伏马菌素B_1单克隆抗体的制备及免疫学检测方法初步应用 被引量：7

1

作者 姚静静 胡骁飞 +4 位作者 韩俊岭 李青梅 王方雨 邓瑞广 张改平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1009-1017,共9页

拟制备灵敏高、特异性强的抗伏马菌素B_1(FB_1)单克隆抗体,并初步应用于FB_1的检测,以期为FB_1的免疫学快速检测提供技术支持。采用碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原FB_1-BSA和FB_1-OVA。以免疫原FB_1-BSA免疫BALB/c小鼠,每四周免疫一次。... 拟制备灵敏高、特异性强的抗伏马菌素B_1(FB_1)单克隆抗体,并初步应用于FB_1的检测,以期为FB_1的免疫学快速检测提供技术支持。采用碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原FB_1-BSA和FB_1-OVA。以免疫原FB_1-BSA免疫BALB/c小鼠,每四周免疫一次。四免后,小鼠脾B细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后,采用ELISA筛选,建立分泌抗FB_1抗体的单克隆杂交瘤细胞株;采用动物体内诱生腹水方法制备出抗FB_1单抗,并鉴定单抗的各种性能;初步建立FB_1免疫学检测方法。结果得到1株稳定分泌抗FB_1单抗的杂交瘤细胞株2E11-H3,该细胞株分泌的mAbs的效价高达1∶1.02×10~6,亲和力常数平均值为7.98×10^(10) L·mol^(-1),亚型为IgG_3。FB_1mAbs的工作浓度为1∶6.0×10~4,与FB_1发生特异性反应,间接竞争ELISA测得IC_(50)=43.65ng·mL^(-1);与FB_1结构类似物FB_2和FB_3的交叉反应率分别为385%和72.4%,与其他霉菌毒素及载体蛋白BSA和OVA均无交叉反应。样品回收率在85.85%~114.07%,平均值为98.81%;变异系数为10.11%。本研究制备出了灵敏度高、特异性强、亲和力高的FB_1单抗,并初步建立FB_1免疫学检测方法。 展开更多

关键词 伏马菌素B1 单克隆抗体 杂交瘤 ELISA

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大豆过敏原免疫学检测方法研究进展 被引量：6

2

作者 王耀 邓瑞广 +3 位作者 张改平 王方雨 李志西 胡骁飞 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第8期143-146,共4页

作为一种重要的粮食作物,大豆应用广泛并在人类和动物营养方面起着至关重要的作用,但大豆中也含有多种过敏原,能够诱发超敏反应,导致机体损伤。随着人们对食品过敏问题的日益重视,各种针对大豆过敏原的快速、准确的检测方法得到了发展,... 作为一种重要的粮食作物,大豆应用广泛并在人类和动物营养方面起着至关重要的作用,但大豆中也含有多种过敏原,能够诱发超敏反应,导致机体损伤。随着人们对食品过敏问题的日益重视,各种针对大豆过敏原的快速、准确的检测方法得到了发展,其中免疫学方法具有灵敏性高、特异性强的特点,能够对过敏原进行定性、定量检测而成为研究热点。本文综述了针对大豆过敏原的免疫学检测方法,并对今后的研究方向进行了初步探讨。 展开更多

关键词 大豆 过敏原 免疫学检测

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免疫分析技术在“新型瘦肉精”残留检测中的应用 被引量：5

3

作者 王耀 曹金博 +5 位作者 陈曦 李燕虹 陈秀金 李兆周 邓瑞广 胡骁飞 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期231-235,共5页

近年来,一些"新型瘦肉精"药物被非法用于畜禽养殖,如苯乙醇胺A、赛庚啶、可乐定等,该类药物添加在饲料和动物饮水中能有效促进禽畜生长,提高瘦肉率,降低养殖成本,但其在肉制品中的残留会对人体产生蓄积毒性。免疫分析技术利... 近年来,一些"新型瘦肉精"药物被非法用于畜禽养殖,如苯乙醇胺A、赛庚啶、可乐定等,该类药物添加在饲料和动物饮水中能有效促进禽畜生长,提高瘦肉率,降低养殖成本,但其在肉制品中的残留会对人体产生蓄积毒性。免疫分析技术利用高亲和力抗体对抗原进行特异识别,灵敏度高,是目前快速检测方法研究的热点之一,已在"传统瘦肉精"的快速检测中成熟应用,但其在"新型瘦肉精"快速检测中的应用仍处于起步阶段。该文对免疫分析技术在"新型瘦肉精"残留检测中的应用进行综述,并对其未来发展方向进行展望。 展开更多

关键词 新型瘦肉精 免疫分析 应用

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gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞生物学行为的影响 被引量：3

4

作者 余祖华 丁轲 +11 位作者 郁川 贾艳艳 何雷 廖成水 李静 张春杰 李银聚 吴庭才 程相朝 张梦珂 邱静静 罗俊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2496-2504,共9页

为了解gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞生物学行为的影响,将人工合成的gga-miR-155模拟物、gga-miR-155抑制物以及阴性对照瞬时转染MDCC-MSB1细胞。然后采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MDCC-MSB1细胞中gga-miR-155的表达水平,CCK-8法检测... 为了解gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞生物学行为的影响,将人工合成的gga-miR-155模拟物、gga-miR-155抑制物以及阴性对照瞬时转染MDCC-MSB1细胞。然后采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MDCC-MSB1细胞中gga-miR-155的表达水平,CCK-8法检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测MDCC-MSB1细胞的细胞周期与凋亡的变化,Transwell检测MDCC-MSB1细胞的迁移、侵袭能力的变化。结果显示,gga-miR-155模拟物可显著上调MDCC-MSB1细胞gga-miR-155表达水平,促进MDCC-MSB1细胞增殖,细胞G1期细胞减少,S和G2期细胞增加,同时凋亡减少,迁移、侵袭能力增加;gga-miR-155抑制物可显著下调MDCCMSB1细胞gga-miR-155表达水平,抑制MDCC-MSB1细胞增殖,细胞G1期细胞增加、S和G2期细胞减少,同时凋亡增加,迁移、侵袭能力下降。结果表明,gga-miR-155可促进MDCC-MSB1细胞增殖、迁移和侵袭,抑制其凋亡。 展开更多

关键词 gga-miR-155 MDCC-MSB1细胞 细胞增殖 细胞凋亡 迁移 侵袭

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动物性食品中玉米赤霉醇残留检测方法的研究进展 被引量：3

5

作者 张小帆 侯玉泽 +4 位作者 胡骁飞 蔡齐超 张改平 李兆周 李道敏 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第7期286-291,共6页

玉米赤霉醇是玉米赤霉烯酮的还原产物,曾作为生长促进剂广泛使用。在动物体内残留后,玉米赤霉醇能通过食物链进入人体,引起人体内分泌失调、肿瘤、生长发育障碍、出生缺陷和生育缺陷、影响第二性征发育等,并且具有潜在的致癌性。玉米赤... 玉米赤霉醇是玉米赤霉烯酮的还原产物,曾作为生长促进剂广泛使用。在动物体内残留后,玉米赤霉醇能通过食物链进入人体,引起人体内分泌失调、肿瘤、生长发育障碍、出生缺陷和生育缺陷、影响第二性征发育等,并且具有潜在的致癌性。玉米赤霉醇经动物体排出后,还可以通过饮水和食物造成环境污染以及二次污染,目前已被禁用。本文就玉米赤霉醇的性质与相关毒性、应用及残留检测方法等进行简要阐述,为更进一步研究玉米赤霉醇的残留提供基础。 展开更多

关键词 玉米赤霉醇 毒性 残留检测

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动物源性食品中抗司帕沙星单克隆抗体的研制与鉴定

6

作者 曹德玉 郭淼 +5 位作者 贾国超 胡骁飞 王方雨 刘珍 杨幸东 张改平 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期18-21,共4页

为了制备高灵敏、高特异性的司帕沙星（SPFX）单克隆抗体,鉴定免疫学特性。采用蛋白质偶联技术DCC法制备免疫抗原SPFX-BSA和包被抗原SPFX-OVA,免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA和阻断ELISA选出产生优质多克隆抗体的的小鼠进行细胞融合,经过... 为了制备高灵敏、高特异性的司帕沙星（SPFX）单克隆抗体,鉴定免疫学特性。采用蛋白质偶联技术DCC法制备免疫抗原SPFX-BSA和包被抗原SPFX-OVA,免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA和阻断ELISA选出产生优质多克隆抗体的的小鼠进行细胞融合,经过多次亚克隆筛选出分泌高敏感的特异性抗SPFX单克隆抗体的杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备抗SPFX的单克隆抗体并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,间接ELISA检测显示免疫的6只小鼠效价均达1.28：10~4以上,融合后筛选出四株杂交瘤细胞株4H4-C8,4H4-C4,4H4-B1和4H4-E9;其细胞上清效价分别为1：1.4×10~3,1：8.0×10~2,1：5.0×10~2,1：6.7×10~2;4H4-C8株腹水效价为1：2.6×10~6,抗SPFX的单克隆抗体对SPFX的IC_（50）为31μg/L,且具有较好的特异性。本研究成功合成SPFX人工抗原,制备出优质的单克隆抗体,为SPFX免疫学快速检测方法的建立奠定坚实的基础。 展开更多

关键词 司帕沙星 人工抗原 单克隆抗体 免疫学特性

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猪瘟病毒E2蛋白酵母表达及其免疫活性研究 被引量：1

7

作者 周稳 金前跃 +9 位作者 陈晓 丁培阳 李旭峰 王垚 柴永笑 张雨航 周恩民 郭军庆 郅玉宝 张改平 《动物医学进展》 北大核心 2020年第1期1-7,共7页

猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,呈世界性分布,对养猪业危害严重。猪瘟病毒属于黄病毒科、瘟病毒属,在自然条件下只感染猪。E2蛋白是猪瘟病毒的重要结构蛋白,也是猪瘟病毒的主要保护性抗原。以猪... 猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,呈世界性分布,对养猪业危害严重。猪瘟病毒属于黄病毒科、瘟病毒属,在自然条件下只感染猪。E2蛋白是猪瘟病毒的重要结构蛋白,也是猪瘟病毒的主要保护性抗原。以猪瘟病毒E2蛋白胞外区基因为模板,构建毕赤酵母表达载体pPICZαA-E2,并通过电转获得毕赤酵母X-33阳性克隆,经SDS-PAGE、Western blot鉴定筛选出猪瘟病毒E2蛋白表达菌株。通过亲和层析技术纯化蛋白,并将蛋白免疫动物,进行免疫原性分析。结果表明,猪瘟病毒E2蛋白在毕赤酵母中成功分泌性表达,经纯化纯度达95%以上;动物试验显示,该蛋白具有良好的免疫原性,为猪瘟病毒亚单位疫苗及相关检测技术的开发奠定了基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 毕赤酵母 蛋白纯化 免疫活性

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食品中百菌清残留检测方法研究进展 被引量：16

8

作者 王玲玲 侯玉泽 +3 位作者 职爱民 李文君 胡骁飞 邓瑞广 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第7期326-329,共4页

百菌清(CTN)是一种广泛、保护性有机氯杀菌剂,常用于防治蔬菜、瓜果、花生、水稻、小麦等作物真菌病害,但因其毒性及残留问题对环境和人体健康的危害,对其残留检测日益受到人们的重视。本文就CTN的性质与应用、毒性及残留检测方法等进... 百菌清(CTN)是一种广泛、保护性有机氯杀菌剂,常用于防治蔬菜、瓜果、花生、水稻、小麦等作物真菌病害,但因其毒性及残留问题对环境和人体健康的危害,对其残留检测日益受到人们的重视。本文就CTN的性质与应用、毒性及残留检测方法等进行阐述,旨在为CTN的检测研发提供一定的参考。 展开更多

关键词 百菌清 毒性 残留检测方法

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马立克病病毒超强毒株GX0101感染宿主部分病毒基因表达水平及致病阶段分析 被引量：5

9

作者 马圣明 滕蔓 +5 位作者 余祖华 党露 李会珍 丁轲 邓瑞广 罗俊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1635-1644,共10页

旨在探讨马立克病病毒（MDV）超强毒株GX0101对宿主的感染过程及致病阶段,即＂Cornell模型＂,为进一步使用该毒株研究MDV的致病或致瘤机制奠定基础。用GX0101接种1日龄SPF鸡,建立了感染宿主的动物模型;然后用RT-qPCR分析10个具有代表性... 旨在探讨马立克病病毒（MDV）超强毒株GX0101对宿主的感染过程及致病阶段,即＂Cornell模型＂,为进一步使用该毒株研究MDV的致病或致瘤机制奠定基础。用GX0101接种1日龄SPF鸡,建立了感染宿主的动物模型;然后用RT-qPCR分析10个具有代表性的MDV蛋白编码基因在感染不同时间点的动态基因转录水平。结果显示,GX0101感染发病鸡的临床症状及剖检病变与典型的马立克病一致;MDV编码的结构蛋白基因gB、gE和UL6、非结构蛋白基因UL42和UL52、立早期基因ICP4、水平传播相关基因UL13以及磷酸化蛋白基因pp38具有相似的转录水平和趋势,均在GX0101感染后7d上升至第一个峰值,10d降至低谷,14d又逐渐升高并在21d达到第二个峰值,30~60d逐渐下降并处于较低的转录水平;MDV编码的原癌基因meq和毒力相关基因RLORF6在GX0101感染7d即持续升高,并在14~60d的试验周期内较长时间处于高转录水平。结合作者此前研究及本文结果分析,GX0101感染宿主的＂Cornell模型＂：早期增殖性-限制性感染期为1~7d,潜伏感染期约为10d前后,晚期溶细胞性感染及免疫抑制期发生于14~21d,而T细胞转化及淋巴瘤形成阶段可能在14d前后就已经开始。 展开更多

关键词 马立克病病毒 超强毒株 GX0101 实时荧光定量PCR 基因表达 致病阶段

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稀土发光材料及其在食品安全检测中的应用 被引量：3

10

作者 宋春美 职爱民 +2 位作者 贾国超 胥传来 张改平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第11期300-304,共5页

稀土发光材料作为新型功能材料具有巨大的发展潜力。本文介绍稀土发光材料的种类、发光机理、发光性能、合成方法,总结稀土发光材料在食品安全检测中的应用情况,最后对其发展前景进行展望,以期为稀土发光材料更深入的发展和更广泛的应... 稀土发光材料作为新型功能材料具有巨大的发展潜力。本文介绍稀土发光材料的种类、发光机理、发光性能、合成方法,总结稀土发光材料在食品安全检测中的应用情况,最后对其发展前景进行展望,以期为稀土发光材料更深入的发展和更广泛的应用提供一定的参考。 展开更多

关键词 稀土发光材料 食品安全 检测 免疫标记

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上转换荧光技术在食品安全检测中的应用 被引量：5

11

作者 贾国超 职爱民 +3 位作者 宋春美 张静 李梦琴 张改平 《食品安全质量检测学报》 CAS 2012年第6期569-574,共6页

上转换荧光技术是基于上转磷光体的新型检测技术,因其独特优越性,成为标记检测技术中新的研究热点。本文综述了上转换荧光技术的研究机制、国内外实际应用和发展状况等。发现该技术在大肠杆菌、布鲁氏菌、链球菌等食品安全检测中应用效... 上转换荧光技术是基于上转磷光体的新型检测技术,因其独特优越性,成为标记检测技术中新的研究热点。本文综述了上转换荧光技术的研究机制、国内外实际应用和发展状况等。发现该技术在大肠杆菌、布鲁氏菌、链球菌等食品安全检测中应用效果极佳,但当前技术仍有一定缺陷,亟需通过改进合成工艺、表面修饰等方法完善,进一步推进其在食品安全检测领域的应用。 展开更多

关键词 上转换荧光技术 上转磷光体 食品安全应用

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马立克病病毒与禽网状内皮增生病病毒的混合感染及在传代过程中的重组 被引量：3

12

作者 宿靖伟 滕蔓 +5 位作者 罗俊 迟佳琦 余祖华 禹乐乐 胡博 张改平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期128-134,共7页

旨在了解国内鸡群马立克病病毒(MDV)和禽网状内皮增生病病毒(REV)的混合感染及自然重组状况,探讨两种病原的基因重组对MDV病原学特性的潜在影响及危害。利用PCR扩增、序列测定及间接免疫荧光试验(IFA),对来自河南商品蛋鸡群的17个MDV分... 旨在了解国内鸡群马立克病病毒(MDV)和禽网状内皮增生病病毒(REV)的混合感染及自然重组状况,探讨两种病原的基因重组对MDV病原学特性的潜在影响及危害。利用PCR扩增、序列测定及间接免疫荧光试验(IFA),对来自河南商品蛋鸡群的17个MDV分离株进行研究。结果表明,其中两个毒株HNGS206和HNXZ103的病毒基因组中存在REV—LTR的重组插入。进一步的IFA结果显示,HNGS206和HNXZ103并非MDV与REV的自然重组流行毒株,这两个毒株基因组中LTR的插入发生于临床病例鸡混合感染后的病毒分离及传代培养过程中。结果提示,虽然目前国内鸡群中MDV和REV的混合感染较为普遍,但MDV与REV自然重组毒株的流行状况仍需要进一步的流行病学监测。 展开更多

关键词 马立克病病毒 禽网状内皮增生病病毒 流行病学 混合感染 病毒传代 基因重组

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鸡TGFβ1对MDCC-MSB1细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响 被引量：3

13

作者 余祖华 丁轲 +13 位作者 贾艳艳 郁川 何雷 廖成水 李静 张春杰 李银聚 吴庭才 程相朝 门凯凯 张瑾 余祖玲 周子誉 罗俊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2567-2575,共9页

旨在探讨鸡TGFβ1对MDCC-MSB1细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。作者将构建的鸡TGFβ1过表达载体、干扰表达载体以及相应阴性对照转染MDCC-MSB1细胞,然后检测转染后各组细胞鸡TGFβ1的表达水平、细胞增殖能力、细胞周期与凋亡,细胞的... 旨在探讨鸡TGFβ1对MDCC-MSB1细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。作者将构建的鸡TGFβ1过表达载体、干扰表达载体以及相应阴性对照转染MDCC-MSB1细胞,然后检测转染后各组细胞鸡TGFβ1的表达水平、细胞增殖能力、细胞周期与凋亡,细胞的迁移与侵袭能力。结果显示,与相应阴性对照相比,转染TGFβ1过表达质粒可显著上调MDCC-MSB1细胞的TGFβ1表达水平,显著抑制MDCC-MSB1细胞的增殖,且使G1期细胞增加、S和G2期细胞减少,同时增加细胞凋亡率,降低细胞的迁移与侵袭能力;转染TGFβ1干扰表达质粒可显著下调MDCC-MSB1细胞的TGFβ1表达水平,显著促进MDCC-MSB1细胞的增殖,G1期细胞减少、S和G2期细胞增加,同时降低细胞凋亡率,增加细胞的迁移与侵袭能力。结果表明,鸡TGFβ1可抑制MDCC-MSB1细胞增殖、迁移与侵袭,促进其凋亡。 展开更多

关键词 TGFΒ1 MDCC-MSB1细胞 细胞增殖 细胞凋亡 迁移 侵袭

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新城疫病毒F蛋白在水稻中的表达及检测 被引量：3

14

作者 许倩茹 张二芹 +9 位作者 郭军庆 杨继飞 刘运超 王爱萍 王丽 万博 汪磊 蒋大伟 邓瑞广 张改平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1167-1172,共6页

旨在研究水稻表达新城疫病毒F蛋白,制备亚单位疫苗。根据GenBank中的新城疫病毒F基因序列以及水稻偏爱性密码子筛选、优化并合成F基因,通过两次载体构建,先使目的基因连在中间载体pMP3上,再连接到pCAMBIA1300植物载体上,通过农杆菌导入... 旨在研究水稻表达新城疫病毒F蛋白,制备亚单位疫苗。根据GenBank中的新城疫病毒F基因序列以及水稻偏爱性密码子筛选、优化并合成F基因,通过两次载体构建,先使目的基因连在中间载体pMP3上,再连接到pCAMBIA1300植物载体上,通过农杆菌导入水稻愈伤组织中,经过潮霉素抗性筛选,获得表达植株。通过QPCR的方法筛选获得高表达的纯合子株系5株。新城疫抗原试纸条检测和Western blot检测确定F蛋白具有良好的反应原性。本试验为家禽传染病的植物性水稻疫苗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 F基因 植物表达载体 QPCR 纯合子

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仔猪回肠绒毛M细胞的形态、分布及其与猪流行性腹泻病毒感染的关系 被引量：4

15

作者 李任峰 田香勤 +3 位作者 乔松林 郭军庆 周恩民 张改平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期581-586,共6页

为了探索新生仔猪回肠绒毛上皮是否存在M细胞以及自然感染条件下猪流行性腹泻病毒(PEDV)与回肠绒毛M细胞之间的关系。采用免疫荧光、免疫组化及形态学方法研究了正常情况下仔猪回肠绒毛M细胞的分布特点和形态学特征,以及自然感染条件下P... 为了探索新生仔猪回肠绒毛上皮是否存在M细胞以及自然感染条件下猪流行性腹泻病毒(PEDV)与回肠绒毛M细胞之间的关系。采用免疫荧光、免疫组化及形态学方法研究了正常情况下仔猪回肠绒毛M细胞的分布特点和形态学特征,以及自然感染条件下PEDV与仔猪回肠绒毛M细胞之间的关系。免疫荧光结果证实正常仔猪回肠绒毛上皮存在M细胞,沿隐窝至绒毛顶端上皮方向,M细胞的数量逐渐减少。电镜下,正常仔猪的回肠绒毛M细胞具有典型的M细胞特征。自然感染PEDV的仔猪回肠绒毛M细胞病变明显,在其顶膜、细胞质、细胞核及其上皮下层均观察到成簇的PEDV颗粒,而相邻的其他上皮细胞病变不明显,且细胞内没有观察到病毒粒子。以上研究结果表明,新生仔猪回肠绒毛上皮存在M细胞,在绒毛的不同位置其分布比例存在差异。仔猪回肠绒毛M细胞可能是PEDV入侵肠道的重要通道。 展开更多

关键词 肠绒毛M细胞 新生仔猪 猪流行性腹泻病毒

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猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白1α(nsp1α)的N端锌指结构是其抑制NLRP3炎症小体活性所必需 被引量：2

16

作者 王超 史西保 +5 位作者 王丽 陈静 司朝朝 王爱萍 邓瑞广 张改平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2032-2039,共8页

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害养猪业的病毒性传染病之一,其致病原猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抑制宿主的天然免疫和特异性免疫反应,引起机体免疫抑制,造成持续性感染,从而给该病的防控带来困难。NLRP3炎症小体作为先天性免疫... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害养猪业的病毒性传染病之一,其致病原猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抑制宿主的天然免疫和特异性免疫反应,引起机体免疫抑制,造成持续性感染,从而给该病的防控带来困难。NLRP3炎症小体作为先天性免疫的重要组分在机体抗病毒中发挥重要作用。前期研究发现PRRSV能够激活NLRP3炎症小体,但PRRSV是否存在拮抗NLRP3炎症小体的组分还未见报道。本研究首先在缺失内源性炎症小体的HEK293T细胞中,共转染NLRP3、ASC、procaspase-1和pro-IL-1β四个真核表达质粒,建立NLRP3炎症小体的体外研究模型。然后,在该炎症小体模型细胞和猪肺泡巨噬细胞中,转染PRRSV nsp1α的真核表达质粒,结果表明nsp1α能够明显拮抗炎症小体的活化,而进一步的突变试验表明缺失N端锌指(ZF)结构或者突变ZF结构的nsp1α均不能抑制NLRP3炎症小体活化。本研究不仅首次发现了拮抗NLRP3炎症小体活化的PRRSV蛋白——nsp1α,而且发现nsp1α的N端锌指结构是其抑制NLRP3炎症小体活性所必需。本研究进一步发现了PRRSV拮抗天然免疫的新机制,并为PRRSV的防控提供了潜在的分子靶点和理论指导。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp1α ZF结构域 NLRP3炎症小体 IL-1Β

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猪圆环病毒2型靶细胞及其受体的研究进展 被引量：2

17

作者 李鹏 王利平 +2 位作者 朱艳平 王选年 张改平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第1期25-28,共4页

猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)是统称为猪圆环病毒相关疾病(porcine circovirus-associated disease,PCVAD)的几个综合征的主要致病因子。目前,对PCV2配体表位和细胞受体在病毒入侵过程中的致病机理还不清楚,受体识别... 猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)是统称为猪圆环病毒相关疾病(porcine circovirus-associated disease,PCVAD)的几个综合征的主要致病因子。目前,对PCV2配体表位和细胞受体在病毒入侵过程中的致病机理还不清楚,受体识别是病毒黏附到宿主细胞表面的第一步,在病毒入侵和致病机理方面起到重要的作用。作者对近几年来PCV2侵染的靶细胞及其靶细胞受体的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 靶细胞 细胞受体

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8株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的变异分析 被引量：1

18

作者 刘明阳 张改平 +5 位作者 郝慧芳 乔松林 万博 鲍登克 郭成留 王爱萍 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期592-597,共6页

本研究拟初步了解中原地区近期猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况。对2011—2012年间从河南及周边省份发病猪场分离的8株PRRSV毒株Nsp2基因变异区进行RT-PCR扩增,同时对主要结构蛋白GP5基因进行克隆测序并与GenBank中登录的中国... 本研究拟初步了解中原地区近期猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况。对2011—2012年间从河南及周边省份发病猪场分离的8株PRRSV毒株Nsp2基因变异区进行RT-PCR扩增,同时对主要结构蛋白GP5基因进行克隆测序并与GenBank中登录的中国历年来流行的PRRSV代表毒株的GP5蛋白序列进行遗传进化分析,对主要氨基酸基序进行比对分析。结果表明,2011—2012年在中原地区分离的8株PRRSV分离株均为Nsp2缺失变异株,GP5基因与2006年中国高致病PRRSV代表毒株JXA1同源性较高。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 序列分析 进化

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miR-M7-5p靶向调控马立克病病毒原癌基因meq的表达 被引量：1

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作者 赵朴 滕蔓 +5 位作者 罗俊 迟佳琦 宿靖伟 党露 邓瑞广 张改平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1518-1525,共8页

马立克病病毒(MDV)基因组编码数十个miRNA,并且可能在MDV的感染及致病过程中发挥重要作用。此前研究发现,MDV-1编码的miR-M7-5p在病毒感染宿主发病的过程中具有高水平表达特征,为探讨miR-M7-5p对MDV可能具有的自我调控作用,利用生物信... 马立克病病毒(MDV)基因组编码数十个miRNA,并且可能在MDV的感染及致病过程中发挥重要作用。此前研究发现,MDV-1编码的miR-M7-5p在病毒感染宿主发病的过程中具有高水平表达特征,为探讨miR-M7-5p对MDV可能具有的自我调控作用,利用生物信息学方法对MDV编码的蛋白基因进行了扫描分析,预测发现了10个潜在的miR-M7-5p结合靶点,其中包括MDV的原癌基因meq。双荧光报告试验表明miR-M7-5p与meq基因的3′-UTR在体外能够相互作用,qRT-PCR进一步证实miR-M7-5p在体内能够下调meq基因mRNA的转录。结果表明,miR-M7-5p能够自我调控病毒原癌基因meq的表达,在MDV致瘤过程中可能发挥重要作用。 展开更多

关键词 马立克病病毒 MICRORNA 自我调控 原癌基因 MEQ

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猪瘟病毒Erns蛋白在毕赤酵母中的表达及鉴定 被引量：8

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作者 李艳蕊 李学伍 +2 位作者 王丽 刘磊 张改平 《湖南农业科学》 2010年第3期130-134,共5页

为制备猪瘟病毒(CSFV)特异性诊断抗原,根据国内CSFV流行毒株的序列合成了其主要的保护性抗原Erns蛋白的基因序列,将合成的基因按设计的酶切位点与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建了重组表达质粒pPIC9K-Erns。用SalⅠ将重组表达质粒线... 为制备猪瘟病毒(CSFV)特异性诊断抗原,根据国内CSFV流行毒株的序列合成了其主要的保护性抗原Erns蛋白的基因序列,将合成的基因按设计的酶切位点与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建了重组表达质粒pPIC9K-Erns。用SalⅠ将重组表达质粒线性化后,转化GS115酵母菌。经筛选、鉴定,成功获得了表达CSFV的Erns蛋白的阳性重组酵母菌。该阳性重组酵母菌经甲醇诱导,在培养液上清中可检测到目的蛋白。Western-blot结果显示,该蛋白能特异识别CSFV抗体,且具有很好的反应原性。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 Erns蛋白 毕赤酵母 甲醇诱导

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