引物 ,从cpDNA基因组扩增出tRNL tRNF基因。再用随机引物对同一种桑基因组DNA及cpDNA进行RAPD分析 ,表明提取的DNA是具有相当纯度的cpDNA。进一步用XbaⅠ和HindⅢ进行了cpDNA的酶切和克隆。通过酶切鉴定 ,已克隆到 5个片段 ,对其中 1个片段的 70 0bp序列进行了分析 ,推测克隆的片段可能为trnK基因的内含子。 展开更多

关键词 桑树 叶绿体 基因组DNA 序列分析 提取 基因克隆

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宿主域扩大的重组救活昆虫杆状病毒表达载体的构建及外源基因的表达 被引量：4

15

作者 易咏竹 陈寅 +2 位作者 张志芳 何家禄 秦俭 《蚕业科学》 CAS CSCD 2002年第4期304-307,共4页

通过克隆的家蚕核多角体病毒解旋酶基因DNA与重组救活可线性化的苜蓿尺蠖核多角体病毒基因工程载体病毒 (BacPAK6 )DNA在昆虫细胞中发生重组 ,经累代筛选获得了既可感染家蚕又可感染秋粘虫细胞Sf 2 1的宿主域扩大的昆虫杆状病毒表达载体... 通过克隆的家蚕核多角体病毒解旋酶基因DNA与重组救活可线性化的苜蓿尺蠖核多角体病毒基因工程载体病毒 (BacPAK6 )DNA在昆虫细胞中发生重组 ,经累代筛选获得了既可感染家蚕又可感染秋粘虫细胞Sf 2 1的宿主域扩大的昆虫杆状病毒表达载体 (HyBacPAK6 )。HyBacPAK6DNA经Bsu36Ⅰ酶切后与含植酸酶基因的转移载体pVL1393 phy在家蚕细胞中重组后 ,通过蓝白斑筛选发现重组率可达 90 %以上。然而以杂交病毒为载体的外源基因表达量仅为以BmNPV为载体病毒的表达量的 2 0 %左右。分析认为HyBacPAK6可用于表达一些对蚕体有害的外源基因。 展开更多

关键词 表达载体 宿主域 外源基因表达 家蚕 昆虫杆状病毒表达系统 HyBacPAK6

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