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抗旱水稻种子转基因成分检测技术研究
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作者 邓汉超 刘玉琛 +4 位作者 邓国标 刘晋 陈惠芳 杨启鹏 周向阳 《中国种业》 2017年第5期45-47,共3页
利用组织研磨仪快速处理水稻种子样品,采用高通量的磁珠纯化系统提取样本DNA,提取的核酸通过紫外吸收检测其纯度,应用普通PCR检测方法和实时荧光PCR方法对水稻内源基因SPS、靶基因ATAF1进行检测。结果表明,普通PCR方法和实时荧光PCR方... 利用组织研磨仪快速处理水稻种子样品,采用高通量的磁珠纯化系统提取样本DNA,提取的核酸通过紫外吸收检测其纯度,应用普通PCR检测方法和实时荧光PCR方法对水稻内源基因SPS、靶基因ATAF1进行检测。结果表明,普通PCR方法和实时荧光PCR方法均表现快速、准确、特异性高的特点。 展开更多
关键词 普通PCR 实时荧光PCR 转基因
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重组抗原CP4-EPSPS的克隆、表达和纯化
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作者 邓汉超 刘玉琛 +2 位作者 邓国标 刘晋 周向阳 《粮油食品科技》 2017年第5期59-61,共3页
构建了一个含有CP4-EPSPS外源基因的细菌表达载体并在E.coli BL21(DE3)中的高效表达,通过SDS-PAGE检测发现,目的蛋白完全以可溶性方式存在于细胞破碎上清液中。收集该上清液并进而通过镍柱亲和层析,CP4-EPSPS重组蛋白纯度可达85%以上,利... 构建了一个含有CP4-EPSPS外源基因的细菌表达载体并在E.coli BL21(DE3)中的高效表达,通过SDS-PAGE检测发现,目的蛋白完全以可溶性方式存在于细胞破碎上清液中。收集该上清液并进而通过镍柱亲和层析,CP4-EPSPS重组蛋白纯度可达85%以上,利用Brandford法测定蛋白质浓度为0.9 mg/m L。该蛋白表达和纯化体系可为转基因植物、食品等蛋白检测用抗体提供稳定免疫性抗原,同时也可为蛋白标准物质研制提供稳定物质基础。 展开更多
关键词 CP4-EPSPS 表达 纯化
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转基因植物DNA成分检测技术研究进展 被引量:6
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作者 林馥芬 侯红利 +3 位作者 刘晋 王学林 邓汉超 周向阳 《中国种业》 2016年第11期19-22,共4页
综述了转基因植物的DNA成分定性、定量检测,基因芯片检测技术的原理和特点,初步探讨未知转基因核酸成分检测技术研究状况,最后指明转基因检测技术的发展依赖于现代分子生物学研究技术的发展,并朝着低成本、自动化、高灵敏度、高特异性... 综述了转基因植物的DNA成分定性、定量检测,基因芯片检测技术的原理和特点,初步探讨未知转基因核酸成分检测技术研究状况,最后指明转基因检测技术的发展依赖于现代分子生物学研究技术的发展,并朝着低成本、自动化、高灵敏度、高特异性、高通量的方向发展。 展开更多
关键词 转基因 PCR DNA
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转基因水稻标准质粒分子的构建与分析 被引量:2
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作者 刘晋 邓汉超 +5 位作者 王学林 侯红利 李永红 杨启鹏 陈惠芳 周向阳 《中国种业》 2016年第12期52-55,共4页
针对目前转基因(GM)产品检测标准分子的缺乏,构建适用于转基因水稻的标准质粒分子pMDSPS和pMDTheli,其中包含水稻内源基因腓通用序列,耐盐基因ThST3和Ubiquitin启动子序列的构建特异性Theli序列。对其特异性及制备标准曲线的可靠... 针对目前转基因(GM)产品检测标准分子的缺乏,构建适用于转基因水稻的标准质粒分子pMDSPS和pMDTheli,其中包含水稻内源基因腓通用序列,耐盐基因ThST3和Ubiquitin启动子序列的构建特异性Theli序列。对其特异性及制备标准曲线的可靠性进行鉴定研究,研究结果显示,在进行普通PCR扩增时,采用质粒标准分子为阳性对照,均能特异扩增目的条带。以标准质粒分子构建的标准曲线,sPs基因的定量标准曲线的相关系数平均为0.9993,PCR扩增效率在1.0004~1.034之间;ThST3基因的定量标准曲线的相关系数平均为0.9937,PCR扩增效率在0.9358~0.9486之间。因此,构建的标准分子pMDSPS和pMDTheli既能作为普通PCR的阳性对照,也能用于定量标准曲线的构建,为转基因水稻的定量检测提供简便、价格低廉的标准分子打下基础。 展开更多
关键词 标准质粒分子 实时荧光PCR 标准曲线 PCR效率
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正交优化水稻ISSR种质鉴定技术研究 被引量:1
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作者 邓汉超 王学林 +4 位作者 李筠 侯红利 管敏 刘倩琪 周向阳 《中国种业》 2012年第12期48-50,共3页
通过正交试验表L18(37)对水稻ISSR-PCR反应中5个因素(Mg2+、Taq酶、dNTP、引物和模板DNA)在3个水平上进行优化试验,利用软件SPSS16.0分析试验中各因素内水平显著性及因素间交互作用,筛选出各因子的最佳水平,建立水稻ISSR反应体系,并对水... 通过正交试验表L18(37)对水稻ISSR-PCR反应中5个因素(Mg2+、Taq酶、dNTP、引物和模板DNA)在3个水平上进行优化试验,利用软件SPSS16.0分析试验中各因素内水平显著性及因素间交互作用,筛选出各因子的最佳水平,建立水稻ISSR反应体系,并对水稻ISSR最佳反应体系的退火温度和循环次数进行梯度试验,发现ISSR引物855的最适退火温度为50℃,循环次数为40次。这一优化水稻ISSR-PCR反应体系,为进一步对水稻的种质资源鉴定、分子遗传图谱的构建等奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 正交设计 ISSR 水稻 PCR
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转基因植物DNA成分检测技术研究进展
6
作者 林馥芬 侯红利 +3 位作者 刘晋 王学林 邓汉超 周向阳 《中国种业》 2017年第A01期146-149,共4页
综述了转基因植物的DNA成分定性、定量检测,基因芯片检测技术的原理和特点,初步探讨未知转基因核酸成分检测技术研究状况,最后指明转基因检测技术的发展依赖于现代分子生物学研究技术的发展,并朝着低成本、自动化、高灵敏度、高特异性... 综述了转基因植物的DNA成分定性、定量检测,基因芯片检测技术的原理和特点,初步探讨未知转基因核酸成分检测技术研究状况,最后指明转基因检测技术的发展依赖于现代分子生物学研究技术的发展,并朝着低成本、自动化、高灵敏度、高特异性、高通量的方向发展. 展开更多
关键词 转基因 PCR DNA
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