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GDS-80手持基因枪在橡胶树遗传转化上应用的参数优化与配件改进
被引量：
1
1
作者
范璟璋
华玉伟
+5 位作者
范月婷
辛士超
戴雪梅
黄天带
黄华孙
李季
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2021年第9期2458-2467,共10页
GDS-80手持基因枪是美国Wealtec公司2009年推出的基因传递系统,具有操作简便、高效的特点。已报道的橡胶树基因枪转化研究都是使用台式基因枪。本文首先利用考马斯亮蓝轰击滤纸去除明显不适合的参数,接着以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报...
GDS-80手持基因枪是美国Wealtec公司2009年推出的基因传递系统,具有操作简便、高效的特点。已报道的橡胶树基因枪转化研究都是使用台式基因枪。本文首先利用考马斯亮蓝轰击滤纸去除明显不适合的参数,接着以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,轰击巴西橡胶树体细胞胚以及愈伤组织,用荧光显微镜观察绿色荧光,探究适合橡胶树的轰击参数。而且比较了Image J软件和肉眼统计荧光斑点数及GDS-80手持基因枪与PDS-1000/He台式基因枪的差异。结果表明:对于橡胶树体细胞胚和愈伤组织,仅依靠原厂配件难以获得较好的转化效果。本文设计了直径3 cm(与轰击范围相同),高度2.5 cm,孔径60目的过滤网。同时改进装试验材料的培养皿,用刀片在培养皿的中心割出一个直径3 cm的圆圈,轰击胚状体时,将上述设计的过滤筛网正向卡在圆圈上,胚状体放入过滤网中,轰击时将培养皿用试管架架高,压力就从筛网及底部的空洞分解,微弹完全轰击到试验材料。轰击胚状体最优参数为:轰击压力为60 psi,针状调节阀为3圈,目标间隔盘为6 cm。轰击愈伤时将材料放到普通培养皿中心的轰击范围内,反向盖上过滤筛网。最优轰击参数为:轰击压力为50 psi,针状调节阀为4圈,目标间隔盘为6 cm。本文采用Image J软件进行荧光斑点计数,准确率与肉眼相当,但较肉眼省时。GDS-80手持基因枪与PDS-1000/He台式基因枪转化效率相当,但GDS-80手持基因枪每打一枪比PDS-1000/He台式基因枪快12 min。研究结果为橡胶树遗传转化提供了高效的基因枪转化体系,为转基因研究提供了一个高效的统计荧光数的软件。
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关键词
巴西橡胶树
GDS-80
基因枪
GFP基因
Image
J
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职称材料
橡胶树NIPs通道蛋白的生物功能分析
被引量：
1
2
作者
史翔宇
龙翔宇
+3 位作者
方永军
阳江华
肖小虎
秦云霞
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2021年第8期2126-2133,共8页
根瘤素26-like内在蛋白(nodulin 26-like intrinsic proteins,NIPs)是水通道蛋白(aquaporin protein,AQP)中一个植物特有的亚类,主要定位在质膜或内质网膜上,负责转运不带电荷的类金属溶质如硼、甘油、尿素、硅、砷、H2O2、NH3等,在植...
根瘤素26-like内在蛋白(nodulin 26-like intrinsic proteins,NIPs)是水通道蛋白(aquaporin protein,AQP)中一个植物特有的亚类,主要定位在质膜或内质网膜上,负责转运不带电荷的类金属溶质如硼、甘油、尿素、硅、砷、H2O2、NH3等,在植物营养获取或胁迫应答过程中发挥着重要作用。本研究以拟南芥NIPs序列为参照,利用多种生物信息学软件,对橡胶树7个HbNIPs的基因结构、蛋白理化性质、聚类分析、组织表达及割胶处理的应答进行综合分析。根据分析结果可以初步推断:7个HbNIPs应是有功能的转运蛋白,它们不但具有AQP典型的跨膜结构域(4~6个),保守的NPA基序和关键的ar/R筛选氨基酸,而且从聚类的结果可以推断它们具有转运硼酸、尿素和乳酸的功能。另外,从其启动子调控元件、表达分析和翻译后修饰分析可知,它们的活性及表达具有受发育阶段、多种激素和磷酸化修饰的严谨调控。该初步结果有助于进一步研究橡胶树NIP家族基因的功能及其在橡胶树创新育种中的应用。
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关键词
橡胶树
根瘤素26-like内在蛋白
水通道蛋白
类金属元素
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职称材料
巴西橡胶树CAMTA转录因子全基因组鉴定与表达分析
被引量：
4
3
作者
林显祖
肖小虎
+3 位作者
阳江华
秦云霞
龙翔宇
方永军
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2021年第10期2859-2868,共10页
钙调蛋白结合转录激活因子(Calmodulin-binding transcription activator, CAMTA)是一类存在于真核生物中结构保守的重要钙调素结合蛋白,广泛参与植物的胁迫应答、生长发育及激素信号转导等生物学过程。本文以巴西橡胶树(Hevea brasilie...
钙调蛋白结合转录激活因子(Calmodulin-binding transcription activator, CAMTA)是一类存在于真核生物中结构保守的重要钙调素结合蛋白,广泛参与植物的胁迫应答、生长发育及激素信号转导等生物学过程。本文以巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)为研究对象,从全基因组水平鉴定到8个橡胶树HbCAMTA基因,并对这些基因的理化性质、基因结构、表达模式、启动子区调控元件进行分析。结果显示,该基因家族所有成员均定位于细胞核内,编码蛋白均为亲水性蛋白,分子量在104.34~121.99 kD之间,等电点在5.32~7.83之间;家族基因根据蛋白序列同源性可以分成4个亚组,亚组成员在基因结构、保守基序数目和相对位置等方面具有较高相似性。调控HbCAMTA的miRNA预测分析显示,每个家族成员受到至少3个miRNA调控。表达分析结果显示,HbCAMTA在不同组织的表达有明显的差异,在叶片中随着叶片的发育表达不断上调,在成熟期或变色期达到最高的表达水平;除HbCAMTA2外,乙烯刺激未能显著诱导橡胶树其他CAMTA基因的表达,而低温可以显著诱导HbCAMTA的上调表达。HbCAMTA1是胶乳、叶片、根、树皮、雄花、雌花以及叶片整个发育过程(古铜期、变色期、淡绿期、成熟期)中最高表达的基因家族成员,表明其具有非组织特异性的基础生物学功能。HbCAMTA3在种子中表达水平最高且受低温胁迫诱导显著上调表达,表明其在响应低温胁迫过程中具有重要的作用。HbCAMTA7在大多数组织、乙烯处理、低温胁迫处理以及叶片不同发育时期均是最低表达。本研究初步揭示了橡胶树CAMTA家族成员的理化特征和表达特性,为进一步阐明该基因功能奠定了重要的基础。
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关键词
巴西橡胶树
转录因子
CAMTA
基因表达
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职称材料
题名
GDS-80手持基因枪在橡胶树遗传转化上应用的参数优化与配件改进
被引量：
1
1
作者
范璟璋
华玉伟
范月婷
辛士超
戴雪梅
黄天带
黄华孙
李季
机构
海南大学
热带
作物
学院
农业农村部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/中国热带农业科学院橡胶研究所
华中师范大学附属息县高级中学
出处
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2021年第9期2458-2467,共10页
基金
国家自然科学基金项目(No.31770717,31872708)
中国热带农业科学院基本科研业务费专项资金(No.1630022019013,No.1630022018001)。
文摘
GDS-80手持基因枪是美国Wealtec公司2009年推出的基因传递系统,具有操作简便、高效的特点。已报道的橡胶树基因枪转化研究都是使用台式基因枪。本文首先利用考马斯亮蓝轰击滤纸去除明显不适合的参数,接着以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,轰击巴西橡胶树体细胞胚以及愈伤组织,用荧光显微镜观察绿色荧光,探究适合橡胶树的轰击参数。而且比较了Image J软件和肉眼统计荧光斑点数及GDS-80手持基因枪与PDS-1000/He台式基因枪的差异。结果表明:对于橡胶树体细胞胚和愈伤组织,仅依靠原厂配件难以获得较好的转化效果。本文设计了直径3 cm(与轰击范围相同),高度2.5 cm,孔径60目的过滤网。同时改进装试验材料的培养皿,用刀片在培养皿的中心割出一个直径3 cm的圆圈,轰击胚状体时,将上述设计的过滤筛网正向卡在圆圈上,胚状体放入过滤网中,轰击时将培养皿用试管架架高,压力就从筛网及底部的空洞分解,微弹完全轰击到试验材料。轰击胚状体最优参数为:轰击压力为60 psi,针状调节阀为3圈,目标间隔盘为6 cm。轰击愈伤时将材料放到普通培养皿中心的轰击范围内,反向盖上过滤筛网。最优轰击参数为:轰击压力为50 psi,针状调节阀为4圈,目标间隔盘为6 cm。本文采用Image J软件进行荧光斑点计数,准确率与肉眼相当,但较肉眼省时。GDS-80手持基因枪与PDS-1000/He台式基因枪转化效率相当,但GDS-80手持基因枪每打一枪比PDS-1000/He台式基因枪快12 min。研究结果为橡胶树遗传转化提供了高效的基因枪转化体系,为转基因研究提供了一个高效的统计荧光数的软件。
关键词
巴西橡胶树
GDS-80
基因枪
GFP基因
Image
J
Keywords
Hevea brasiliensis
GDS-80
gene gun
GFP gene
Image J
分类号
S794.1 [农业科学—林木遗传育种]
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职称材料
题名
橡胶树NIPs通道蛋白的生物功能分析
被引量：
1
2
作者
史翔宇
龙翔宇
方永军
阳江华
肖小虎
秦云霞
机构
海南大学园艺
学院
农业农村部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/中国热带农业科学院橡胶研究所
出处
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2021年第8期2126-2133,共8页
基金
国家自然科学基金面上项目(No.31770709
No.31971680)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(No.1630022017001)。
文摘
根瘤素26-like内在蛋白(nodulin 26-like intrinsic proteins,NIPs)是水通道蛋白(aquaporin protein,AQP)中一个植物特有的亚类,主要定位在质膜或内质网膜上,负责转运不带电荷的类金属溶质如硼、甘油、尿素、硅、砷、H2O2、NH3等,在植物营养获取或胁迫应答过程中发挥着重要作用。本研究以拟南芥NIPs序列为参照,利用多种生物信息学软件,对橡胶树7个HbNIPs的基因结构、蛋白理化性质、聚类分析、组织表达及割胶处理的应答进行综合分析。根据分析结果可以初步推断:7个HbNIPs应是有功能的转运蛋白,它们不但具有AQP典型的跨膜结构域(4~6个),保守的NPA基序和关键的ar/R筛选氨基酸,而且从聚类的结果可以推断它们具有转运硼酸、尿素和乳酸的功能。另外,从其启动子调控元件、表达分析和翻译后修饰分析可知,它们的活性及表达具有受发育阶段、多种激素和磷酸化修饰的严谨调控。该初步结果有助于进一步研究橡胶树NIP家族基因的功能及其在橡胶树创新育种中的应用。
关键词
橡胶树
根瘤素26-like内在蛋白
水通道蛋白
类金属元素
Keywords
Hevea brasiliensis
nodulin 26-like intrinsic proteins
aquaporin protein,AQP
metalloid
分类号
S794.1 [农业科学—林木遗传育种]
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职称材料
题名
巴西橡胶树CAMTA转录因子全基因组鉴定与表达分析
被引量：
4
3
作者
林显祖
肖小虎
阳江华
秦云霞
龙翔宇
方永军
机构
海南大学
热带
作物
学院
农业农村部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/中国热带农业科学院橡胶研究所
出处
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2021年第10期2859-2868,共10页
基金
国家自然科学基金项目(No.31770711)
中国热带农业科学院橡胶研究所基本科研业务费项目(No.1630022017002,No.1630022021014)。
文摘
钙调蛋白结合转录激活因子(Calmodulin-binding transcription activator, CAMTA)是一类存在于真核生物中结构保守的重要钙调素结合蛋白,广泛参与植物的胁迫应答、生长发育及激素信号转导等生物学过程。本文以巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)为研究对象,从全基因组水平鉴定到8个橡胶树HbCAMTA基因,并对这些基因的理化性质、基因结构、表达模式、启动子区调控元件进行分析。结果显示,该基因家族所有成员均定位于细胞核内,编码蛋白均为亲水性蛋白,分子量在104.34~121.99 kD之间,等电点在5.32~7.83之间;家族基因根据蛋白序列同源性可以分成4个亚组,亚组成员在基因结构、保守基序数目和相对位置等方面具有较高相似性。调控HbCAMTA的miRNA预测分析显示,每个家族成员受到至少3个miRNA调控。表达分析结果显示,HbCAMTA在不同组织的表达有明显的差异,在叶片中随着叶片的发育表达不断上调,在成熟期或变色期达到最高的表达水平;除HbCAMTA2外,乙烯刺激未能显著诱导橡胶树其他CAMTA基因的表达,而低温可以显著诱导HbCAMTA的上调表达。HbCAMTA1是胶乳、叶片、根、树皮、雄花、雌花以及叶片整个发育过程(古铜期、变色期、淡绿期、成熟期)中最高表达的基因家族成员,表明其具有非组织特异性的基础生物学功能。HbCAMTA3在种子中表达水平最高且受低温胁迫诱导显著上调表达,表明其在响应低温胁迫过程中具有重要的作用。HbCAMTA7在大多数组织、乙烯处理、低温胁迫处理以及叶片不同发育时期均是最低表达。本研究初步揭示了橡胶树CAMTA家族成员的理化特征和表达特性,为进一步阐明该基因功能奠定了重要的基础。
关键词
巴西橡胶树
转录因子
CAMTA
基因表达
Keywords
Hevea brasiliensis
transcription factor
CAMTA
gene expression
分类号
S794.1 [农业科学—林木遗传育种]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
GDS-80手持基因枪在橡胶树遗传转化上应用的参数优化与配件改进
范璟璋
华玉伟
范月婷
辛士超
戴雪梅
黄天带
黄华孙
李季
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2021
1
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职称材料
2
橡胶树NIPs通道蛋白的生物功能分析
史翔宇
龙翔宇
方永军
阳江华
肖小虎
秦云霞
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2021
1
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职称材料
3
巴西橡胶树CAMTA转录因子全基因组鉴定与表达分析
林显祖
肖小虎
阳江华
秦云霞
龙翔宇
方永军
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2021
4
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