西加毒素小鼠生物学检测法的建立 被引量：3

1

作者 朱海 郑露 +5 位作者 王爱辉 范放 郭爱珍 李金峰 杨晓夏 赵芳 《动物医学进展》 CSCD 2007年第10期17-22,共6页

旨在建立西加毒素小鼠生物学检测法。采用19 g^21 g的昆明系雄性小鼠,将一系列不同浓度的西加毒素(P-CTX-1)标准溶液通过腹腔注入小鼠体内,观察其中毒症状,确定1个鼠单位(mu)所代表的毒素剂量,并且建立剂量-中间死亡时间曲线。结果表明... 旨在建立西加毒素小鼠生物学检测法。采用19 g^21 g的昆明系雄性小鼠,将一系列不同浓度的西加毒素(P-CTX-1)标准溶液通过腹腔注入小鼠体内,观察其中毒症状,确定1个鼠单位(mu)所代表的毒素剂量,并且建立剂量-中间死亡时间曲线。结果表明对我国昆明系雄性小鼠腹腔注射西加毒素,1个鼠单位所对应的P-CTX-1剂量值约为9.10 ng,其95%可信限为8.67 ng^9.56 ng;剂量-中间死亡时间曲线方程为y=244.9x-1.3937;其中y代表致死时间,x表剂量;将死亡时间t变为时间倒数1/t,对CTX的毒性mu取对数即logmu,得直线回归方程y=1.2076 x-0.047,R2=0.9921,其中y代表西加毒素毒性的对数(logmu),x代表小鼠死亡时间倒数(1/t),R为相关系数。同时利用该方法在0.1、0.2、0.3 ppb 3个浓度水平进行验证试验,结果表明,方法的总体平均回收率为46.58%~50.23%,相对标准偏差范围为1.17%~2.28%。 展开更多

关键词 西加毒素 P-CTX-1 小鼠生物法 鼠单位(mu) LD50

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用益生菌制剂代替断奶仔猪日粮中抗生素的研究 被引量：32

2

作者 肖宏德 肖运才 +4 位作者 何熙贞 徐伟 王喜亮 毕丁仁 石德时 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第3期53-58,共6页

为研究自行研发的益生菌制剂代替断奶仔猪日粮中抗生素的可行性，本研究将分离鉴定的具有良好安全性能和体外益生特性的屎肠球菌 HDRsEF1菌株和枯草芽胞杆菌 HDRsBS1菌株进行复合，制成益生菌制剂，部分替代或全部替代仔猪教槽料和保育... 为研究自行研发的益生菌制剂代替断奶仔猪日粮中抗生素的可行性，本研究将分离鉴定的具有良好安全性能和体外益生特性的屎肠球菌 HDRsEF1菌株和枯草芽胞杆菌 HDRsBS1菌株进行复合，制成益生菌制剂，部分替代或全部替代仔猪教槽料和保育料中的抗生素，分3组饲喂28日龄～62日龄仔猪，连续观察和比较3组仔猪的促生长性能、腹泻率、免疫学指标、各项生化指标。结果显示，在促生长性能上，益生菌组稍低于抗生素组，但差异不显著；而益生菌组仔猪的腹泻率与抗生素组比较有所降低；血液中的 IgG、IgA、IgM含量和特异性抗体效价（猪瘟、口蹄疫）与抗生素组比较显著上升；特别是气管冲洗液、十二指肠、空肠内容物中的分泌型IgA含量显著高于抗生素组。说明在仔猪日粮中使用益生菌制剂，可以促进仔猪的生长发育，提高仔猪非特异性和特异性抗病能力；本研究所用的益生菌制剂可以替代仔猪日粮中的抗生素，达到抗病促生长的目的。 展开更多

关键词 益生菌 屎肠球菌 枯草芽胞杆菌 抗生素替代技术 断奶仔猪

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猪流行性腹泻病毒变异株(CH/YNKM-8/2013)的分离鉴定和全基因组序列分析 被引量：7

3

作者 吴美洲 陈芳洲 +3 位作者 李中华 万胜锋 叶十一 何启盖 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期93-99,共7页

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株特性,通过细胞培养、细胞病变(CPE)观察、RT-PCR、间接免疫荧光实验和透射电镜观察分离鉴定1株PEDV变异株(CH/YNKM-8/2013株)并分析了全基因组序列。运用基因组分段扩增方法,测得该毒株的全基因组序... 为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株特性,通过细胞培养、细胞病变(CPE)观察、RT-PCR、间接免疫荧光实验和透射电镜观察分离鉴定1株PEDV变异株(CH/YNKM-8/2013株)并分析了全基因组序列。运用基因组分段扩增方法,测得该毒株的全基因组序列(GenBank登录号为KF761675.1)。该毒株S基因N端比CV777毒株S基因的N端长9bp,包括15bp的插入和6bp的缺失,表明CH/YNKM-8/2013为变异毒株。同源性分析显示,该毒株的基因组序列与我国广东2011年分离毒株LC的同源关系最近,相似性为99.6%,与韩国毒株KNU-1305和美国毒株USA/Minnesota84/2013的序列相似性均为99.0%,而与CV777疫苗毒株的相似性较低,为96.7%。序列进化树分析表明该毒株和我国新近毒株、韩国及美国的变异毒株进化关系较近,而与我国之前流行的PEDV毒株以及疫苗毒株CV777处于不同分支。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 变异毒株 分离 鉴定 全基因组序列分析

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西加毒素细胞毒性检测方法的建立 被引量：4

4

作者 郑露 朱海 +7 位作者 郭爱珍 范放 李金峰 赵芳 杨小夏 洪小柳 马淑棉 司徒翠华 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期502-506,共5页

小鼠神经母细胞瘤细胞经体外培养后,加入不同剂量的太平洋西加毒素(Pacific ciguatoxin-1,P-CTX-1)、箭毒苷和藜芦定,在不同时间点终止培养,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)标定活细胞量,分析西加毒素剂量与细胞活性之间的线性关系。结果发现,细... 小鼠神经母细胞瘤细胞经体外培养后,加入不同剂量的太平洋西加毒素(Pacific ciguatoxin-1,P-CTX-1)、箭毒苷和藜芦定,在不同时间点终止培养,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)标定活细胞量,分析西加毒素剂量与细胞活性之间的线性关系。结果发现,细胞与毒素作用不同时间,西加毒素剂量(x)与光密度值(y)之间的线性关系呈现差异。在10 h、15 h及20 h等不同时间,其线性方程分别为y=-0.082 6x+0.923 0(R2=0.978 9)、y=-0.044 3x+0.601 5(R2=0.962 1)、y=-0.020 4x+0.323 7(R2=0.928 1)。以10 h的检测效率最高及检测结果最准确,因此将其定为最佳检测时间。细胞病变观察也证实了以上结果。 展开更多

关键词 西加毒素(P-CTX-1) 细胞毒性试验 四甲基偶氮唑蓝(MTT)

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宠物结核病的危害及其防治 被引量：1

5

作者 姜勇 郭爱珍 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第11期163-166,共4页

随着生活水平的提高,宠物的数量和种类增长迅速。结核病是目前病死人数最多的人兽共患病,犬、猫和鸟类都能感染发病,对人类,尤其是免疫抑制人群威胁很大。监测和防治宠物结核病对人类结核根除计划具有重要意义。

关键词 宠物 猫 犬 结核病 非结核分枝杆菌 防治

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益生枯草芽胞杆菌HDRaBS1缓解蛋鸡热应激效果 被引量：8

6

作者 张盼望 晏涛 +3 位作者 王喜亮 况世昌 周祖涛 肖运才 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期77-82,共6页

选取868只280日龄产蛋率相近海兰褐蛋鸡,随机分为高温组(33℃)、益生菌组(枯草芽胞杆菌+33℃)、室温组(26℃),试验期为20 d,研究益生枯草芽胞杆菌HDRa BS1缓解动物热应激的可行性及其机制。结果发现,与高温组相比,益生菌组在全期产蛋率... 选取868只280日龄产蛋率相近海兰褐蛋鸡,随机分为高温组(33℃)、益生菌组(枯草芽胞杆菌+33℃)、室温组(26℃),试验期为20 d,研究益生枯草芽胞杆菌HDRa BS1缓解动物热应激的可行性及其机制。结果发现,与高温组相比,益生菌组在全期产蛋率、平均日采食量、平均蛋质量方面分别提高了2.60%(P<0.05)、2.91%(P>0.05)和0.96%(P>0.05),但没有达到室温组水平,且在腹泻率、蛋破损率方面均有降低;血清内毒素、IL-1水平分别降低了37.41%(P>0.05)和20.98%(P<0.05),IL-10含量提高了41.05%(P>0.05);益生菌显著上调盲肠紧密连接基因occludin、ZO-1和JAM-A mRNA的表达(P<0.05),上调肠黏膜修复基因EGF mRNA的表达(P<0.05),显著提高肠绒毛高度,而隐窝深度之间无显著差异(P>0.05)。因此,添加枯草芽胞杆菌HDRa BS1能有效缓解蛋鸡热应激症状。 展开更多

关键词 枯草芽胞杆菌 热应激 蛋鸡 内毒素 盲肠 生长性能 白细胞介素

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狂犬病新型基因工程疫苗研究进展 被引量：9

7

作者 柴本杰 黄菲 +4 位作者 裴捷 周明 田大勇 傅振芳 赵凌 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期75-84,共10页

狂犬病是由狂犬病病毒感染中枢神经系统引起的一种古老的人兽共患传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%,至今仍无有效的治疗方法。当前,接种疫苗是预防狂犬病最为有效的途径。因此,狂犬病疫苗研发一直是狂犬病研究领... 狂犬病是由狂犬病病毒感染中枢神经系统引起的一种古老的人兽共患传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%,至今仍无有效的治疗方法。当前,接种疫苗是预防狂犬病最为有效的途径。因此,狂犬病疫苗研发一直是狂犬病研究领域的热点之一,进而不断涌现出新型疫苗。本文对近期狂犬病新型灭活疫苗、弱毒疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、口服疫苗等基因工程疫苗研究进展进行系统梳理,以期把握狂犬病疫苗研究现状,为研发更为有效的狂犬病新型疫苗提供新思路。 展开更多

关键词 狂犬病 狂犬病病毒 灭活疫苗 弱毒疫苗 核酸疫苗 亚单位疫苗 病毒样颗粒疫苗 口服疫苗 基因工程

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枯草芽胞杆菌TL对断奶仔猪生长发育、肠道环境及健康状况的影响 被引量：8

8

作者 刘志昌 王喜亮 +3 位作者 毕丁仁 肖运才 周祖涛 李筱雯 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期75-81,共7页

选取120头杜×长×白三元杂交断奶仔猪,随机分成负对照组(基础日粮)、正对照组(基础日粮+2.5g/kg抗生素)、M1组(正对照组+150g/t抗生素)、M2组(正对照组+300g/t抗生素),试验期30d,研究枯草芽胞杆菌TL对断奶仔猪生长发育、肠道... 选取120头杜×长×白三元杂交断奶仔猪,随机分成负对照组(基础日粮)、正对照组(基础日粮+2.5g/kg抗生素)、M1组(正对照组+150g/t抗生素)、M2组(正对照组+300g/t抗生素),试验期30d,研究枯草芽胞杆菌TL对断奶仔猪生长发育、肠道环境及健康状况的影响。结果发现:生长性能方面,与正对照组相比,M1组在体质量(断奶后30d)、平均日增重、平均日采食量方面分别提高7.81%(P<0.05)、17.14%(P<0.01)和33.10%(P<0.01),且M1组和M2组可以极显著降低断奶仔猪的腹泻率。血液指标方面,与正对照组相比,M1组血清GSH-Px、T-SOD分别提高9.0%(P<0.05)和32.78%(P<0.01),MDA降低43.71%(P<0.05),猪瘟抗体水平提高14.06(P<0.05)。肠道屏障方面,与正对照组相比,M1组可显著提高小肠绒毛高度,降低隐窝深度;与正、负对照组相比,M1组、M2组可显著提高盲肠乳酸杆菌数量,降低大肠杆菌数量。由此得出,枯草芽胞杆菌可显著提高断奶仔猪的生长性能,改善仔猪肠道环境及健康状况。 展开更多

关键词 断奶仔猪 断奶应激 枯草芽胞杆菌 生产性能 肠道屏障

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捻转血矛线虫病的研究进展 被引量：7

9

作者 李芳芳 张挺 +6 位作者 周彩显 冯新港 杜爱芳 索勋 李祥瑞 朱兴全 胡敏 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第3期107-111,共5页

捻转血矛线虫病是由主要寄生于反刍动物皱胃的捻转血矛线虫引起的一种重要的寄生线虫病,在我国草地牧区普遍流行,可引起宿主消瘦、贫血等慢性消耗性症状,严重感染甚至可引起死亡,给我国养殖业带来巨大的经济损失。由于基层养殖人员常常... 捻转血矛线虫病是由主要寄生于反刍动物皱胃的捻转血矛线虫引起的一种重要的寄生线虫病,在我国草地牧区普遍流行,可引起宿主消瘦、贫血等慢性消耗性症状,严重感染甚至可引起死亡,给我国养殖业带来巨大的经济损失。由于基层养殖人员常常忽视寄生线虫病的危害,缺乏基本的防控常识和驱虫意识,从而错过了预防和治疗该病的最佳时机,最终导致动物大批感染,极大的降低了动物的品质和养殖的经济效益。本文从捻转血矛线虫的形态和生活史着手,介绍了捻转血矛线虫病的危害和症状、诊断和治疗、防控方法及感染和致病的相关分子机制研究进展,希望能为该病的防控提供一定的指导。 展开更多

关键词 捻转血矛线虫病 感染 致病分子机制 防控

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湖北地区山羊球虫感染调查与虫种形态学观察 被引量：7

10

作者 漆明伟 杨新 +2 位作者 方瑞 王锁开 胡敏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第7期7-9,共3页

从湖北省9个地区采集山羊粪便668份,采用饱和食盐水漂浮法和改良麦克马斯特虫卵计数法对采集的样品进行了球虫感染率和感染强度的分析,对山羊球虫种类进行了形态学鉴定。湖北地区山羊球虫总感染率为72.60%,母山羊和公山羊的球虫感染率... 从湖北省9个地区采集山羊粪便668份,采用饱和食盐水漂浮法和改良麦克马斯特虫卵计数法对采集的样品进行了球虫感染率和感染强度的分析,对山羊球虫种类进行了形态学鉴定。湖北地区山羊球虫总感染率为72.60%,母山羊和公山羊的球虫感染率分别为64.22%和60.06%。大于1岁、6月龄到1岁和小于6月龄山羊的球虫感染率分别为54.70%、62.87%和68.36%,不同性别和不同年龄段山羊的球虫感染率的统计学差异均不显著。天门、咸宁和恩施3个地区的平均OPG(每克粪便卵囊数)分别为2 808、1 107和910。本调查共鉴定出8种羊球虫,即阿氏艾美耳球虫(E.arloingi)、艾丽艾美耳球虫(E.alijevi)、克氏艾美耳球虫(E.christenseni)、羊艾美耳球虫(E.caprovina)、山羊艾美耳球虫(E.caprina)、家山羊艾美耳球虫(E.hirci)、约奇艾美耳球虫(E.jolchijevi)和雅氏艾美耳球虫(E.ninakohlyakimovea)。湖北省地区山羊球虫当中的优势虫种是阿氏艾美耳球虫(E.arloingi)、艾丽艾美耳球虫(E.alijevi)和克氏艾美耳球虫(E.christenseni)。 展开更多

关键词 山羊 球虫 调查 优势虫种

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金丝猴源益生粪肠球菌dlt7a的发酵工艺 被引量：4

11

作者 白文妹 李雪梅 +6 位作者 申立泉 石德时 杨敬元 姚辉 龙兴权 欧阳潮 肖运才 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期74-80,共7页

从神农架金丝猴的粪便中分离出1株益生菌株dlt7a,经鉴定为粪肠球菌。为进一步提高发酵液中dlt7a的活菌数量,对菌株dlt7a的发酵工艺进行优化。通过单因素水平试验,确定dlt7a的最佳培养条件为装液量20%(50mL/250mL),接种量2%,培养基初始pH... 从神农架金丝猴的粪便中分离出1株益生菌株dlt7a,经鉴定为粪肠球菌。为进一步提高发酵液中dlt7a的活菌数量,对菌株dlt7a的发酵工艺进行优化。通过单因素水平试验,确定dlt7a的最佳培养条件为装液量20%(50mL/250mL),接种量2%,培养基初始pH 6.5。设计Plackett-Burman(PB)试验和响应面试验,找出发酵培养基中影响dlt7a活菌数的主要成分是蔗糖、鱼粉和KH_2PO_4,并优化3种重要成分的含量,确定最优发酵培养基配方为:蔗糖2.55%,鱼粉2.63%,豆粕2.5%,酵母膏0.4%,CaCO_3 1.0%,KCl 0.1%,MgSO_4·7H_2O 0.1%,KH_2PO_4 0.014%。在此条件下培养dlt7a菌株,活菌数可达58.83×108cfu/mL,比优化前提高了46.53%。 展开更多

关键词 金丝猴 粪肠球菌 发酵工艺 响应面法 优化

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湖北部分地区红斑丹毒丝菌分离株耐药性分析 被引量：4

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作者 李敬涛 吴超 +2 位作者 王雅 黄开松 金梅林 《养殖与饲料》 2015年第2期10-13,共4页

采用药敏纸片扩散法对31株湖北部分地区分离株进行19种临床常用抗生素耐药性试验分析,结果表明:临床分离株对卡那霉素、链霉素、阿米卡星、多粘菌素B、万古霉素和磺胺异恶唑的耐药率为100%,庆大霉素、复方新诺明、氧氟沙星、壮观霉素、... 采用药敏纸片扩散法对31株湖北部分地区分离株进行19种临床常用抗生素耐药性试验分析,结果表明:临床分离株对卡那霉素、链霉素、阿米卡星、多粘菌素B、万古霉素和磺胺异恶唑的耐药率为100%,庆大霉素、复方新诺明、氧氟沙星、壮观霉素、林可霉素和四环素的耐药率分别为96.8%、83.9%、32.3%,25.8%,22.6%和9.67%,对头孢拉定、阿莫西林和阿奇霉素高度敏感。 展开更多

关键词 红斑丹毒丝菌 耐药性 药敏试验

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南方产区肉牛标准化养殖发展调研报告 被引量：7

13

作者 郭爱珍 瞿明仁 +1 位作者 黄必志 彭增起 《养殖与饲料》 2012年第11期1-7,共7页

近年来南方产区肉牛养殖发展迅猛,多数地区农户养殖肉牛效益显著,但仍有一些共性问题亟待解决。通过此次对南方产区肉牛标准化养殖发展调研发现,政府、养殖企业和农户均应采取一定的措施,努力探索更好的惠农政策和适宜的养殖模式,共同... 近年来南方产区肉牛养殖发展迅猛,多数地区农户养殖肉牛效益显著,但仍有一些共性问题亟待解决。通过此次对南方产区肉牛标准化养殖发展调研发现,政府、养殖企业和农户均应采取一定的措施,努力探索更好的惠农政策和适宜的养殖模式,共同推动肉牛产业发展壮大。 展开更多

关键词 肉牛养殖 标准化 南方产区 调研

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一株猪高致病性蓝耳病病毒的分离鉴定与遗传变异分析 被引量：3

14

作者 张维达 杨康 李自力 《中国兽药杂志》 2020年第2期7-15,共9页

为研究猪蓝耳病病毒(PRRSV)的遗传进化规律,于2018年从新疆某猪场采集的病猪血液中分离了一株PRRSV,命名为XJ-b。对临床样品采用RT-PCR扩增鉴定,将阳性样品过滤处理之后接种在Marc-145细胞系进行培养,将盲传3代之后出现病变(CPE)的Marc-... 为研究猪蓝耳病病毒(PRRSV)的遗传进化规律,于2018年从新疆某猪场采集的病猪血液中分离了一株PRRSV,命名为XJ-b。对临床样品采用RT-PCR扩增鉴定,将阳性样品过滤处理之后接种在Marc-145细胞系进行培养,将盲传3代之后出现病变(CPE)的Marc-145样品进行间接免疫荧光鉴定。通过噬斑纯化后,利用RT-PCR对分离株的全基因组进行扩增,使用SeqMan软件对测序结果进行拼接,并根据NCBI上已公布的PRRSV全基因组及Nsp2基因核苷酸序列进行遗传进化与同源性比对分析。结果表明,临床病料RT-PCR检测呈PRRSV核酸阳性,处理后的病料接种至Marc-145细胞72 h之后产生CPE,间接免疫荧光鉴定为PRRSV抗原阳性;序列拼接显示分离株全基因组开放阅读框大小为15119 bp;全基因组和Nsp2基因核苷酸序列分析和同源性比对显示该分离毒株属于中国的高致病性PRRSV亚群。研究结果可为近年来新疆地区PRRSV的毒株差异分析提供参考。 展开更多

关键词 猪高致病性蓝耳病病毒 分离 MARC-145细胞 基因组 进化分析

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三黄鸡CD154基因的克隆、序列分析与表达

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作者 方亮 肖少波 +5 位作者 江云波 袁明涛 马朝志 李彬 方六荣 陈焕春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1032-1037,共6页

CD154在抗原特异的T淋巴细胞和抗原提呈细胞的相互作用中发挥非常重要的作用。利用RT—PCR方法从三黄鸡的外周血单核细胞（PBMC）中克隆了鸡CD154基因全长cDNA，序列分析显示该基因cDNA全长819bp，可编码272个氨基酸。将克隆的鸡CD154全... CD154在抗原特异的T淋巴细胞和抗原提呈细胞的相互作用中发挥非常重要的作用。利用RT—PCR方法从三黄鸡的外周血单核细胞（PBMC）中克隆了鸡CD154基因全长cDNA，序列分析显示该基因cDNA全长819bp，可编码272个氨基酸。将克隆的鸡CD154全长cDNA克隆到原核表达载体pET-28a中获得表达质粒pET-28a—CD154，转化BL21（DE3）后未检测到特异性表达蛋白。进一步通过PCR获得去除信号肽（1～22aa）和跨膜区（23～46aa）的CD154基因片段（CD154d），并将其克隆到pQE80的6×His下游，在大肠杆菌中成功表达，获得分子量约27ku的融合表达蛋白6×His—CD154d。Western—blot试验证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应。同时，将CD154基因全长cDNA插入真核表达载体pEGFP-C1的EGFP基因下游，获得真核表达质粒pEGFP—CD154，转染Hela细胞，荧光显微镜观察发现EGFP—CD154融合蛋白表达在细胞膜上，证实了鸡CD154的膜定位特性。本研究为进一步研究鸡CD154的结构与功能及其免疫佐剂效应奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡 CD154 克隆 表达 定位

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一株重组类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及基因组分析 被引量：4

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作者 杨康 袁林茂 +1 位作者 张维达 李自力 《中国兽药杂志》 2021年第8期1-11,共11页

为分离上海地区猪繁殖与呼吸综征病毒(PRRSV)并分析其分子遗传进化关系,对来自该地区某猪场疑似PRRSV感染病猪的2份肺样进行RT-PCR检测,阳性样品接种猪肺泡巨噬细胞(PAMs),将盲传3代后出现细胞病变的PAMs经间接免疫荧光鉴定,通过RT-PCR... 为分离上海地区猪繁殖与呼吸综征病毒(PRRSV)并分析其分子遗传进化关系,对来自该地区某猪场疑似PRRSV感染病猪的2份肺样进行RT-PCR检测,阳性样品接种猪肺泡巨噬细胞(PAMs),将盲传3代后出现细胞病变的PAMs经间接免疫荧光鉴定,通过RT-PCR扩增分离株全基因组序列,测序后与GenBank登录的参考株全基因组序列进行同源性及遗传进化分析,分析了分离株Nsp2、GP5氨基酸序列的遗传进化关系,并对分离株做了重组分析和细胞嗜性试验。结果显示,成功分离出1株PRRSV,命名为SH2019,其全基因组开放阅读框大小为14677 bp,分离株与NADC30的核苷酸同源性最高,属于目前流行于中国的类NADC30 PRRSV,其Nsp2存在131个氨基酸缺失的分子特征;分离株是以谱系1毒株为主要亲本,以谱系3、谱系5或谱系8毒株为次要亲本,在12601~12901 nt(ORF2~ORF4)发生了基因重组的重组毒株,分离株不能感染Marc-145细胞。本研究分离鉴定一株重组类NADC30 PRRSV,可为该地区猪繁殖与呼吸综合征的防控提供参考。 展开更多

关键词 类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离鉴定 基因重组:细胞嗜性

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猪δ冠状病毒的分离鉴定及其遗传进化分析 被引量：1

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作者 方谱县 刘康 +5 位作者 张蕙畅 夏思进 张健淞 任杰 肖少波 方六荣 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期168-175,共8页

通过RT-PCR对采集自河北省2个猪场的5份腹泻仔猪小肠内容物进行检测,结果均为猪δ冠状病毒(PDCoV)阳性。将病料处理后接种LLC-PK1细胞,从2个猪场的病料中各成功分离到1株PDCoV,分别命名为PDCoV CHN-HeB-A1株和CHN-HeB-B2株。通过间接免... 通过RT-PCR对采集自河北省2个猪场的5份腹泻仔猪小肠内容物进行检测,结果均为猪δ冠状病毒(PDCoV)阳性。将病料处理后接种LLC-PK1细胞,从2个猪场的病料中各成功分离到1株PDCoV,分别命名为PDCoV CHN-HeB-A1株和CHN-HeB-B2株。通过间接免疫荧光试验(IFA)、Western blot和电镜观察对分离的病毒进一步鉴定,IFA和Western blot结果证实2株病毒都能与PDCoV M蛋白的单克隆抗体发生特异性反应,电镜下可观察到直径100~150 nm、呈典型皇冠状的病毒粒子,证实所分离的病毒为PDCoV。全基因组测序以及遗传进化分析结果表明,2株PDCoV与中国大陆毒株相似性较高,为98.7%~99.1%,与中国香港毒株处于同一簇。 展开更多

关键词 猪δ冠状病毒 分离 鉴定 基因组测序 遗传进化

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