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伏马菌素B_1单克隆抗体的制备及免疫学检测方法初步应用 被引量：7
1
作者 姚静静 胡骁飞 +4 位作者 韩俊岭 李青梅 王方雨 邓瑞广 张改平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1009-1017,共9页
拟制备灵敏高、特异性强的抗伏马菌素B_1(FB_1)单克隆抗体,并初步应用于FB_1的检测,以期为FB_1的免疫学快速检测提供技术支持。采用碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原FB_1-BSA和FB_1-OVA。以免疫原FB_1-BSA免疫BALB/c小鼠,每四周免疫一次。... 拟制备灵敏高、特异性强的抗伏马菌素B_1(FB_1)单克隆抗体,并初步应用于FB_1的检测,以期为FB_1的免疫学快速检测提供技术支持。采用碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原FB_1-BSA和FB_1-OVA。以免疫原FB_1-BSA免疫BALB/c小鼠,每四周免疫一次。四免后,小鼠脾B细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后,采用ELISA筛选,建立分泌抗FB_1抗体的单克隆杂交瘤细胞株;采用动物体内诱生腹水方法制备出抗FB_1单抗,并鉴定单抗的各种性能;初步建立FB_1免疫学检测方法。结果得到1株稳定分泌抗FB_1单抗的杂交瘤细胞株2E11-H3,该细胞株分泌的mAbs的效价高达1∶1.02×10~6,亲和力常数平均值为7.98×10^(10) L·mol^(-1),亚型为IgG_3。FB_1mAbs的工作浓度为1∶6.0×10~4,与FB_1发生特异性反应,间接竞争ELISA测得IC_(50)=43.65ng·mL^(-1);与FB_1结构类似物FB_2和FB_3的交叉反应率分别为385%和72.4%,与其他霉菌毒素及载体蛋白BSA和OVA均无交叉反应。样品回收率在85.85%~114.07%,平均值为98.81%;变异系数为10.11%。本研究制备出了灵敏度高、特异性强、亲和力高的FB_1单抗,并初步建立FB_1免疫学检测方法。 展开更多
关键词 伏马菌素B1 单克隆抗体 杂交瘤 ELISA
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大豆过敏原免疫学检测方法研究进展 被引量：6
2
作者 王耀 邓瑞广 +3 位作者 张改平 王方雨 李志西 胡骁飞 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第8期143-146,共4页
作为一种重要的粮食作物,大豆应用广泛并在人类和动物营养方面起着至关重要的作用,但大豆中也含有多种过敏原,能够诱发超敏反应,导致机体损伤。随着人们对食品过敏问题的日益重视,各种针对大豆过敏原的快速、准确的检测方法得到了发展,... 作为一种重要的粮食作物,大豆应用广泛并在人类和动物营养方面起着至关重要的作用,但大豆中也含有多种过敏原,能够诱发超敏反应,导致机体损伤。随着人们对食品过敏问题的日益重视,各种针对大豆过敏原的快速、准确的检测方法得到了发展,其中免疫学方法具有灵敏性高、特异性强的特点,能够对过敏原进行定性、定量检测而成为研究热点。本文综述了针对大豆过敏原的免疫学检测方法,并对今后的研究方向进行了初步探讨。 展开更多
关键词 大豆 过敏原 免疫学检测
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免疫学技术在霉菌毒素检测中的应用 被引量：4
3
作者 胡骁飞 李艳梅 +3 位作者 王方雨 邢广旭 孙亚宁 仝其宾 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第4期157-160,共4页
中国是饲料生产第一大国,饲料质量安全关系到养殖业发展的兴衰。霉菌毒素污染严重危害饲料及饲料原料质量安全,因此,建立毒素检测方法对预防霉菌毒素污染,减少毒素中毒事件发生至关重要。综述了霉菌毒素的性质、危害及免疫学检测方法的... 中国是饲料生产第一大国,饲料质量安全关系到养殖业发展的兴衰。霉菌毒素污染严重危害饲料及饲料原料质量安全,因此,建立毒素检测方法对预防霉菌毒素污染,减少毒素中毒事件发生至关重要。综述了霉菌毒素的性质、危害及免疫学检测方法的发展,并展望了毒素检测方法的发展趋势。 展开更多
关键词 霉菌毒素 饲料安全 检测方法 免疫检测
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抗2,4-D单克隆抗体制备及免疫学特性鉴定 被引量：2
4
作者 龚芳 席俊 +5 位作者 李青梅 职爱民 胡骁飞 柴书军 张改平 陆启玉 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期24-28,共5页
制备抗2,4-D高敏感性和高特异性的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。采用EDC法将BSA、OVA和2,4-D偶联制成免疫原和包被原,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定后,用免疫原免疫Balb/c小鼠,经过4次免疫,用间接ELISA和阻断ELISA选... 制备抗2,4-D高敏感性和高特异性的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。采用EDC法将BSA、OVA和2,4-D偶联制成免疫原和包被原,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定后,用免疫原免疫Balb/c小鼠,经过4次免疫,用间接ELISA和阻断ELISA选择高效价、高敏感性的小鼠进行细胞融合;应用杂交瘤细胞技术建立分泌抗2,4-D单克隆抗体的杂交瘤细胞株;用体内诱生法制备腹水,并对其效价、敏感性、亚型和特异性等免疫学特性进行鉴定。结果表明,融合后筛选出3株特异性高的杂交瘤细胞1F11、2A12、2G12,单抗亚型均为IgG1型,效价为1∶2 560～1∶5 120,对2,4-D的IC50分别为0.801、1.332、1.564μg/L,亲和常数(Ka)分别为2.174×1011、3.21×1010和4.36×1010 L/mg,与其他竞争物的交叉反应率均小于0.03%。说明成功获得高敏感性、高亲和力和高特异性的2,4-D mAb,为2,4-二氯苯氧乙酸残留免疫学快速检测方法的建立奠定基础。 展开更多
关键词 2 4-D 单克隆抗体 杂交瘤 特异性
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赭曲霉毒素A模拟表位的筛选及免疫学鉴定 被引量：2
5
作者 王耀 胡骁飞 +5 位作者 裴亚峰 赵东 刘运超 张改平 李志西 邓瑞广 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1271-1277,共7页
从噬菌体随机七肽库中筛选得到赭曲霉毒素A的模拟表位,并以其替代毒素标品建立赭曲霉毒素A免疫学快速检测方法。以纯化的抗赭曲霉毒素A单克隆抗体(OTA mAb)为配基,亲和筛选融合表达在丝状M13噬菌体次要衣壳蛋白(PⅢ)上的随机七肽库,以EL... 从噬菌体随机七肽库中筛选得到赭曲霉毒素A的模拟表位,并以其替代毒素标品建立赭曲霉毒素A免疫学快速检测方法。以纯化的抗赭曲霉毒素A单克隆抗体(OTA mAb)为配基,亲和筛选融合表达在丝状M13噬菌体次要衣壳蛋白(PⅢ)上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,并以筛选的模拟表位建立赭曲霉毒素A的ELISA检测方法。经过4轮亲和筛选,共得到22株与OTA mAb特异结合的阳性噬菌体克隆,且该结合都能够被OTA标品阻断,DNA测序及多肽核心序列分析后,得到赭曲霉毒素A的模拟表位的主要序列为:MPLWXDL,X为任意氨基酸,以阳性噬菌体克隆建立的竞争ELISA检测方法,线性范围为250～8000pg/ml。基于制备的OTA mAb,利用噬菌体随机七肽库可成功筛选到赭曲霉毒素A的模拟表位,并能够替代OTA标品建立直接竞争模式的免疫学快速检测方法。 展开更多
关键词 噬菌体随机七肽库 赭曲霉毒素A 模拟表位 单克隆抗体
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黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备及基于该抗体的黄曲霉毒素B_1免疫学检测方法的建立 被引量：11
6
作者 姚静静 胡骁飞 +6 位作者 韩俊岭 徐帆 滕蔓 邢云瑞 孙亚宁 邓瑞广 张改平 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期1405-1414,共10页
为了快速准确检测粮食与饲料中黄曲霉毒素B_1(AFB_1)含量,本试验制备了具有高灵敏度的AFB_1单克隆抗体,并将其应用于AFB_1间接竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)方法的建立。采用碳二亚胺(EDC)法制备AFB_1完全抗原[AFB_1-牛血清白蛋白(BSA)和... 为了快速准确检测粮食与饲料中黄曲霉毒素B_1(AFB_1)含量,本试验制备了具有高灵敏度的AFB_1单克隆抗体,并将其应用于AFB_1间接竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)方法的建立。采用碳二亚胺(EDC)法制备AFB_1完全抗原[AFB_1-牛血清白蛋白(BSA)和AFB_1-鸡卵白蛋白(OVA)],并免疫B_ALB/c小鼠。经细胞融合,筛选出能够分泌高灵敏度AFB_1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法,大量制备AFB_1单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。基于制备的AFB_1单克隆抗体,建立AFB_1间接竞争ELISA检测方法。结果显示:通过筛选,获得稳定产生抗体的杂交瘤细胞株9H1F5,经间接ELISA方法测定,获得的AFB_1单克隆抗体的效价高达5.12×105,亲和力常数(Ka)=6.72×107L/mol,抗体亚型为免疫球蛋白G_2(IgG_2)。采用间接竞争ELISA方法测得AFB_1的半数抑制浓度(IC_(50))为0. 232 ng/mL,检测范围为0.014～1.920 ng/mL,最低检测限为0.014 ng/mL。同时,该AFB_1单克隆抗体与黄曲霉毒素B_2(AFB_2)、黄曲霉毒素G_1(AFG_1)、黄曲霉毒素G_2(AFG_2)、黄曲霉毒素M1(AFM1)的交叉反应率分别为40.21%、33.19%、31.96%、4.40%,与其他霉菌毒素无交叉反应。由上述结果可知,本试验成功制备了灵敏度高、特异性强的AFB_1单克隆抗体,并基于该抗体建立了检测AFB_1的间接竞争ELISA方法,为粮食与饲料中AFB_1快速免疫学检测奠定了基础。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 细胞融合 单克隆抗体 ELISA
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玉米赤霉烯酮对母猪繁殖性能和胎盘免疫相关基因表达量的影响 被引量：10
7
作者 王相生 孙亚宁 +3 位作者 阮崇美 张全伟 张勇 胡骁飞 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期3696-3702,共7页
本试验旨在研究饲粮中添加玉米赤霉烯酮(ZEN)对母猪繁殖性能和胎盘免疫相关基因表达量的影响。选择胎次相近、体重200 kg、妊娠第30天的长×大二元杂交母猪40头,随机分为2组,每组20个重复,每个重复1头。对照组饲喂基础饲粮,试验组... 本试验旨在研究饲粮中添加玉米赤霉烯酮(ZEN)对母猪繁殖性能和胎盘免疫相关基因表达量的影响。选择胎次相近、体重200 kg、妊娠第30天的长×大二元杂交母猪40头,随机分为2组,每组20个重复,每个重复1头。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲粮在基础饲粮中添加1.5 mg/kg的ZEN。试验期74 d。结果表明,与对照组相比:1)饲粮中添加ZEN显著提高了妊娠期母猪死胎数和弱仔猪数(P<0.05),显著降低了母猪总产仔数(P<0.05);2)饲粮中添加ZEN显著提高了妊娠期母猪血清孕酮含量(P<0.05);3)饲粮中添加ZEN显著提高了妊娠期母猪胎盘中Toll样受体-2(TLR-2)和孕酮受体(PGR)基因表达量(P<0.05)。由此可见,母猪妊娠期饲粮中添加1.5 mg/kg ZEN可显著降低母猪总产仔数,并显著提高死胎数和弱仔猪数。饲粮中低水平的ZEN对母猪繁殖性能仍产生不利影响。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 母猪 繁殖性能 生殖激素 免疫球蛋白 基因表达
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河南商品蛋鸡群中鸡马立克氏病的流行病学研究 被引量：10
8
作者 禹乐乐 滕蔓 +5 位作者 罗俊 王新卫 宿靖伟 柴书军 王爱萍 张改平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期163-166,共4页
2011-2012年,河南省大面积暴发商品蛋鸡群肿瘤病,临床剖检疑似马立克氏病(Marek's disease,MD),为进一步确诊病因,根据马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)的meq、gB和pp38基因分别设计了3对特异性引物,利用PCR技术对送... 2011-2012年,河南省大面积暴发商品蛋鸡群肿瘤病,临床剖检疑似马立克氏病(Marek's disease,MD),为进一步确诊病因,根据马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)的meq、gB和pp38基因分别设计了3对特异性引物,利用PCR技术对送检的疑似病例鸡的肝脏和脾脏样品分别进行了检测和分析。结果显示,各地区随机抽取的5只病例鸡肝脏、脾脏样品中均扩增出3种不同大小的MDV特异性病毒基因PCR产物,这表明MDV在河南鸡群中广泛流行,并导致了商品蛋鸡群MD的暴发。研究结果填补了河南省MD流行病学空白,为今后MD的临床快速诊断及有效防控提供了重要参考依据。 展开更多
关键词 马立克氏病 流行病学 马立克氏病病毒 聚合酶链式反应
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猪瘟病毒C株E^(rns)/E2嵌合基因表达蛋白单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定 被引量：3
9
作者 王丽 李学伍 +6 位作者 腾蔓 杨艳艳 李娅丽 李艳蕊 赵东 柴书军 张改平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1126-1129,共4页
目的:制备抗猪瘟病毒(CSFV)C株Erns/E2嵌合基因表达蛋白的单克隆抗体(mAb),探讨Erns/E2蛋白的分子结构和生物学功能。方法:在大肠杆菌RosettaTM2(DE3)中表达了猪瘟病毒(CSFV)C株Erns、E2蛋白主要抗原域的嵌合基因CSFVErns/E2蛋白;以纯... 目的:制备抗猪瘟病毒(CSFV)C株Erns/E2嵌合基因表达蛋白的单克隆抗体(mAb),探讨Erns/E2蛋白的分子结构和生物学功能。方法:在大肠杆菌RosettaTM2(DE3)中表达了猪瘟病毒(CSFV)C株Erns、E2蛋白主要抗原域的嵌合基因CSFVErns/E2蛋白;以纯化复性后的CSFVErns/E2为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗CSFVErns/E2 mAb;利用间接ELISA、Western blot、Dotblot方法鉴定mAb生物学特性。结果:获得了1株稳定分泌抗CSFVErns/E2融合蛋白的单克隆杂交瘤细胞系C8株,该株mAb的细胞培养上清效价为1∶6400,小鼠腹水效价1∶2×105。其免疫球蛋白亚类为IgG1。间接ELISA和Western blot结果显示该株mAb不与猪瘟C株细胞毒、pET-32a标签蛋白反应,仅与融合表达的CSFVErns/E2蛋白存在特异性反应。Dot blot结果表明其识别的抗原表位为E2蛋白的RSGL-CPFDTSPV氨基酸序列。结论:获得了一株能特异识别E2蛋白抗原表位的mAb,为进一步研究CSFV的分子结构及功能奠定了物质基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 CSFV Erns/E2 嵌合基因 融合蛋白 单克隆杂交瘤细胞系
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RNA干扰技术及其在动物疾病研究中的应用 被引量：6
10
作者 范璐 樊剑鸣 +1 位作者 张改平 王爱萍 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期63-69,共7页
RNA干扰(RNA interference)是存在于真核细胞中的基因特异性沉默机制,可以抑制病毒抗原基因的表达或抵御转座子转座。自从发现以来,RNAi技术已在基因的功能性研究上显示出了强大的优势,特别是在动物病毒性疾病的治疗和预防上,相对于传... RNA干扰(RNA interference)是存在于真核细胞中的基因特异性沉默机制,可以抑制病毒抗原基因的表达或抵御转座子转座。自从发现以来,RNAi技术已在基因的功能性研究上显示出了强大的优势,特别是在动物病毒性疾病的治疗和预防上,相对于传统的疫苗预防和药物治疗有着无可比拟的优越性。在动物细胞中转入针对特异病毒的小干扰RNA(siRNA)或短发卡RNA(shRNA)激活RNAi通路可有效抑制病毒的复制。阐述RNA干扰的发生机制及其在动物疾病防治中的应用。 展开更多
关键词 RNAI SIRNA SHRNA 机制 动物疾病
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免疫分析技术在“新型瘦肉精”残留检测中的应用 被引量：5
11
作者 王耀 曹金博 +5 位作者 陈曦 李燕虹 陈秀金 李兆周 邓瑞广 胡骁飞 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期231-235,共5页
近年来,一些"新型瘦肉精"药物被非法用于畜禽养殖,如苯乙醇胺A、赛庚啶、可乐定等,该类药物添加在饲料和动物饮水中能有效促进禽畜生长,提高瘦肉率,降低养殖成本,但其在肉制品中的残留会对人体产生蓄积毒性。免疫分析技术利... 近年来,一些"新型瘦肉精"药物被非法用于畜禽养殖,如苯乙醇胺A、赛庚啶、可乐定等,该类药物添加在饲料和动物饮水中能有效促进禽畜生长,提高瘦肉率,降低养殖成本,但其在肉制品中的残留会对人体产生蓄积毒性。免疫分析技术利用高亲和力抗体对抗原进行特异识别,灵敏度高,是目前快速检测方法研究的热点之一,已在"传统瘦肉精"的快速检测中成熟应用,但其在"新型瘦肉精"快速检测中的应用仍处于起步阶段。该文对免疫分析技术在"新型瘦肉精"残留检测中的应用进行综述,并对其未来发展方向进行展望。 展开更多
关键词 新型瘦肉精 免疫分析 应用
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gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞生物学行为的影响 被引量：3
12
作者 余祖华 丁轲 +11 位作者 郁川 贾艳艳 何雷 廖成水 李静 张春杰 李银聚 吴庭才 程相朝 张梦珂 邱静静 罗俊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2496-2504,共9页
为了解gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞生物学行为的影响,将人工合成的gga-miR-155模拟物、gga-miR-155抑制物以及阴性对照瞬时转染MDCC-MSB1细胞。然后采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MDCC-MSB1细胞中gga-miR-155的表达水平,CCK-8法检测... 为了解gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞生物学行为的影响,将人工合成的gga-miR-155模拟物、gga-miR-155抑制物以及阴性对照瞬时转染MDCC-MSB1细胞。然后采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MDCC-MSB1细胞中gga-miR-155的表达水平,CCK-8法检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测MDCC-MSB1细胞的细胞周期与凋亡的变化,Transwell检测MDCC-MSB1细胞的迁移、侵袭能力的变化。结果显示,gga-miR-155模拟物可显著上调MDCC-MSB1细胞gga-miR-155表达水平,促进MDCC-MSB1细胞增殖,细胞G1期细胞减少,S和G2期细胞增加,同时凋亡减少,迁移、侵袭能力增加;gga-miR-155抑制物可显著下调MDCCMSB1细胞gga-miR-155表达水平,抑制MDCC-MSB1细胞增殖,细胞G1期细胞增加、S和G2期细胞减少,同时凋亡增加,迁移、侵袭能力下降。结果表明,gga-miR-155可促进MDCC-MSB1细胞增殖、迁移和侵袭,抑制其凋亡。 展开更多
关键词 gga-miR-155 MDCC-MSB1细胞 细胞增殖 细胞凋亡 迁移 侵袭
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传染性法氏囊病病毒VP2蛋白B细胞抗原表位免疫小鼠试验 被引量：3
13
作者 肖治军 张改平 +7 位作者 杨汉春 杨艳艳 赵东 李学伍 邓瑞广 柴书军 邢广旭 杨继飞 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第2期233-235,共3页
为检测Ⅰ型IBDVVP2蛋白线性B细胞抗原表位肽PJ14和PJ5的免疫原性,将人工合成并纯化的PJ14和PJ5分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联;将与BSA偶联的PJ14和PJ5分别免疫BALB/c小鼠,然后以与OVA偶联的PJ14和PJ5作为间接酶联免疫... 为检测Ⅰ型IBDVVP2蛋白线性B细胞抗原表位肽PJ14和PJ5的免疫原性,将人工合成并纯化的PJ14和PJ5分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联;将与BSA偶联的PJ14和PJ5分别免疫BALB/c小鼠,然后以与OVA偶联的PJ14和PJ5作为间接酶联免疫吸附试验抗原,分别测定免疫鼠血清中抗相应多肽的抗体。结果显示,免疫小鼠产生了抗PJ14和PJ5的抗体,抗体持续期达21周。表明PJ14和PJ5具有免疫原性。 展开更多
关键词 IBDV VP2蛋白 合成肽 抗原表位 免疫
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动物性食品中玉米赤霉醇残留检测方法的研究进展 被引量：3
14
作者 张小帆 侯玉泽 +4 位作者 胡骁飞 蔡齐超 张改平 李兆周 李道敏 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第7期286-291,共6页
玉米赤霉醇是玉米赤霉烯酮的还原产物,曾作为生长促进剂广泛使用。在动物体内残留后,玉米赤霉醇能通过食物链进入人体,引起人体内分泌失调、肿瘤、生长发育障碍、出生缺陷和生育缺陷、影响第二性征发育等,并且具有潜在的致癌性。玉米赤... 玉米赤霉醇是玉米赤霉烯酮的还原产物,曾作为生长促进剂广泛使用。在动物体内残留后,玉米赤霉醇能通过食物链进入人体,引起人体内分泌失调、肿瘤、生长发育障碍、出生缺陷和生育缺陷、影响第二性征发育等,并且具有潜在的致癌性。玉米赤霉醇经动物体排出后,还可以通过饮水和食物造成环境污染以及二次污染,目前已被禁用。本文就玉米赤霉醇的性质与相关毒性、应用及残留检测方法等进行简要阐述,为更进一步研究玉米赤霉醇的残留提供基础。 展开更多
关键词 玉米赤霉醇 毒性 残留检测
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乙脑病毒Henan-09-03株E蛋白结构与功能生物信息学分析 被引量：2
15
作者 张二芹 滕蔓 +4 位作者 罗俊 王瑞宁 许倩茹 邓瑞广 张改平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期36-40,共5页
利用生物信息学软件对Henan-09-03株乙型脑炎病毒(JEV)病毒E蛋白(囊膜蛋白)进行生物信息学分析、预测,为研究JEV的E蛋白基因工程疫苗提供依据。结果表明:E蛋白的分子质量为53 k Da,等电点是7.75,消光系数是66 515,不稳定系数为27.05,疏... 利用生物信息学软件对Henan-09-03株乙型脑炎病毒(JEV)病毒E蛋白(囊膜蛋白)进行生物信息学分析、预测,为研究JEV的E蛋白基因工程疫苗提供依据。结果表明:E蛋白的分子质量为53 k Da,等电点是7.75,消光系数是66 515,不稳定系数为27.05,疏水平均值为-0.007,无信号肽,有2个跨膜区、27个蛋白修饰位点、5个二硫键、15个蛋白质结合位点,二级结构为α-β混合型、三级结构以同源四聚体形式存在。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 E蛋白 生物信息学分析
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动物源性食品中抗司帕沙星单克隆抗体的研制与鉴定
16
作者 曹德玉 郭淼 +5 位作者 贾国超 胡骁飞 王方雨 刘珍 杨幸东 张改平 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期18-21,共4页
为了制备高灵敏、高特异性的司帕沙星（SPFX）单克隆抗体,鉴定免疫学特性。采用蛋白质偶联技术DCC法制备免疫抗原SPFX-BSA和包被抗原SPFX-OVA,免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA和阻断ELISA选出产生优质多克隆抗体的的小鼠进行细胞融合,经过... 为了制备高灵敏、高特异性的司帕沙星（SPFX）单克隆抗体,鉴定免疫学特性。采用蛋白质偶联技术DCC法制备免疫抗原SPFX-BSA和包被抗原SPFX-OVA,免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA和阻断ELISA选出产生优质多克隆抗体的的小鼠进行细胞融合,经过多次亚克隆筛选出分泌高敏感的特异性抗SPFX单克隆抗体的杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备抗SPFX的单克隆抗体并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,间接ELISA检测显示免疫的6只小鼠效价均达1.28：10~4以上,融合后筛选出四株杂交瘤细胞株4H4-C8,4H4-C4,4H4-B1和4H4-E9;其细胞上清效价分别为1：1.4×10~3,1：8.0×10~2,1：5.0×10~2,1：6.7×10~2;4H4-C8株腹水效价为1：2.6×10~6,抗SPFX的单克隆抗体对SPFX的IC_（50）为31μg/L,且具有较好的特异性。本研究成功合成SPFX人工抗原,制备出优质的单克隆抗体,为SPFX免疫学快速检测方法的建立奠定坚实的基础。 展开更多
关键词 司帕沙星 人工抗原 单克隆抗体 免疫学特性
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免疫分析技术在四环素类抗生素残留检测中的应用 被引量：18
17
作者 曹金博 王耀 +4 位作者 胡骁飞 邓瑞广 李燕虹 孟继秋 古绍彬 《饲料工业》 北大核心 2019年第12期53-59,共7页
四环素类抗生素一类广谱性抗生素,主要用于治疗各种感染性疾病,但长期的违规滥用,导致其在动物源性食品以及环境中大量残留,严重威胁人类健康。因此,急需建立简单、灵敏的快速检测方法。免疫分析技术因其特异性强、灵敏度高等优势已成... 四环素类抗生素一类广谱性抗生素,主要用于治疗各种感染性疾病,但长期的违规滥用,导致其在动物源性食品以及环境中大量残留,严重威胁人类健康。因此,急需建立简单、灵敏的快速检测方法。免疫分析技术因其特异性强、灵敏度高等优势已成为快速检测方法研究的热点。本文主要综述了已在四环素类抗生素残留检测中应用的放射性免疫、酶联免疫、胶体金免疫层析以及电化学免疫传感器免疫分析方法,并对其发展方向进行展望。 展开更多
关键词 四环素类抗生素 残留 免疫分析 快速检测
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猪瘟病毒E2蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析 被引量：4
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作者 王冬雨 魏蔷 +4 位作者 刘运超 刘畅 杨棋 崔颖磊 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第3期128-133,143,共7页
为制备具有免疫原性的猪瘟病毒E2蛋白,在大肠杆菌中表达E2蛋白,并对其进行纯化及免疫原性分析。将E2基因插入原核表达载体p ET-28a,构建重组质粒p ET-28a-E2,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western ... 为制备具有免疫原性的猪瘟病毒E2蛋白,在大肠杆菌中表达E2蛋白,并对其进行纯化及免疫原性分析。将E2基因插入原核表达载体p ET-28a,构建重组质粒p ET-28a-E2,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot分析结果显示,成功表达了可溶性E2蛋白。对IPTG浓度及诱导温度和时间进行优化,结果显示,IPTG终浓度为0.1 mmol/L时,18℃条件下诱导表达16 h,E2蛋白的可溶性表达量最高。通过分子筛一步纯化E2蛋白,其终质量浓度为0.5 g/L。Western blot分析和间接ELISA结果显示,纯化后的E2蛋白在变性及非变性条件下都能够被猪瘟阳性血清特异性识别,表明纯化后的E2蛋白活性良好。将纯化后的E2蛋白添加弗氏佐剂乳化后免疫BALB/C小鼠,采集血清进行病毒中和试验,结果显示,免疫后56 d产生较高水平的中和抗体,表明E2蛋白免疫原性良好。综上,成功利用大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达了可溶性E2蛋白,且纯化后的E2蛋白免疫原性良好。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 蛋白质纯化 血清学分析 免疫原性
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猪瘟病毒E2蛋白酵母表达及其免疫活性研究 被引量：1
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作者 周稳 金前跃 +9 位作者 陈晓 丁培阳 李旭峰 王垚 柴永笑 张雨航 周恩民 郭军庆 郅玉宝 张改平 《动物医学进展》 北大核心 2020年第1期1-7,共7页
猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,呈世界性分布,对养猪业危害严重。猪瘟病毒属于黄病毒科、瘟病毒属,在自然条件下只感染猪。E2蛋白是猪瘟病毒的重要结构蛋白,也是猪瘟病毒的主要保护性抗原。以猪... 猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,呈世界性分布,对养猪业危害严重。猪瘟病毒属于黄病毒科、瘟病毒属,在自然条件下只感染猪。E2蛋白是猪瘟病毒的重要结构蛋白,也是猪瘟病毒的主要保护性抗原。以猪瘟病毒E2蛋白胞外区基因为模板,构建毕赤酵母表达载体pPICZαA-E2,并通过电转获得毕赤酵母X-33阳性克隆,经SDS-PAGE、Western blot鉴定筛选出猪瘟病毒E2蛋白表达菌株。通过亲和层析技术纯化蛋白,并将蛋白免疫动物,进行免疫原性分析。结果表明,猪瘟病毒E2蛋白在毕赤酵母中成功分泌性表达,经纯化纯度达95%以上;动物试验显示,该蛋白具有良好的免疫原性,为猪瘟病毒亚单位疫苗及相关检测技术的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 毕赤酵母 蛋白纯化 免疫活性
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传染性法氏囊病毒VP2蛋白的高效表达与免疫原性分析 被引量：2
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作者 杨棋 魏蔷 +4 位作者 刘运超 冯华 蒋大伟 陈玉梅 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第5期124-128,共5页
为了实现传染性法氏囊病毒(IBDV)B87毒株VP2蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达,将IBDV B87毒株VP2基因插入原核表达载体p ET-28a(+),构建重组质粒p ET28a-VP2,将其转化不同大肠杆菌基因工程菌株,通过IPTG诱导表达VP2外源蛋白。利用鸡传... 为了实现传染性法氏囊病毒(IBDV)B87毒株VP2蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达,将IBDV B87毒株VP2基因插入原核表达载体p ET-28a(+),构建重组质粒p ET28a-VP2,将其转化不同大肠杆菌基因工程菌株,通过IPTG诱导表达VP2外源蛋白。利用鸡传染性法氏囊病抗原快速检测试纸筛选,确定了BL21(DE3)为VP2可溶性蛋白的高效表达菌株。SDS-PAGE、Western blot分析表明,VP2实现了可溶性表达,且可溶性VP2蛋白具有良好的反应原性。将表达的重组蛋白利用琼脂扩散试验(AGP)分析,结果表明,VP2蛋白的AGP效价达到1∶64。将重组蛋白免疫接种SPF鸡,制备的抗血清AGP效价可达1∶16,说明表达的B87毒株VP2蛋白免疫原性良好。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病毒 B87毒株 VP2蛋白 原核表达 免疫原性
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