湖北省某鸽场大肠埃希氏菌的分离鉴定与耐药性分析

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作者 王娟 卢琴 +3 位作者 张记高 程伊洛 张腾飞 刘静波 《动物医学进展》 北大核心 2025年第5期134-138,共5页

大肠杆菌病是危害鸽养殖业的重要细菌性传染病,然而相关的流行及耐药数据却相对较少。为研究湖北省鸽场大肠埃希氏菌的流行及耐药情况,采集了肉鸽屠宰后的肝、脾、肠内容物等285份,经伊红美蓝琼脂培养基分离培养,通过PCR鉴定,分离到了19... 大肠杆菌病是危害鸽养殖业的重要细菌性传染病,然而相关的流行及耐药数据却相对较少。为研究湖北省鸽场大肠埃希氏菌的流行及耐药情况,采集了肉鸽屠宰后的肝、脾、肠内容物等285份,经伊红美蓝琼脂培养基分离培养,通过PCR鉴定,分离到了199株鸽源大肠埃希氏菌,分离率为69.82%。经过双重PCR扩增对菌株进行系统进化群鉴定,筛选出高致病群菌株60株(B2群34株,D群26株),占分离株的30.15%。采用药敏纸片法对60株高致病群菌株进行了12种抗菌药物的耐药性分析,结果表明,这些菌株对林可霉素、氟苯尼考、四环素、氨苄西林、红霉素和甲氧苄氨嘧啶的耐药率高于95%,而对大观霉素、替加环素、头孢噻肟、环丙沙星、多黏菌素B和美罗培南等较为敏感。所有菌株均耐3种以上的抗菌药物,最多可耐9种抗菌药物,其中51.67%的菌株耐6种抗菌药物,占比最多。研究结果可为湖北省鸽场大肠杆菌病的预防与合理用药提供科学数据。 展开更多

关键词 大肠埃希氏菌 分离鉴定 致病群 耐药性 鸽

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恩施黄连醇提液主要成分的测定及其抑菌机制的研究

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作者 白若男 郭云清 +7 位作者 张睿 张腾飞 张文婷 卢琴 胡巧 邵华斌 罗青平 郭利伟 《动物医学进展》 北大核心 2025年第2期86-91,共6页

为了测定产地湖北恩施黄连醇提液的生物碱含量,研究其抑菌机制,用高效液相色谱法对湖北恩施5年生黄连醇提液主要成分进行测定,并测定了黄连醇提液对大肠埃希氏菌、鸡白痢沙门氏菌、禽多杀性巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度、生... 为了测定产地湖北恩施黄连醇提液的生物碱含量,研究其抑菌机制,用高效液相色谱法对湖北恩施5年生黄连醇提液主要成分进行测定,并测定了黄连醇提液对大肠埃希氏菌、鸡白痢沙门氏菌、禽多杀性巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度、生长特性、胞外碱性磷酸酶含量、呼吸代谢相关酶类活性的影响。结果显示,醇提液主要成分为小檗碱、表小檗碱、巴马汀和黄连碱,含量分别为7.48%±0.27%、3.52%±0.12%、2.21%±0.07%、2.48%±0.08%,且黄连醇提液对大肠埃希氏菌、鸡白痢沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、禽多杀性巴氏杆菌的MIC值分别为0.125、0.5、0.5、0.125 mg/mL。MIC浓度的黄连醇提液可以抑制细菌生长。黄连醇提液还可增加胞外碱性磷酸酶的含量,降低琥珀酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶活性。湖北恩施5年生黄连醇提液含量均高于药典规定含量,且具有广谱抑菌活性,可通过破坏细菌膜的通透性、抑制呼吸系统代谢等发挥抑菌效应。 展开更多

关键词 黄连 醇提液 生物碱 高效液相色谱 抑菌机制

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耐热选育对新城疫LaSota疫苗株热稳定性的影响

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作者 赵庆庆 曾哲 +6 位作者 肖倩妮 李丽 冯贺龙 姚伦 罗青平 温国元 商雨 《动物医学进展》 北大核心 2025年第2期35-41,共7页

为了探究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota疫苗株热稳定性相关的潜在氨基酸位点,将其在SPF鸡胚中自然传代、间隔耐热选育和连续耐热选育至20代,监测血凝活性和细胞感染力的热稳定性;对不同代次的病毒进行全基因组测序,筛... 为了探究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota疫苗株热稳定性相关的潜在氨基酸位点,将其在SPF鸡胚中自然传代、间隔耐热选育和连续耐热选育至20代,监测血凝活性和细胞感染力的热稳定性;对不同代次的病毒进行全基因组测序,筛选传代过程中的突变位点,并利用蛋白结构生物学方法分析突变位点在病毒蛋白结构热稳定性中的作用。结果显示,经过间隔耐热选育和连续耐热选育的病毒血凝活性和细胞感染力热稳定性均有所提升。测序结果分析表明,与自然传代毒株相比,间隔耐热选育和连续耐热选育病毒分别共计有11和12个碱基突变,其中5个为错义突变(间隔耐热选育病毒为4个),NP蛋白Q169K(仅发生在连续耐热选育病毒)、HN蛋白G171S和V191I、M蛋白E170D以及L蛋白E1612K。蛋白结构分析结果显示,L蛋白E1612K的突变导蛋白二级结构改变;HN蛋白G171S的突变导致蛋白三级结构改变。通过耐热选育筛选出了5个可能与NDV LaSota疫苗株热稳定性相关的关键氨基酸位点,为NDV的耐热机理研究及ND耐热疫苗的研发提供理论支撑。 展开更多

关键词 新城疫病毒 LaSota疫苗株 耐热选育 鸡胚传代 热稳定性

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鸭坦布苏病毒非结构蛋白亚细胞定位及其在IFN-β信号通路中的作用

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作者 张蓉蓉 潘爱銮 +6 位作者 吴娟 方兵兵 汪最 卢琴 张腾飞 温国元 罗青平 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5470-5478,共9页

【目的】探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核... 【目的】探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS-HA,构建重组真核表达质粒,并分别转染至HEK-293T细胞,通过Western blotting检测蛋白表达;利用间接免疫荧光试验检测非结构蛋白的亚细胞定位情况,通过双荧光素酶报告试验研究DTMUV的非结构蛋白对鸭源IFN-β启动子活性的影响。【结果】试验成功构建DTMUV的7个非结构蛋白带HA标签的真核表达质粒。Western blotting结果显示,真核表达非结构蛋白均正常表达,NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5蛋白分子质量大小分别为38、25、14.4、68、13.9、28和100 ku。间接免疫荧光试验结果显示,7个非结构蛋白在细胞内的表达形态不一,主要定位在细胞浆中。双荧光素酶报告试验结果表明,与对照组相比,过表达NS2B和NS4B蛋白后,鸭源IFN-β启动子活性极显著降低(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了DTMUV的7个非结构蛋白的真核表达质粒,非结构蛋白主要表达于细胞浆中,其中NS2B和NS4B蛋白具有颉颃IFN-β活性的功能。试验结果为DTMUV的免疫逃逸研究提供了一定的理论依据,并为深入探究DTMUV在宿主天然免疫信号通路中的作用机制提供了试验材料。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 非结构蛋白 亚细胞定位 IFN-β信号通路

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大肠埃希氏菌疫苗生产用菌种种子批的建立与鉴定

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作者 刘泽文 袁芳艳 +8 位作者 刘威 高婷 杨克礼 郭锐 李畅 吴琼 朱佳佳 田永祥 周丹娜 《动物医学进展》 北大核心 2024年第12期39-43,共5页

为了研制仔猪大肠杆菌病三价(K88+K99+987P)灭活疫苗,以大肠埃希氏菌生产菌种C83549(k88)第2代和C83644(k99)、C83710(987p)第3代基础种子作为原始种子,建立了用于仔猪大肠杆菌病疫苗生产的大肠埃希氏菌基础种子批,分别对种子批的F1、F5... 为了研制仔猪大肠杆菌病三价(K88+K99+987P)灭活疫苗,以大肠埃希氏菌生产菌种C83549(k88)第2代和C83644(k99)、C83710(987p)第3代基础种子作为原始种子,建立了用于仔猪大肠杆菌病疫苗生产的大肠埃希氏菌基础种子批,分别对种子批的F1、F5、F10、F13代进行了全面鉴定。结果表明,各代种子的培养特性、生化特性均符合大肠埃希氏菌特征,抗原结构分别为C83549(O149∶K88)、C83644(O68∶K99)和C83710(O9∶987P);各代次菌株的菌毛抗原RIHA单位≥800,菌种免疫原性鉴定合格;各菌株经口服途径灌服1.5×10^(10)CFU/头,可引起仔猪100%发病。因此,3个菌株均可用作仔猪大肠杆菌病三价(K88+K99+987P)灭活疫苗生产的菌种。 展开更多

关键词 大肠埃希氏菌 种子批 建立 鉴定

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A、B、J亚群禽白血病病毒混合感染的鉴定及gp85基因序列分析 被引量：5

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作者 窦俊峰 汪最 +5 位作者 李丽 卢琴 金鑫鑫 凌小淳 罗青平 翟新国 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期302-311,共10页

【目的】了解湖北地区禽白血病病毒(Avian leukosis virus, ALV)亚群之间混合感染及其gp85基因遗传变异情况,为进一步研究ALV混合感染的流行病学提供参考。【方法】对来自湖北宜昌疑似感染ALV的一只病死鸡进行病理剖检,无菌采集病变组... 【目的】了解湖北地区禽白血病病毒(Avian leukosis virus, ALV)亚群之间混合感染及其gp85基因遗传变异情况,为进一步研究ALV混合感染的流行病学提供参考。【方法】对来自湖北宜昌疑似感染ALV的一只病死鸡进行病理剖检,无菌采集病变组织接种DF-1细胞进行病毒分离,通过PCR、ELISA及间接免疫荧光试验(IFA)等方法进行亚群鉴定,进一步对分离株gp85基因的相似性和变异情况进行分析。【结果】剖检结果可见病死鸡肾脏、脾脏肿大,肺脏出血,表面可见灰白色肿瘤结节;组织匀浆接种DF-1细胞后,ELISA检测发现细胞上清P27抗原呈阳性;IFA检测发现,感染细胞里有特异性绿色荧光;PCR鉴定能同时扩增出A(692 bp)、B(847 bp)和J(545 bp)亚群的特异性条带。鉴定结果表明,从该病死鸡中分离到A、B和J亚群ALV毒株,分别命名为HBYC2022-A、HBYC2022-B和HBYC2022-J。分离株gp85基因核苷酸相似性分析显示,HBYC2022-A与江苏株JS-A1201相似性最高,为99.6%;HBYC2022-B与江苏株JS-B1204相似性最高,为99.7%;而HBYC2022-J与黑龙江株PK19FA01、广西株GX20YL12 J及安徽株AHaq02相似性均为100%。此外,分离株gp85基因高突变区域(hr1、hr2)氨基酸序列并未出现特殊点突变。【结论】鸡群存在A、B和J不同亚群ALV的混合感染情况,提示国内养禽场需提高警惕并加强针对ALV各亚群的流行病学调查。 展开更多

关键词 禽白血病病毒(ALV) 分离鉴定 混合感染 GP85基因 序列分析

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生物矿化对新城疫病毒LaSota株生物学特性及免疫原性的影响 被引量：1

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作者 张高峰 魏家阳 +8 位作者 冯贺龙 李丽 曾哲 田光明 聂仁锋 罗青平 温国元 魏红波 商雨 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5663-5671,共9页

旨在研究生物矿化对新城疫病毒(NDV)LaSota株生物学特性及免疫原性的影响,为耐热活疫苗研发提供新思路。通过测定不同矿化条件下病毒粒径、血凝效价和斑点印记,确定NDV的最佳生物矿化条件;将矿化后病毒接种BHK-21细胞,检测矿化对病毒增... 旨在研究生物矿化对新城疫病毒(NDV)LaSota株生物学特性及免疫原性的影响,为耐热活疫苗研发提供新思路。通过测定不同矿化条件下病毒粒径、血凝效价和斑点印记,确定NDV的最佳生物矿化条件;将矿化后病毒接种BHK-21细胞,检测矿化对病毒增殖的影响,同时比较热处理后的矿化病毒在BHK-21细胞中的滴度变化情况;利用抗体中和试验检测矿化病毒的免疫原性;最后通过饮水免疫的方式评估矿化病毒在SPF雏鸡上的免疫效果。结果显示:生物矿化条件经优化后,LaSota株在4 mmol·L^(-1)Na_(2)HPO_(4)和3 mmol·L^(-1)CaCl_(2)条件下矿化效果最好,此时矿化病毒粒径最大,血凝效价最低,矿化率高达98.25%。矿化的LaSota株在BHK-21细胞上增殖起始时间迟于未矿化病毒,但两者的最终增殖滴度没有显著差异。经NDV抗体中和后,矿化病毒滴度的下降值为103.0 TCID_(50)·mL^(-1),显著低于未矿化组。在56℃水浴中孵育15 min后,矿化的LaSota株病毒滴度仅下降103.5 TCID_(50)·mL^(-1),与TS09-C耐热株的耐热特性相当。矿化的LaSota株免疫SPF雏鸡14 d后,抗体水平均高于未矿化LaSota株免疫鸡群。免疫后42和78 d进行攻毒试验,矿化LaSota株免疫鸡群的存活率分别为100%和60%。综上所述,本研究优化了NDV LaSota株的最佳矿化条件,矿化会延缓病毒的增殖速度,但不影响病毒的增殖滴度。经矿化后,能降低病毒与抗体的中和反应并提升其热稳定性,并可通过饮水免疫的方式对SPF雏鸡提供较好的保护效果。本研究证实通过生物矿化开发新城疫耐热活疫苗是一条切实可行的思路,也为开发其他病毒耐热活疫苗提供参考和借鉴。 展开更多

关键词 新城疫病毒LaSota株 生物矿化 生物学特性 热稳定性 免疫原性

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鸡滑液囊支原体的分离鉴定及药敏试验 被引量：2

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作者 殷梦玉 张腾飞 +4 位作者 张文婷 胡巧 卢琴 郭云清 罗青平 《动物医学进展》 北大核心 2024年第1期130-135,共6页

为弄清湖北省某蛋鸡场180日龄鸡群出现呼吸道症状和产蛋率下降的病原,采集病料进行病原的分离鉴定与药敏试验,用形态学观察方法和分子生物学方法对分离株进行了形态学观察和16S rRNA基因鉴定,并用鸡胚感染试验对分离株进行致病性试验。... 为弄清湖北省某蛋鸡场180日龄鸡群出现呼吸道症状和产蛋率下降的病原,采集病料进行病原的分离鉴定与药敏试验,用形态学观察方法和分子生物学方法对分离株进行了形态学观察和16S rRNA基因鉴定,并用鸡胚感染试验对分离株进行致病性试验。结果显示,病原分离鉴定结果仅滑液囊支原体阳性,镜检观察到典型的“煎蛋样”菌落;16S rRNA序列与已报道的滑液囊支原体的具有高度同源性;鸡胚感染试验显示,分离株导致鸡胚发育迟缓,胚体弱小,从弱小胚体内可再次分离出滑液囊支原体;药敏试验结果显示滑液囊支原体分离株对泰妙菌素、四环素和盐酸克林霉素敏感。结果表明,从产蛋下降的鸡群中成功分离到1株滑液囊支原体,为临床该病的防治提供了科学依据。 展开更多

关键词 鸡 滑液囊支原体 分离鉴定 药敏试验

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鸡胚免疫新城疫疫苗后宿主法氏囊转录组学分析

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作者 蒋立人 冯贺龙 +9 位作者 姜鑫瑞 王梓晨 张高峰 商雨 曾哲 姚伦 汪宏才 罗青平 田光明 温国元 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1632-1641,共10页

【目的】通过转录组学分析鸡胚免疫新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)TS09-C株后宿主法氏囊内免疫关键基因及信号通路分子转录差异,探究免疫后宿主法氏囊内免疫相关分子的调控反应。【方法】将60只18胚龄SPF鸡胚随机分为免疫组... 【目的】通过转录组学分析鸡胚免疫新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)TS09-C株后宿主法氏囊内免疫关键基因及信号通路分子转录差异,探究免疫后宿主法氏囊内免疫相关分子的调控反应。【方法】将60只18胚龄SPF鸡胚随机分为免疫组和对照组,30枚/组,免疫组将NDV TS09-C株通过羊膜腔接种鸡胚,剂量为103.0 EID 50/枚,注射体积为0.1 mL,对照组以同样的方法接种等体积PBS。检测免疫后不同时间点肺脏、胸腺、脾脏和法氏囊组织的病毒载量。选取病毒载量最高的法氏囊组织进行转录组学测序后,筛选免疫相关差异表达基因并分析其参与的主要功能及通路。【结果】免疫后1 d法氏囊组织中即可监测到病毒,免疫后3 d病毒载量达到最高。将免疫后3 d的法氏囊进行转录组学分析,与对照组相比,免疫组有453个基因上调、98个基因下调,其中免疫相关基因有36个上调、10个下调。免疫相关差异表达基因主要富集于自噬和细胞因子-细胞因子受体相互作用的免疫相关通路。差异表达基因蛋白互作分析显示,自噬通路中富集的BCL2与其他免疫相关基因有较多互作关系,且在B细胞活化、分化、免疫系统发育等功能注释中均有参与。【结论】本研究结果揭示了鸡胚免疫NDV TS09-C株后法氏囊内调控B细胞活化、分化的潜在靶向基因及通路,为进一步研究该毒株鸡胚免疫后B淋巴细胞调控的分子机制提供新的信息。 展开更多

关键词 新城疫病毒(NDV) TS09-C株 鸡胚免疫 法氏囊 转录组分析

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竹叶黄酮对鸡胚接种新城疫疫苗免疫效果的影响

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作者 姜鑫瑞 冯贺龙 +8 位作者 杨宏春 蒋立人 汪宏才 曾哲 左波 张腾飞 罗青平 商雨 温国元 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期4174-4181,共8页

【目的】探究竹叶黄酮(bamboo leaf flavonoid,BLF)作为疫苗佐剂对新城疫(ND)疫苗鸡胚接种的免疫效果影响。【方法】试验选取18胚龄SPF种蛋108枚,随机分为3组:Control组(不注射任何物质)、TS组(注射0.1 mL 103.0 EID 50/0.1 mL的新城疫... 【目的】探究竹叶黄酮(bamboo leaf flavonoid,BLF)作为疫苗佐剂对新城疫(ND)疫苗鸡胚接种的免疫效果影响。【方法】试验选取18胚龄SPF种蛋108枚,随机分为3组:Control组(不注射任何物质)、TS组(注射0.1 mL 103.0 EID 50/0.1 mL的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)TS09-C疫苗株)和BLF+TS组(注射0.1 mL含2%BLF和103.0 EID 50/0.1 mL的NDV TS09-C疫苗株的混合液),每组36枚种蛋。试验期间,统计种蛋的孵化率和雏鸡的存活率,在雏鸡7、14、21、28日龄时,每组随机选取3只进行屠宰,采集脾脏、法氏囊、胸腺组织,统计免疫器官指数;采集雏鸡翅下静脉血液,测定血清抗体和细胞因子水平;在雏鸡28日龄时使用NDV强毒株F48E9进行攻毒保护试验,攻毒后每天观察试验雏鸡状态,记录体重变化情况,并于攻毒后第3天每组随机选取3只雏鸡进行屠宰,取十二指肠、肺脏和气管组织并检测雏鸡不同组织病毒载量。【结果】鸡胚接种后,BLF+TS组雏鸡孵化率为100%,存活率为97.22%。与TS组相比,21~28日龄时BLF+TS组雏鸡的脾脏、法氏囊和胸腺指数以及血清中白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)含量均显著升高(P<0.05)。攻毒试验结果显示,攻毒后BLF+TS组雏鸡存活率为100%,攻毒后2~4 d BLF+TS组雏鸡体重增长速度显著低于健康对照组(P<0.05);攻毒后3~7 d时BLF+TS雏鸡体重增长速度显著高于TS组(P<0.05)。BLF+TS组雏鸡攻毒后呼吸道和消化道组织的病毒载量显著低于TS组(P<0.05)。【结论】BLF作为免疫佐剂可安全进行鸡胚接种,而且能够帮助雏鸡建立早期免疫保护,进一步提高ND疫苗免疫效果,研究结果为开发高效鸡胚免疫疫苗佐剂提供借鉴和参考。 展开更多

关键词 鸡胚接种 竹叶黄酮 新城疫疫苗 疫苗佐剂

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鸡白痢检测方法研究进展

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作者 张记高 程伊洛 +3 位作者 汪宏才 张腾飞 罗青平 翟新国 《中南农业科技》 2024年第11期230-233,共4页

鸡白痢是由鸡白痢沙门菌(Salmonella Pullorum)感染导致的传染性疾病。种鸡鸡白痢净化是防控该病最主要的措施。通过对传统病原学、分子生物学及免疫学三类检测方法进行概述和比较,指出各种方法的优势及不足,创造性地提出了将不同方法... 鸡白痢是由鸡白痢沙门菌(Salmonella Pullorum)感染导致的传染性疾病。种鸡鸡白痢净化是防控该病最主要的措施。通过对传统病原学、分子生物学及免疫学三类检测方法进行概述和比较,指出各种方法的优势及不足,创造性地提出了将不同方法进行联合应用的思路,旨在为建立准确、快速的检测方法,优化净化程序及养殖业持续健康发展提供帮助。 展开更多

关键词 鸡白痢沙门菌(Salmonella Pullorum) 净化 细菌学 免疫学 分子生物学 检测方法

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湖北省猪2型链球菌的分布及耐药性分析 被引量：8

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作者 刘泽文 袁芳艳 +7 位作者 刘威 高婷 周丹娜 杨克礼 段正赢 郭锐 梁婉 田永祥 《动物医学进展》 北大核心 2021年第1期125-129,共5页

为了明确湖北省猪2型链球菌的分布,为猪链球菌病的防控提供依据,从湖北武汉等10个地区的29个县(市、区)的48份发病猪样品中分离出猪链球菌34株,并从中鉴定出猪2型链球菌16株,占全部分离链球菌的47.1%,16株猪2型链球菌分布于10个地区的1... 为了明确湖北省猪2型链球菌的分布,为猪链球菌病的防控提供依据,从湖北武汉等10个地区的29个县(市、区)的48份发病猪样品中分离出猪链球菌34株,并从中鉴定出猪2型链球菌16株,占全部分离链球菌的47.1%,16株猪2型链球菌分布于10个地区的15个县(市、区)。分离菌株的药敏试验结果显示,16株猪2型链球菌对头孢呋辛、头孢曲松、阿莫西林和氨苄西林100%敏感,对卡那霉素、四环素、阿米卡星、庆大霉素和磺胺异[口恶]唑全部耐药,16株分离菌株耐药全部在7种以上。 展开更多

关键词 猪2型链球菌 分布 耐药性

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羊流产衣原体间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用 被引量：5

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作者 郭锐 田永祥 +6 位作者 刘威 周丹娜 段正赢 杨克礼 刘泽文 袁芳艳 高婷 《中国草食动物科学》 CAS 2020年第3期57-59,共3页

以羊流产衣原体特异性外膜蛋白POMP90a为诊断标识,将其纯化后作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法。试验的最佳反应条件为:最佳抗原浓度度为2μg/mL,血清抗体稀释度为1∶20,封闭液和稀释液用含0.5%BSA的PBST,酶标二抗稀释度为1∶5 00... 以羊流产衣原体特异性外膜蛋白POMP90a为诊断标识,将其纯化后作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法。试验的最佳反应条件为:最佳抗原浓度度为2μg/mL,血清抗体稀释度为1∶20,封闭液和稀释液用含0.5%BSA的PBST,酶标二抗稀释度为1∶5 000。由于传统的IHA试剂盒只能检测衣原体目,对于其种属不能区别,该方法比IHA适合确诊流产衣原体。因此,该研究建立的羊流产衣原体间接ELISA抗体检测方法具有良好的稳定性和可重复性,并具有较高的特异性和敏感性。 展开更多

关键词 羊 流产衣原体 间接ELISA

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表达禽腺病毒血清4型Fiber2蛋白的重组耐热新城疫病毒的构建及免疫效果评估 被引量：2

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作者 商雨 李林涛 +9 位作者 李丽 徐英英 冯贺龙 汪宏才 张蓉蓉 曾哲 王红琳 罗青平 邵华斌 温国元 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第2期650-659,共10页

【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus sero... 【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)的Fiber2基因插入到其基因组上,构建表达Fiber2蛋白的重组耐热NDV质粒pTS-HN-Fiber2。通过病毒拯救技术拯救重组NDV rTS-HN-Fiber2,并测定其生物学特性和作为疫苗候选株的免疫原性和攻毒保护性。【结果】rTS-HN-Fiber2的鸡胚平均致死时间>168 h,且脑内接种致病指数为0,属于弱毒的范畴;在细胞上的生长曲线结果表明,rTS-HN-Fiber2与亲本LaSota株有相似的生长曲线,但最终的生长滴度略低于LaSota株;rTS-HN-Fiber2在56℃处理15 min后,病毒滴度下降约10^(3) TCID_(50)/mL,而LaSota株56℃处理5 min几乎无感染性;间接免疫荧光试验结果表明,rTS-HN-Fiber2能表达Fiber2蛋白。免疫和攻毒试验结果显示,rTS-HN-Fiber2能产生NDV抗体,且能显著提高雏鸡在FAdV-4强毒下的存活率,减轻FAdV-4强毒引起的组织病变,降低组织中的病毒载量。【结论】本研究成功构建了表达FAdV-4 Fiber2蛋白的重组耐热NDV,该病毒保持了亲本LaSota株的弱毒生物学特性,但热稳定性有显著提升;重组NDV免疫雏鸡可产生针对NDV和FAdV-4强毒的保护,该重组NDV可作为开发针对FAdV-4和NDV二联基因工程疫苗的候选病毒株。 展开更多

关键词 禽腺病毒血清4型(FAdV-4) 新城疫病毒(NDV) Fiber2蛋白 重组病毒 耐热

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山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶基因的克隆表达及其编码氨基酸的生物学分析 被引量：1

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作者 刘威 蒋鹏程 +7 位作者 杨克礼 袁芳艳 周丹娜 刘泽文 高婷 郭锐 孙裴 田永祥 《动物医学进展》 北大核心 2023年第2期35-40,共6页

旨在获得山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LDH)的蛋白表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究LDH蛋白的功能奠定基础。试验完成了LDH基因的克隆和密码子改造,成功将LDH基因中473、761... 旨在获得山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LDH)的蛋白表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究LDH蛋白的功能奠定基础。试验完成了LDH基因的克隆和密码子改造,成功将LDH基因中473、761、779 nt处的A突变为G,使改造后的LDH基因能在大肠埃希氏菌Rosetta中正确表达。SDS-PAGE电泳结果显示,IPTG诱导目的蛋白表达后获得一条大小约34 ku的蛋白条带,Western blot结果表明获得的原核表达产物可与抗6×His tag的单克隆抗体发生特异性反应,研究采用DNAStar Protean模块分析了LDH的二级结构、蛋白骨架柔性区域和可能的B细胞抗原优势表位,为进一步研究其功能奠定了基础。 展开更多

关键词 山羊支原体山羊肺炎亚种 MCCG-0521 乳酸脱氢酶 密码子改造 二级结构

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黄芪多糖对新城疫活疫苗免疫增强的作用 被引量：4

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作者 汪宏才 商雨 +6 位作者 温国元 任项霏 罗玲 张蓉蓉 曾哲 徐英英 罗青平 《中南农业科技》 2023年第5期49-51,共3页

黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)具有免疫调节作用,在中医上应用十分广泛。为了验证APS对家禽疫苗的免疫增强作用,在新城疫(Newcastle Disease,ND)活疫苗稀释液中添加APS,以滴鼻点眼的方式免疫雏鸡,通过血清抗体检测和强毒攻... 黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)具有免疫调节作用,在中医上应用十分广泛。为了验证APS对家禽疫苗的免疫增强作用,在新城疫(Newcastle Disease,ND)活疫苗稀释液中添加APS,以滴鼻点眼的方式免疫雏鸡,通过血清抗体检测和强毒攻击保护试验来评价APS对疫苗的免疫增强作用。结果表明,以104.0EID50抗原含量免疫雏鸡,免疫后14 d,添加APS组血清抗体HI效价显著高于未添加组,且攻毒保护率达到100%,证明了黄芪多糖对新城疫活疫苗的免疫作用显著增强。 展开更多

关键词 黄芪多糖 新城疫 活疫苗 佐剂免疫增强

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浅谈当前规模化猪场非洲猪瘟综合防控技术 被引量：3

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作者 郭锐 周丹娜 +8 位作者 刘泽文 杨克礼 高婷 袁芳艳 刘威 李畅 夏三林 邱振乾 田永祥 《猪业科学》 2022年第12期88-89,共2页

从非洲猪瘟疫情在我国暴发以来,给我国的养猪业造成了严重的经济损失。猪价也如同过山车一样,从高位到低位再到现在的反弹,猪周期变更长了,不少中小型养殖户由于抗风险能力差,大部分关停,截止到2020年农业农村部统计我国猪场规模化率已... 从非洲猪瘟疫情在我国暴发以来,给我国的养猪业造成了严重的经济损失。猪价也如同过山车一样,从高位到低位再到现在的反弹,猪周期变更长了,不少中小型养殖户由于抗风险能力差,大部分关停,截止到2020年农业农村部统计我国猪场规模化率已经达到57.1%。 展开更多

关键词 非洲猪瘟 规模化猪场 养猪业 抗风险能力 过山车 综合防控技术

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新城疫病毒HN蛋白膜外区的纯化

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作者 商雨 李丽 +8 位作者 樊三铃 李林涛 唐国毅 任助 王红琳 薛玉涵 罗青平 邵华斌 温国元 《动物医学进展》 北大核心 2019年第9期48-52,共5页

血凝素神经氨酸酶(HN)是新城疫病毒(NDV)囊膜表面的糖蛋白之一,其在病毒表面的含量非常丰富,影响NDV的很多生物学特性,如热稳定性等。利用TritonX-100破坏病毒囊膜结构,分离囊膜糖蛋白,最后通过蛋白酶酶切和高速离心的方法获得了较为纯... 血凝素神经氨酸酶(HN)是新城疫病毒(NDV)囊膜表面的糖蛋白之一,其在病毒表面的含量非常丰富,影响NDV的很多生物学特性,如热稳定性等。利用TritonX-100破坏病毒囊膜结构,分离囊膜糖蛋白,最后通过蛋白酶酶切和高速离心的方法获得了较为纯净的HN蛋白胞外区的蛋白样品,建立了从NDV粒子上纯化HN蛋白胞外区的方法。利用该方法获得的HN蛋白样品可以保持天然蛋白的结构、化学修饰和功能,能够更好地用于研究HN蛋白结构功能和生物学特性的形成机制,为新城疫病毒的基础研究、新城疫病毒载体改良应用和新城疫疫苗的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 血凝素神经氨酸酶 蛋白纯化

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一起猪链球菌和传染性胸膜肺炎放线杆菌混合感染的诊断报告

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作者 刘泽文 袁芳艳 +6 位作者 刘威 高婷 周丹娜 杨克礼 郭锐 梁婉 田永祥 《湖北畜牧兽医》 2020年第11期5-6,9,共3页

通过对湖北武汉某猪场一起急性死亡猪进行临床诊断和病原分离鉴定,确定是由猪链球菌和传染性胸膜肺炎放线杆菌混合感染引起,分离菌株呈典型革兰氏阳性链状球菌和革兰氏阴性小杆菌,生化鉴定符合猪链球菌和传染性胸膜肺炎放线杆菌的生化特... 通过对湖北武汉某猪场一起急性死亡猪进行临床诊断和病原分离鉴定,确定是由猪链球菌和传染性胸膜肺炎放线杆菌混合感染引起,分离菌株呈典型革兰氏阳性链状球菌和革兰氏阴性小杆菌,生化鉴定符合猪链球菌和传染性胸膜肺炎放线杆菌的生化特点,分离的猪链球菌和传染性胸膜肺炎放线杆菌对头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟敏感,这几种药物对发病猪有很好的治疗效果。 展开更多

关键词 猪 链球菌 传染性胸膜肺炎放线杆菌 诊断

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茶多酚的抗菌抗病毒作用 被引量：18

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作者 高婷 袁芳艳 +9 位作者 刘泽文 刘威 周丹娜 杨克礼 段正赢 郭锐 梁婉 王宁宁 周锐 田永祥 《动物医学进展》 北大核心 2022年第4期107-111,共5页

茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称,具有强效的抗菌与杀毒作用,对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、DNA病毒及RNA病毒都具有抑制活性。由于茶多酚无毒副作用、具有保健功能等特点,对机体无刺激,因此被广泛应用于食品化工、医疗卫生等行业。茶... 茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称,具有强效的抗菌与杀毒作用,对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、DNA病毒及RNA病毒都具有抑制活性。由于茶多酚无毒副作用、具有保健功能等特点,对机体无刺激,因此被广泛应用于食品化工、医疗卫生等行业。茶多酚抗菌杀毒的作用使其有望成为防治疾病的新型生物活性分子,为感染性疾病防控研究提供新思路。作者通过对国内外有关茶多酚在抗菌杀毒方面文献的搜集整理,综述了茶多酚抗菌杀毒的作用方式,以期为了解茶多酚在微生物领域的应用及其作用机制提供参考。 展开更多

关键词 茶多酚 抗菌作用 抗病毒作用

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