猪繁殖与呼吸综合征病毒与结肠小袋纤毛虫混合感染的诊断 被引量：4

1

作者 胡冬梅 康立平 +5 位作者 李向东 张硕 李晓霞 胡燕 闫谨 遇秀玲 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第1期60-61,共2页

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 实验室诊断 混合感染 纤毛虫 结肠 急性死亡 临床症状 PRRSV

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禽流感诊断研究进展 被引量：12

2

作者 宋晓晖 王中力 陈西钊 《中国动物检疫》 CAS 2003年第11期45-47,共3页

禽流感(Avian Influenza AI),是由A型流感病毒引起的一种禽类传染病,是目前危害养禽业最严重的疫病之一.特别是1997年香港发生禽流感病毒感染人的事件,更突出显示了其公共卫生意义[1,2].

关键词 禽流感 诊断 发病特点 检测方法 免疫抗体

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雏鹅曲霉菌性肺炎的诊断 被引量：1

3

作者 胡燕 胡冬梅 +1 位作者 康立平 遇秀玲 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2006年第3期49-50,共2页

关键词 曲霉菌性肺炎 病理学诊断 雏鹅 疑似病例 呼吸困难 病理变化 商品鹅 肠黏膜 结节 病鹅

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对兽医实验室生物安全建设的思考——法国、瑞典高等级生物安全实验室及设备生产企业考察情况报告 被引量：12

4

作者 陈国胜 田克恭 《中国牧业通讯》 2004年第7期38-40,共3页

随着我国兽医事业的迅猛发展和生物技术的广泛应用 ,尤其是2003年春季突发的SARS疾病和2004年初全国暴发的高致病性禽流感疫情后 ,各地按农业部第302号公告《兽医实验室生物安全管理规范》规定 ,申请建立BSL -3实验室的报告数量急增 ,... 随着我国兽医事业的迅猛发展和生物技术的广泛应用 ,尤其是2003年春季突发的SARS疾病和2004年初全国暴发的高致病性禽流感疫情后 ,各地按农业部第302号公告《兽医实验室生物安全管理规范》规定 ,申请建立BSL -3实验室的报告数量急增 ,而生物安全实验室的建设和维持运转需要庞大的经费支持 ,如何集中有限资金 ,加强生物安全实验室建设 ,提升突发动物疫病和重大动物卫生事件应急反应能力 ,成为我们当前工作的重大课题。为此 ,2003年9月7～19日 ,由农业部等单位组成的实验室专家考察团 ,前往法国、瑞典考察高等级生物安全实验室及有关设施设备生产企业 ,考察发现 ,国外在生物安全实验室建设及其管理方面的许多成功经验 ,对我国兽医实验室的建设具有十分重要的借鉴意义。现将此次考察情况刊发 ,希望各地能结合实际应用于实践。 展开更多

关键词 兽医实验室 生物安全 法国 瑞典 监督管理 法制建设 因地制宜 实验室设备生产 生产企业

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诊断一起猪弓形虫和附红细胞体混合感染流行报告

5

作者 康立平 胡冬梅 +5 位作者 李向东 张硕 杨欣艳 李晓霞 胡燕 遇秀玲 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1052-1054,共3页

目的对某猪场发病猪群进行诊断。方法通过临床调查、大体剖检、病理组织学观察、血清学和PCR等方法确诊。结果在血涂片中可见附红细胞体和弓形虫滋养体;在肺、肝组织切片中可见大量弓形虫假包囊;应用PCR方法检测弓形虫保守基因,结果为... 目的对某猪场发病猪群进行诊断。方法通过临床调查、大体剖检、病理组织学观察、血清学和PCR等方法确诊。结果在血涂片中可见附红细胞体和弓形虫滋养体;在肺、肝组织切片中可见大量弓形虫假包囊;应用PCR方法检测弓形虫保守基因,结果为阳性。结论证实该猪场此次发病为猪弓形虫和附红细胞体混合感染。 展开更多

关键词 弓形虫病 附红细胞体病 诊断

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H5亚型禽流感病毒单抗——生物素捕获ELISA的建立 被引量：16

6

作者 王传彬 田新生 +5 位作者 曹振 遇秀玲 孙明 陈西钊 王宏伟 田克恭 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2004年第4期204-207,共4页

目的建立一种单克隆抗体介导的、经生物素—亲和素系统放大的H5亚型禽流感病毒捕获ELISA检测方法,为进一步研究检测试剂盒提供基础。方法用亲和层析法纯化抗禽流感病毒H5亚型血凝素单克隆抗体,包被微量反应板,用于捕获病毒抗原,再用生... 目的建立一种单克隆抗体介导的、经生物素—亲和素系统放大的H5亚型禽流感病毒捕获ELISA检测方法,为进一步研究检测试剂盒提供基础。方法用亲和层析法纯化抗禽流感病毒H5亚型血凝素单克隆抗体,包被微量反应板,用于捕获病毒抗原,再用生物素标记的单抗和酶标亲和素来检测病毒血凝素抗原,经方阵试验优化ELISA反应体系。用该方法检测H1—H15亚型AIV标准毒株和H5、H7、H9亚型AIV分离株,并与血凝和血凝抑制试验比较,评价其敏感性和特异性。结果纯化后的单抗具有良好的反应活性,生物素标记单抗工作浓度为1∶5000;ELISA对H5亚型AIV的检出限为025个血凝单位。该ELISA反应体系能检出H5N3标准株和所有20株国内H5亚型AIV分离株,而与其他14个血凝素亚型的AIV标准株、15个H9亚型AIV分离株和2个H7亚型AIV分离株均无交叉反应。结论初步建立了检测H5亚型禽流感病毒的单抗—生物素捕获ELISA方法,为研制试剂盒和进一步应用试验提供了基础。 展开更多

关键词 单抗 ELISA 亲和素 H5亚型禽流感病毒 血凝素 单克隆抗体 AIV H9亚型 分离株 生物素标记

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犬乳腺肿物临床病案分析 被引量：16

7

作者 姚华 林德贵 +2 位作者 田克恭 遇秀玲 胡冬梅 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2006年第7期50-51,共2页

关键词 兽医临床 乳腺肿瘤 母犬 病案 肿瘤疾病 健康状况 病理诊断 治疗措施 诊断分类 生活质量

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中国不同地区商品猪中戊型肝炎病毒感染情况调查 被引量：66

8

作者 葛胜祥 田克恭 +5 位作者 多海刚 李纯玲 陈凡 王传彬 彭耿 夏宁邵 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第2期108-109,共2页

关键词 中国 商品猪 戊型肝炎病毒感染 调查 流行病学

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H9N2禽流感病毒分离株NS基因同源性分析 被引量：10

9

作者 王传彬 孙明 +3 位作者 赵铁柱 田克恭 王宏伟 汪明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期177-180,共4页

经RT＿PCR扩增了三株国内H9N2亚型禽流感病毒(ATV)分离株的非结构(NS)蛋白基因,并把扩增的基因片段克隆到pGEM＿T载体中测序,获得了NS1和NS2蛋白的完整编码序列。经与GenBank中发表的核苷酸序列比较表明,这三株病毒的NS基因之间的同源性... 经RT＿PCR扩增了三株国内H9N2亚型禽流感病毒(ATV)分离株的非结构(NS)蛋白基因,并把扩增的基因片段克隆到pGEM＿T载体中测序,获得了NS1和NS2蛋白的完整编码序列。经与GenBank中发表的核苷酸序列比较表明,这三株病毒的NS基因之间的同源性为96%～98%;与1994年以来香港、韩国H9N2亚型分离株NS基因的同源性均在90%以上;其NS1蛋白的C＿末端都缺失13个氨基酸,不同于香港分离株;在AIVNS基因系统发育进化树中,三者都处于等位基因A类的亚洲禽—猪群分枝。 展开更多

关键词 禽流感病毒 NS基因 同源性分析

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禽流感病毒A型和H5亚型RT-PCR检测试剂盒研究 被引量：5

10

作者 孙明 李纯铃 +4 位作者 赵铁柱 王传彬 陈西钊 田克恭 王宏伟 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第1期3-6,共4页

目的　检测和鉴定A型、H5亚型禽流感病毒 (AIV) ,研发一种高效实用的检测手段。方法　根据Ming ShiuhLee报道的文献设计、合成引物 ,采用反转录和PCR一步法对A型、H5亚型禽流感病毒cDNA进行扩增和电泳鉴定 ,组装成禽流感病毒RT PCR试剂... 目的　检测和鉴定A型、H5亚型禽流感病毒 (AIV) ,研发一种高效实用的检测手段。方法　根据Ming ShiuhLee报道的文献设计、合成引物 ,采用反转录和PCR一步法对A型、H5亚型禽流感病毒cDNA进行扩增和电泳鉴定 ,组装成禽流感病毒RT PCR试剂盒 ,对H1～ 15亚型AIV参考株、38份AIV国内分离株进行检测试验。结果　建立了A型、H5亚型禽流感病毒RT PCR检测方法 ,并在此基础上组装试剂盒 ,用A型试剂盒检测时 ,全部AIV毒株均为阳性 ,能检测 1 10 2 4血凝单位禽流感病毒 ;用H5亚型试剂盒检测时 ,仅有H5亚型AIV参考株和 19株H5亚型AIV分离株呈阳性 ,其余H1～H4、H6～H15参考株和H7、H9分离株以及 1株H5分株均为阴性 ,能检测1 6 4血凝单位禽流感病毒。 2种试剂盒对实验感染鸡病料检出率均为 10 0 %。结论　研制的AIVA型、H5亚型RT PCR试剂盒具有特异性强、敏感性高、稳定性和重复性好的特点。 展开更多

关键词 禽流感病毒 A型 H5亚型 RT—PCR检测 试剂盒 禽流感

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抗氯霉素单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：8

11

作者 魏书林 曹振 +2 位作者 沈建忠 史为民 王冰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第8期62-64,共3页

本文用人工合成的氯霉素 -牛血清白蛋白 (CAP- BSA)免疫 BAL B/ C小鼠 ,通过杂交瘤技术建立了 2株分泌抗氯霉素的单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 1D1 0 和 5 E6 。经间接酶联免疫吸附试验 (ci EL ISA)检测细胞培养上清效价为 1∶ 5 12 ... 本文用人工合成的氯霉素 -牛血清白蛋白 (CAP- BSA)免疫 BAL B/ C小鼠 ,通过杂交瘤技术建立了 2株分泌抗氯霉素的单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 1D1 0 和 5 E6 。经间接酶联免疫吸附试验 (ci EL ISA)检测细胞培养上清效价为 1∶ 5 12 ,诱生腹水的效价可达 1× 10 8。两株单克隆抗体的亚型为 Ig G1 ,杂交瘤染色体数目为 84～ 96条。该细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定。ci EL ISA检测显示其与常见抗生素及结构类似物的交叉反应小 ,其灵敏度为 0 .1ng/ ml,IC50 为 2 .38ng/ m l。 展开更多

关键词 抗氯霉素单克隆抗体 制备 鉴定 氯霉素 药物残留 检测ELISA试剂盒

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猴B病毒抗体ELISA检测方法的建立和应用研究 被引量：9

12

作者 贺争鸣 卫礼 +3 位作者 巩薇 田克恭 贾锐胜 邢瑞昌 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2003年第3期161-164,共4页

目的　建立猴B病毒抗体ELISA检测方法。方法　采用方阵滴定法 ,比较不同血清稀释度、3种酶结合物、2种抗原对检测结果的影响 ,与国外同类参比实验室进行检测结果的比较 ,确定ELISA法的最佳实验条件。结果　HSV抗原包被浓度 10 μg ml,抗... 目的　建立猴B病毒抗体ELISA检测方法。方法　采用方阵滴定法 ,比较不同血清稀释度、3种酶结合物、2种抗原对检测结果的影响 ,与国外同类参比实验室进行检测结果的比较 ,确定ELISA法的最佳实验条件。结果　HSV抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为 1∶2 0 0 0时 ;或B病毒抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为1∶4 0 0 0时 ,阴性血清和阳性血清的A值差距最大。与国外B病毒检测专业实验室的检测结果符合率分别为98 0 2 %和 97 5 2 %。结论　建立了猴B病毒抗体的ELISA检测方法 ,提高了检测方法的准确性。 展开更多

关键词 猴B病毒 抗体 ELISA 疱疹病毒I型 酶联免疫吸附测定

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玉米赤霉醇单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：7

13

作者 王鹤佳 曹振 +1 位作者 沈建忠 史为民 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第10期3-5,共3页

将玉米赤霉醇 (α- zearalanol,ZER)琥珀酰化得到 ZER- 7-半琥珀酸酯 ,再利用混合酸酐法与牛血清白蛋白 (BSA)偶联得到免疫原 ,以此免疫原免疫 BAL B/c小鼠 ,利用杂交瘤技术得到两株稳定分泌 ZER单克隆抗体的杂交瘤细胞株 1C1 2 和 9B4 ... 将玉米赤霉醇 (α- zearalanol,ZER)琥珀酰化得到 ZER- 7-半琥珀酸酯 ,再利用混合酸酐法与牛血清白蛋白 (BSA)偶联得到免疫原 ,以此免疫原免疫 BAL B/c小鼠 ,利用杂交瘤技术得到两株稳定分泌 ZER单克隆抗体的杂交瘤细胞株 1C1 2 和 9B4 ,经鉴定两株单抗亚型均为 Ig G1 ,间接 EL ISA测定腹水效价为 1∶ 3.2× 10 5。该抗体与同系物β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮的交叉反应率分别为 36 .2 5 % ,5 2 .73% ,0 .6 7% ,74 .36 % ,5 3.70 % ;与己烯雌酚、雌二醇、睾酮、克伦特罗的交叉反应率均小于 0 .1%。 展开更多

关键词 玉米赤霉醇 单克隆抗体 制备 鉴定 杂交瘤技术 残留检测方法

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禽流感病毒H5N1亚型NS1基因在大肠杆菌中的表达 被引量：3

14

作者 孙明 赵铁柱 +5 位作者 王传彬 李纯玲 丁银巧 王宏伟 陈西钊 田克恭 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2004年第4期208-211,共4页

目的表达H5N1亚型禽流感病毒(AIV)NS1蛋白,用于AIV感染与注射灭活疫苗鸡的鉴别诊断和NS1蛋白功能研究。方法采用RT_PCR方法对H5N1亚型AIVNS1基因进行扩增,将PCR产物克隆于pGEM_T_easy载体,将该基因插入pGEX_4T_1中构建NS1基因原核表达载... 目的表达H5N1亚型禽流感病毒(AIV)NS1蛋白,用于AIV感染与注射灭活疫苗鸡的鉴别诊断和NS1蛋白功能研究。方法采用RT_PCR方法对H5N1亚型AIVNS1基因进行扩增,将PCR产物克隆于pGEM_T_easy载体,将该基因插入pGEX_4T_1中构建NS1基因原核表达载体,转化BL21大肠杆菌后,在IPTG诱导下表达NS1蛋白,Westernblot鉴定表达NS1蛋白。结果成功克隆H5N1亚型AIV的NS1基因,其核苷酸序列长度为690bp,编码230个氨基酸残基。构建NS1基因原核表达载体在大肠杆菌内表达出约51×103的NS1融合蛋白。Westernblot鉴定表明表达NS1蛋白与H7N2AIV感染鸡血清有反应性。结论在大肠杆菌中成功表达了H5N1亚型AIVNS1基因蛋白,具有与感染H7N2亚型AIV阳性血清反应原性。 展开更多

关键词 原核表达载体 蛋白功能 NS1基因 感染 大肠杆菌 AIV 反应原性 H5N1亚型 禽流感病毒 阳性血清

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猪瘟病毒E2基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达 被引量：7

15

作者 张文杰 李向东 +6 位作者 赵铁柱 邓小雨 胡冬梅 孙明 遇秀玲 陈西钊 田克恭 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第1期30-34,I0004,共6页

目的利用昆虫细胞/杆状病毒系统表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,用于E2蛋白功能、开发CSF新型疫苗以及建立相关血清学诊断方法等研究。方法采用RT-PCR扩增CSFV E2基因,将PCR产物克隆到pGEM-T-Easy载体,将该基因插入到pFast-BacHT A载体中,构... 目的利用昆虫细胞/杆状病毒系统表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,用于E2蛋白功能、开发CSF新型疫苗以及建立相关血清学诊断方法等研究。方法采用RT-PCR扩增CSFV E2基因,将PCR产物克隆到pGEM-T-Easy载体,将该基因插入到pFast-BacHT A载体中,构建重组转座载体后转化DH10Bac感受态细胞,获得重组Bacmid质粒后转染sf9昆虫细胞,传毒3代,对表达蛋白进行Western-blot及免疫组化鉴定。结果成功克隆CSFVE2基因,其核苷酸序列为1119 bp。SDS-PAGE电泳结果显示表达E2蛋白相对分子质量约为43×103,Western-blot和免疫组化结果证实表达蛋白能够被CSFV标准阳性血清识别。结论在Bac-to-Bac杆状病毒系统中的成功表达了CSFV E2蛋白,与CSFV标准阳性血清具有较好的反应性。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2基因 杆状病毒 表达

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禽流感病毒血凝素基因在大肠杆菌中的表达 被引量：4

16

作者 宋晓晖 王中立 +2 位作者 孙明 田克恭 陈西钊 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期173-176,共4页

采用RT＿PCR技术扩增禽流感病毒HA1基因,将HA1结构基因克隆于pGEX＿T载体上,测序结果表明插入的片段为HA1目的基因。切下目的基因HA1,重组到含有谷胱甘肽(GST)的融合蛋白原核表达载体PGEX＿4T＿2,获得的重组质粒经PCR、酶切以及序列分... 采用RT＿PCR技术扩增禽流感病毒HA1基因,将HA1结构基因克隆于pGEX＿T载体上,测序结果表明插入的片段为HA1目的基因。切下目的基因HA1,重组到含有谷胱甘肽(GST)的融合蛋白原核表达载体PGEX＿4T＿2,获得的重组质粒经PCR、酶切以及序列分析鉴定,表明HA1基因插入的位置、大小和读码框架均正确。证明成功构建了融合表达载体pGEX＿HA1。构建好的重组质粒,经1mmol/LIPTG诱导,在大肠杆菌BL21中得到了大量表达,经过4h表达量既达到高峰。融合蛋白GST＿HA1的分子量为62KD,以包涵体形式存在。Western＿Blot分析表明,融合蛋白能够与H5亚型AIV阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。 展开更多

关键词 禽流感病毒 血凝素 表达 pGEX-4T-2

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禽流感病毒分离株NS基因同源性及等位基因类型分析 被引量：3

17

作者 王传彬 孙明 +4 位作者 赵铁柱 遇秀玲 陈西钊 王宏伟 田克恭 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第1期11-15,共5页

目的　克隆测定国内具有代表性的禽流感病毒 (AIV)的非结构 (NS)蛋白基因核苷酸序列 ,分析其同源性和等位基因类型 ,为进一步探索禽流感NS蛋白抗体监测方法奠定基础。方法　经RT PCR扩增了国内 3株H9N2、2株H5N1、2株H7N2亚型AIV分离株... 目的　克隆测定国内具有代表性的禽流感病毒 (AIV)的非结构 (NS)蛋白基因核苷酸序列 ,分析其同源性和等位基因类型 ,为进一步探索禽流感NS蛋白抗体监测方法奠定基础。方法　经RT PCR扩增了国内 3株H9N2、2株H5N1、2株H7N2亚型AIV分离株的NS蛋白基因 ,并把扩增的基因片段克隆到pGEM T载体中测序 ,将测序结果与GenBank中的核苷酸序列进行同源性比较 ,绘制基因进化树。结果　经测序获得了各AIV分离株NS基因的完整编码序列。同源性分析表明 ,3株H9亚型AIV的NS基因之间的同源性为 96 %～ 98% ;两株H5亚型AIVNS基因同源性为 91 6 % ;两株H7亚型AIV的NS基因同源性为 98 9%。H5和H9亚型分离株的NS基因之间的同源性均高于 90 % ;而H7N2亚型分离株与其它两种亚型分离株的NS基因同源性约为 6 0 %～ 70 %。在AIVNS基因系统发育进化树中 ,H5、H9亚型分离株都处于等位基因A群内 ;3株H9亚型分离株的进化关系较近 ,与香港、广东的部分H5N1病毒株起源相同 ,而 2株H5病毒的NS基因则处于不同分枝内 ;2株H7亚型分离株的NS基因都处于等位基因B群内 ,进化关系较近。结论　这 7株国内AIV分离株的NS基因之间的同源性差异较大 ,约为 6 0 %～ 99% ,且包括A。 展开更多

关键词 禽流感病毒 NS基因 序列同源性 等位基因 禽流感

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口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因在毕赤酵母中的表达 被引量：2

18

作者 丁银巧 张剑锐 +3 位作者 张云霞 曹振 孙明 田克恭 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1100-1103,1134,共5页

目的利用毕赤酵母系统表达口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB,用于FMDV感染与疫苗免疫动物的鉴别诊断和3AB蛋白功能研究。方法采用PCR方法从pGEM-T-Easy-3ABC质粒中扩增3AB基因,将其插入pPICZαA酵母表达载体中,构建的重组表达质粒线性化... 目的利用毕赤酵母系统表达口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB,用于FMDV感染与疫苗免疫动物的鉴别诊断和3AB蛋白功能研究。方法采用PCR方法从pGEM-T-Easy-3ABC质粒中扩增3AB基因,将其插入pPICZαA酵母表达载体中,构建的重组表达质粒线性化后电转入毕赤酵母GS115中,在0.5%甲醇诱导下表达3AB蛋白,运用SDS-PAGE和ELISA方法鉴定表达蛋白。结果成功构建了pPICZαA-3AB重组酵母表达质粒,并转化入毕赤酵母GS115中,SDS-PAGE和ELISA鉴定结果表明,重组酵母菌株表达出约19kD的3AB蛋白,与针对FMDV的3AB蛋白单克隆抗体有特异性反应。结论在毕赤酵母中成功表达了FMDV3AB蛋白,与抗FMDV3AB蛋白单克隆抗体具有反应性。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 毕赤酵母 真核表达

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禽流感病毒H7N2血凝素HA1基因在大肠杆菌中的表达 被引量：3

19

作者 多海刚 赵铁柱 +5 位作者 孙明 王传彬 王宏伟 陈西钊 冉多良 田克恭 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第1期7-10,共4页

目的　表达H7N2亚型禽流感病毒 (AIV)HA1基因 ,用于感染H7亚型禽流感病毒抗体的检测和HA1蛋白功能研究。方法　采用RT PCR方法对H7N2亚型AIVHA1基因进行扩增 ,将PCR产物克隆于pGEM T Easy载体 ,将该基因插入pGEX 4T 2中构建HA1基因原核... 目的　表达H7N2亚型禽流感病毒 (AIV)HA1基因 ,用于感染H7亚型禽流感病毒抗体的检测和HA1蛋白功能研究。方法　采用RT PCR方法对H7N2亚型AIVHA1基因进行扩增 ,将PCR产物克隆于pGEM T Easy载体 ,将该基因插入pGEX 4T 2中构建HA1基因原核表达载体 ,转化BL2 1大肠杆菌后 ,在IPTG诱导下表达HA1蛋白 ,Westernblot鉴定表达HA1蛋白。电洗脱方法纯化表达HA1蛋白 ,建立间接ELISA方法 ,对感染AIVH7、H9、H5亚型AIV阳性血清进行检测。结果　成功克隆H7N2亚型AIV的HA1基因 ,其核苷酸序列长度 96 6bp ,编码 32 2个氨基酸残基。构建HA1基因原核表达载体在大肠杆菌内表达出约 6 1× 10 3的HA1融合蛋白。Westernblot和ELISA方法鉴定表明 :表达HA1蛋白与感染H7亚型AIV鸡血清有反应 ,与H5、H9亚型AIV阳性血清没有反应。结论　本研究在大肠杆菌中成功表达了H7N2亚型AIVHA1基因蛋白 ,具有与感染H7亚型AIV阳性血清反应原性 ,不与H5和H9亚型AIV感染阳性血清发生反应。 展开更多

关键词 H7N2亚型禽流感病毒 血凝素HA1基因 大肠杆菌 基因表达 抗体检测

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抗H5N1亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：2

20

作者 曹振 秦亚曼 +4 位作者 王传彬 王宏伟 陈西钊 苏敬良 田克恭 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2004年第4期197-199,共3页

目的建立稳定分泌抗H5N1亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞系,为进一步研究禽流感诊断技术奠定基础。方法以纯化的H5亚型禽流感病毒按常规方法免疫BALBc小鼠,最后一次免疫后第3天取其脾细胞与SP20细胞在聚乙二醇作用下融合,... 目的建立稳定分泌抗H5N1亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞系,为进一步研究禽流感诊断技术奠定基础。方法以纯化的H5亚型禽流感病毒按常规方法免疫BALBc小鼠,最后一次免疫后第3天取其脾细胞与SP20细胞在聚乙二醇作用下融合,用选择性培养、有限稀释法克隆和血凝抑制试验进行筛选,对获得阳性克隆株用ELISA方法进行亚型鉴定,并用37株H5、H7、H9亚型AIV测定其特异性、覆盖性。结果最后获得了3株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞,命名为1E5、4A4、4B1,经长期体外培养和冻存后复苏能稳定地分泌抗体。经鉴定,其亚型均为IgG1、kappa链。腹水HI效价1∶210～1∶216,细胞培养上清HI效价1∶26～1∶28。3株杂交瘤所分泌的单克隆抗体均能与本中心保存的全部20株H5亚型禽流感病毒分离株发生反应,而与15株H9亚型禽流感病毒分离株、2株H7亚型禽流感病毒分离株以及H1H4、H6H15亚型禽流感病毒标准毒株均不反应,与鸡新城疫病毒、鹅新城疫病毒、鹅腺病毒和鸡产蛋下降综合征病毒等均无交叉反应。结论所获3株单克隆抗体可用于禽流感病毒特异性诊断试剂的研制。 展开更多

关键词 H5N1亚型 单克隆抗体 分泌 血凝素 鉴定 免疫后 有限稀释法 H5亚型禽流感病毒 HI效价 分离株

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