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2003年世界重大动物疫情概述 被引量:5
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作者 倪雪霞 郑雪光 +2 位作者 滕翔雁 黄保续 何海权 《中国动物检疫》 CAS 2004年第6期48-49,共2页
关键词 2003年 世界 重大动物疫情 口蹄疫 高致病性禽流感 新城疫 蓝舌病 古典猪瘟 流行态势
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羊痘病毒P32蛋白基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建 被引量:9
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作者 郭巍 陈杰 +4 位作者 李一经 李晓成 黄保续 张燕霞 吴发兴 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期270-272,共3页
应用PCR方法扩增羊痘病毒特异性蛋白P32蛋白的基因 ,将其克隆至pMD18_T载体 ,测定核酸序列后将P32基因克隆至Bac_to_Bac○R杆状病毒表达系统中转移载体pFastBac1和pFastBacHTa ,进而转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中 ,获得... 应用PCR方法扩增羊痘病毒特异性蛋白P32蛋白的基因 ,将其克隆至pMD18_T载体 ,测定核酸序列后将P32基因克隆至Bac_to_Bac○R杆状病毒表达系统中转移载体pFastBac1和pFastBacHTa ,进而转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中 ,获得两种携带P32基因的重组转染质粒 :Bacmid_Bac1_P32 ,Bacmid_BacHT_P32 ,经PCR试验鉴定 ,获得的这两种重组转染质粒是携带P32基因的杆状病毒表达载体 。 展开更多
关键词 羊痘病毒 P32蛋白 克隆 Bac-to-Bac○R状病毒表达系统
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一步法多重RT-PCR禽流感病毒分型诊断法的建立与应用 被引量:3
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作者 吕长荣 乔海莲 +3 位作者 杨增岐 陈杰 顾节清 李晓成 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第4期63-67,共5页
根据禽流感病毒(AIV)的M基因序列设计合成了1对AIVM基因的通用诊断引物AMDI/AMD2,针对H5N1、H9N2两种亚型的HA基因分型设计合成了2对分型诊断引物H15D1/H5D2,H9D1/H9D2。采用一步法多重RT-PcR技术建立了一种禽流感病毒快速分型诊断方... 根据禽流感病毒(AIV)的M基因序列设计合成了1对AIVM基因的通用诊断引物AMDI/AMD2,针对H5N1、H9N2两种亚型的HA基因分型设计合成了2对分型诊断引物H15D1/H5D2,H9D1/H9D2。采用一步法多重RT-PcR技术建立了一种禽流感病毒快速分型诊断方法,并对其特异性和灵敏度进行验证。结果表明,该诊断方法速度快,一般只需要28~30 h即可鉴定出结果,比病毒分离鉴定(5~7 d)至少缩短4~6 d;特异性强,试验组53株AIV全部扩增出与预期同样长度的目的条带,与病毒分离及血清学鉴定方法的检测结果完全一致。对照组中新城疫病毒(NDV)、减蛋综合征病毒(EDS76V)、传染性支气管炎病毒(IBV)均未扩增出特异性基因条带,;灵敏度高,试验组将AIV接种SPF鸡胚,培养后的鸡胚尿囊液(AAF)进行10-2稀释后,仍可以检测到其中的AIV。 展开更多
关键词 禽流感病毒 M基因 HA基因 RT-PCR 诊断方法
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猪瘟病毒E_2(gp55)基因在昆虫细胞中的表达 被引量:3
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作者 季新成 陈杰 +5 位作者 张彦明 吴发兴 黄宝续 李晓成 张燕霞 许信刚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期256-258,共3页
将除去 3’端跨膜区的猪瘟病毒E2 基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb ,获得重组质粒pFBHT_E2 ,转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac ,发生转座作用 ,经抗性及蓝白斑筛选得到含E2 基因的重组载体质粒rBacmid_E2 ,以脂质体... 将除去 3’端跨膜区的猪瘟病毒E2 基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb ,获得重组质粒pFBHT_E2 ,转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac ,发生转座作用 ,经抗性及蓝白斑筛选得到含E2 基因的重组载体质粒rBacmid_E2 ,以脂质体介导的方法将此重组载体质粒转染sf9昆虫细胞 ,获得重组病毒 ,命名为rvBac_E2 。经SDS_PAGE和Western_blot及ELISA等方法检测 ,结果表明 ,此E2 基因在昆虫细胞中正确表达 ,表达的蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 杆状病毒表达载体 表达
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伪狂犬病病毒Min-A株糖蛋白gE基因真核表达质粒的构建
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作者 吴发兴 陈杰 +2 位作者 李晓成 欧阳五庆 张燕霞 《中国动物检疫》 CAS 2002年第6期20-22,共3页
根据已发表的PRV -Rice株的gE基因序列设计了一对引物 ,以PRV -MinA株的DNA为模板 ,用PCR法特异性地扩增出了PRVMin-A株的 gE基因 ,并克隆到 pUC19中 ,再与杆状病毒转座质粒 pFastBac1连接得到pFastBac -gE ,pFastBac-gE转化穿梭载体Bac... 根据已发表的PRV -Rice株的gE基因序列设计了一对引物 ,以PRV -MinA株的DNA为模板 ,用PCR法特异性地扩增出了PRVMin-A株的 gE基因 ,并克隆到 pUC19中 ,再与杆状病毒转座质粒 pFastBac1连接得到pFastBac -gE ,pFastBac-gE转化穿梭载体Bacmid,得到了重组rBacmid-gE表达载体。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 Min-A株 糖蛋白 GE基因 真核 表达 质粒构建
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