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不同饲养模式对奶牛血液生化指标及激素含量的影响 被引量：2
1
作者 王林枫 杨树 +7 位作者 杨改青 严平 邹军 苗庭 王月影 朱河水 杨国宇 李明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第9期110-115,共6页
本试验旨在研究不同饲养模式对奶牛血清生化指标及激素含量的影响。分别选择粗放饲养(EP)、集约化饲养(CP)和不完全集约化饲养(IP)模式下体重、胎次、泌乳日龄相近的健康奶牛各30头,采集血样,检测血液中各项生化指标及代谢相关激素,分... 本试验旨在研究不同饲养模式对奶牛血清生化指标及激素含量的影响。分别选择粗放饲养(EP)、集约化饲养(CP)和不完全集约化饲养(IP)模式下体重、胎次、泌乳日龄相近的健康奶牛各30头,采集血样,检测血液中各项生化指标及代谢相关激素,分析其与奶牛不同饲养模式的关系。结果表明,CP型、IP型奶牛血液中血糖(GLU)、白蛋白(ALB)、非酯化脂肪酸(NEFA)、β-羟丁酸(BHB)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、脂多糖(LPS)和组胺(HIS)含量与EP型相比有升高的趋势,而血液中免疫球蛋白(IgG、IgA)、多胺(TA)含量则显著低于EP型(P<0.05);CP型、IP型奶牛血液中胰岛素(INS)、胰岛素/胰高血糖素(INS/GC)、甲状腺素(T3)、生长激素(GH)含量与EP型相比有升高趋势,而血液中胰高血糖素(GC)含量则低于EP型。综上所述,不同饲养模式对奶牛血液生化指标及相关激素分泌有不同程度的影响,其中以CP型饲养模式较好,且CP型>IP型>EP型。 展开更多
关键词 饲养模式 生化指标 激素 免疫 奶牛
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脂噬对奶牛乳腺上皮细胞脂滴大小的调控研究
2
作者 康方圆 刘镇滔 +5 位作者 吴奎显 倪晗 钟凯 李和平 杨国宇 韩立强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1095-1101,共7页
脂噬是一种新的自噬形式,可以选择性识别脂滴并将其降解,在维持细胞内脂质稳态等过程中发挥着重要的作用。本研究旨在探讨奶牛乳腺上皮细胞经饥饿诱导脂噬后对细胞脂滴大小的调控作用。试验用100μmol·L^(-1)的亚油酸处理细胞24 h... 脂噬是一种新的自噬形式,可以选择性识别脂滴并将其降解,在维持细胞内脂质稳态等过程中发挥着重要的作用。本研究旨在探讨奶牛乳腺上皮细胞经饥饿诱导脂噬后对细胞脂滴大小的调控作用。试验用100μmol·L^(-1)的亚油酸处理细胞24 h,刺激细胞脂滴蓄积,然后分别饥饿诱导细胞0、6、12、24、48 h,油红O染色观察细胞内脂滴的尺寸和数量随饥饿时间的变化情况,随后饥饿诱导24 h通过免疫荧光观察脂滴和自噬蛋白LC3的共定位,蛋白免疫印迹检测细胞内自噬蛋白LC3和P62的表达,透射电镜观察脂滴自噬情况。结果发现:随着饥饿处理时间的延长,脂滴直径从1.57μm显著增加到2.12μm,每个细胞的脂滴数量显著减少,从39个·cell^(-1)减少到24个·cell^(-1),大脂滴比例显著增加,小脂滴比例显著减少(P<0.05),免疫荧光发现LC3与脂滴发生共定位,透射电镜观察发现自噬溶酶体包裹着脂滴,饥饿处理24 h后LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白的比值显著增加1倍,P62蛋白表达显著下降(P<0.05)。以上结果表明,脂噬对奶牛乳腺上皮细胞脂滴的大小发挥调控作用。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞 脂滴 脂噬
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硫化氢的生成及其在细胞凋亡和炎性反应中的作用 被引量：8
3
作者 张成玉 王月影 +3 位作者 许春梅 朱河水 钟凯 李和平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第12期3402-3407,共6页
硫化氢(H_2S)是一种无色具有臭味的气体,不仅是畜禽舍内的一种有毒有害物质,而且近年来发现H_2S是继NO、CO之后第3种气体信号分子。H_2S在胃肠中可以通过沙门氏菌、幽门螺旋杆菌等对含硫有机物及硫酸盐分解和还原产生,也可以通过胱硫醚-... 硫化氢(H_2S)是一种无色具有臭味的气体,不仅是畜禽舍内的一种有毒有害物质,而且近年来发现H_2S是继NO、CO之后第3种气体信号分子。H_2S在胃肠中可以通过沙门氏菌、幽门螺旋杆菌等对含硫有机物及硫酸盐分解和还原产生,也可以通过胱硫醚-β-合成酶(CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)、半胱氨酸转移酶(CAT)与3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-MST)等催化L-半胱氨酸等含硫氨基酸产生。H_2S具有多种生理病理学作用,可通过阻断细胞色素C氧化酶而抑制线粒体呼吸(高浓度情况下),造成细胞凋亡,同时也能下调BCL-2及NF-κB等抗凋亡基因表达,促进细胞凋亡;可通过调节Caspase3而抑制细胞凋亡(低浓度情况下),还可以与NF-κB的P65发生巯基化反应促进下游抗凋亡基因表达而发挥抗凋亡作用。高浓度的H_2S可以上调NF-κB、P38、ERKE1/2等基因表达,加重炎症反应;低浓度H_2S可以通过抑制NF-κB信号通路发挥抗炎作用。作者通过综述H_2S气体的生成及其在细胞凋亡和炎性反应中的双重作用,为深入了解H_2S在疾病发展过程中的生理、病理机制提供参考。 展开更多
关键词 硫化氢(H2S) 生成 细胞凋亡 炎性反应
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猪甲状腺激素应答spot14基因的克隆及组织表达研究 被引量：4
4
作者 王丛梅 郭豫杰 +3 位作者 王月影 韩立强 李宏基 杨国宇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第3期55-59,共5页
基于电子延伸序列,设计1对克隆引物,成功克隆了猪甲状腺激素应答spot14(thyroid hormone responsive spot14,THRSP)基因(GenBank登录号:JF_951726),并进行了序列分析,同时利用RT-PCR方法分析了THRSP基因的组织分布规律。结果发现,克隆的... 基于电子延伸序列,设计1对克隆引物,成功克隆了猪甲状腺激素应答spot14(thyroid hormone responsive spot14,THRSP)基因(GenBank登录号:JF_951726),并进行了序列分析,同时利用RT-PCR方法分析了THRSP基因的组织分布规律。结果发现,克隆的猪THRSP基因长为621bp,包括一个完整的开放阅读框架453bp,编码150个氨基酸。克隆的猪THRSP基因与人、牛、小鼠、褐鼠、欧洲兔、鸡的核苷酸序列同源性分别为83.8%、88.5%、80.9%、80.7%、85.1%、47.1%;推导的cDNA编码区(CDs)的氨基酸序列与人、牛、小鼠、褐鼠、欧洲兔、鸡的同源性分别为76.9%、80.8%、76.2%、76.2%、82.1%、32.0%,构建的系统发育树显示猪与牛的亲缘关系最近。组织表达分析结果表明,THRSP基因在肝脏和脂肪组织中高表达,在脑、脾脏、胃、皮肤、盲肠、直肠中表达量相对较低,在肺脏、十二指肠、空肠、回肠中微量表达,在肾脏、肌肉中无表达。THRSP基因在肝脏、脂肪等脂肪生成组织的高表达暗示了其可能作为调节脂肪合成代谢的调控因子参与脂肪合成,但其调控机理有待进一步研究。 展开更多
关键词 猪 甲状腺激素应答spot14 克隆 组织表达
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猪MC4R基因突变体真核表达载体的构建及功能研究
5
作者 韩立强 郭豫杰 +4 位作者 鲁维飞 张欣 褚贝贝 王江 杨国宇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期679-685,共7页
为研究MC4R基因不同突变体的功能差异,本研究从猪肌肉组织中克隆得到MC4R基因的编码序列,将克隆片段与pcDNA3.1真核表达载体进行KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切,连接形成重组表达载体MC4R1,将载体转染BHK细胞后Western blotting检测蛋白表达。通... 为研究MC4R基因不同突变体的功能差异,本研究从猪肌肉组织中克隆得到MC4R基因的编码序列,将克隆片段与pcDNA3.1真核表达载体进行KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切,连接形成重组表达载体MC4R1,将载体转染BHK细胞后Western blotting检测蛋白表达。通过点突变法得到MC4R基因在707/892位点的3个突变载体,将突变载体瞬时转染到BHK细胞,采用免疫荧光对细胞进行标记,通过激光共聚焦显微镜和流式细胞检测荧光表达,结果发现,克隆的MC4R1基因序列长度大约1 000bp,在707/892位点序列为G/G,将构建的真核表达载体MC4R1转染BHK细胞,经过Western blotting检测发现MC4R1蛋白正常表达;通过点突变法得到在707/892位点突变的突变载体MC4R2(G/A)、MC4R3(A/G)、MC4R4(A/A),经过激光共聚焦观察荧光表达后发现,突变受体在细胞膜上均有正常表达,流式检测发现4个突变受体表达的荧光平均强度并没有显著差异(P>0.05)。通过构建MC4R基因突变载体后发现,707/892位点突变对于MC4R受体在细胞膜的表达没有显著影响,其具体机制作用还需深入研究。 展开更多
关键词 猪 黑素皮质素受体-4 突变体 表达
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共轭亚油酸对奶牛乳脂肪球粒径及分布的影响 被引量：3
6
作者 黄啟雪 张梦璐 +6 位作者 张志锦 邢智洋 朱河水 王月影 付彤 高腾云 韩立强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1432-1438,共7页
旨在探索共轭亚油酸(CLA)对奶牛乳脂肪球粒径(MFG)及分布的影响。本试验选取24头体况相近的泌乳中期荷斯坦奶牛(体重(583±34.6)kg,产奶量(27.2±2.4)kg·d^(-1)),分为4组,每组6个重复,每个重复1头牛。对照组(C组)饲喂基础... 旨在探索共轭亚油酸(CLA)对奶牛乳脂肪球粒径(MFG)及分布的影响。本试验选取24头体况相近的泌乳中期荷斯坦奶牛(体重(583±34.6)kg,产奶量(27.2±2.4)kg·d^(-1)),分为4组,每组6个重复,每个重复1头牛。对照组(C组)饲喂基础日粮,低剂量组(L组)饲喂基础日粮+150 g·d^(-1) CLA,中剂量组(M组)饲喂基础日粮+300 g·d^(-1) CLA,高剂量(H组)饲喂基础日粮+400 g·d^(-1) CLA。连续饲喂5 d,测量奶牛采食量、产奶量和乳成分,采用Mastersizer 3000激光粒度仪测量乳脂肪球颗粒平均直径以及比例分布。结果发现,饲喂CLA对奶牛采食量、产奶量、乳蛋白和乳糖含量没有显著影响(P>0.05),CLA处理极显著降低了乳脂肪的含量(P<0.01)。与对照组相比,CLA处理组牛乳中脂肪球粒径D_([3,2])和D_([4,3])显著减少(P<0.05),并且随CLA添加剂量的增加,脂肪球分布比例呈现小脂肪球增多而大脂肪球减少的变化趋势。综上,在本试验条件下,饲粮CLA水平能够改变奶牛乳脂肪球粒径大小和比例,为阐明反式脂肪酸CLA造成奶牛低脂乳的内在机制提供基础。 展开更多
关键词 奶牛 泌乳 共轭亚油酸 乳脂肪球粒径
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奶牛乳腺上皮细胞中SCAP和SREBP1蛋白调控SCD基因表达的作用研究 被引量：5
7
作者 韩立强 孙宇 +2 位作者 付彤 廉红霞 高腾云 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期652-658,共7页
旨在研究奶牛乳腺上皮细胞中固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)对固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)调控的硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(SCD)表达的影响。培养奶牛乳腺上皮细胞,在细胞中转染奶牛SCD基因启动子载体,同时转染SREBP1和SCAP... 旨在研究奶牛乳腺上皮细胞中固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)对固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)调控的硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(SCD)表达的影响。培养奶牛乳腺上皮细胞,在细胞中转染奶牛SCD基因启动子载体,同时转染SREBP1和SCAP真核表达载体作为处理,采用双荧光素酶报告基因系统检测转染SREBP1和SCAP对SCD基因启动子活性的影响;采用免疫荧光技术观察SREBP1在细胞核的表达,采用荧光定量PCR检测SCD基因mRNA的表达。结果表明,与转染pcDNA3.1载体的对照组相比,转染SCAP对SCD启动子活性无显著影响;转染SREBP1和共转染SCAP/SREBP1极显著增加SCD基因启动子活性值(P<0.01),并且SCAP的转染剂量与SCD的启动子活性值之间具有极显著的量效关系(P<0.01);在乳腺上皮细胞中转染SCAP后,能够增强SREBP1在细胞核的表达;细胞转染SREBP1和共转染SCAP/SREBP1后,SCD基因mRNA的表达分别显著上调1.23倍和1.54倍(P<0.05)。本研究表明,奶牛SCAP可以增加SREBP1蛋白在细胞核中的表达,促进对SCD基因的转录激活作用。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 固醇调节元件结合蛋白 固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白 基因表达调控
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沉默SCAP基因对奶牛乳腺上皮细胞脂滴的影响 被引量：2
8
作者 邢智洋 张梦璐 +4 位作者 张菡 王月影 韩立强 高腾云 杨国宇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期507-516,共10页
旨在探究沉默固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SREBP cleavage-activating protein,SCAP)对奶牛乳腺上皮细胞脂滴的影响,本研究构建了SCAP短发夹RNA慢病毒载体,包装感染奶牛乳腺上皮细胞,通过在培养基中添加嘌呤霉素筛选获得SCAP基因... 旨在探究沉默固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SREBP cleavage-activating protein,SCAP)对奶牛乳腺上皮细胞脂滴的影响,本研究构建了SCAP短发夹RNA慢病毒载体,包装感染奶牛乳腺上皮细胞,通过在培养基中添加嘌呤霉素筛选获得SCAP基因沉默稳转细胞株,采用Real-time PCR和Western blot观察基因沉默细胞株中SCAP基因和蛋白的表达,尼罗河红和油红O染色脂滴检测SCAP基因沉默及SCAP质粒瞬时转染对细胞脂滴形成的影响。结果表明,本研究成功构建了奶牛SCAP基因沉默慢病毒重组载体,感染细胞后经过5 mg·L^(-1)嘌呤霉素筛选得到SCAP基因沉默稳转细胞株。基因检测发现,各个沉默细胞株的SCAP基因表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组相比,RNAi-SCAP3细胞中的SCAP蛋白表达降低为对照组的0.49倍(P<0.05),脂代谢基因SCD和FAS表达也显著下降(P<0.05)。脂滴染色发现,RNAi-SCAP3沉默细胞株的脂滴含量显著低于对照组细胞(P<0.01),脂滴直径≤2.0μm的小脂滴个数增多,而直径≥2.5μm的大脂滴个数减少;将SCAP真核表达载体瞬时转染RNAi-SCAP3细胞株后发现,SCAP基因的过表达显著减少了细胞中小脂滴比例而增加了大脂滴比例(P<0.05)。本研究成功构建了SCAP基因沉默稳转细胞株,发现SCAP的表达影响了细胞脂滴直径的大小。 展开更多
关键词 奶牛 奶牛乳腺上皮细胞 固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白 基因沉默 脂滴
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