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基于CRISPR/LanCas9的水稻基因编辑系统的开发和优化: 1; 作者李欣格王美霞 +4 位作者王晨阳马桂根周常勇王亚南周焕斌《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期233-242,共10页; 【目的】在水稻中建立CRISPR/LanCas9和CRISPR/SLanCas9基因编辑系统,扩展CRISPR/Cas基因编辑工具箱。【方法】将来自动物乳酸杆菌KCTC 3501的LanCas9进行密码子优化,并且进一步通过蛋白融合重组LanCas9和SpCas9的活性结构域形成嵌合体S... 展开更多; 关键词 CRISPR LanCas9 SLanCas9 基因编辑水稻; 在线阅读下载PDF 职称材料

氟吡菌胺及其代谢物在黄瓜中的残留被引量：5: 2; 作者于博驰陈超 +6 位作者王平平满彦利刘新刚董丰收徐军吴小虎郑永权《农业资源与环境学报》 CAS 北大核心 2020年第3期419-423,共5页; 为评价氟吡菌胺及其代谢物在黄瓜上的安全性,建立了同时检测氟吡菌胺及其代谢物2,6-二氯苯甲酰胺的高效液相色谱-串联质谱法。前处理采用以乙腈提取,无水硫酸镁、石墨化碳(GCB)和乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)为分散净化剂的QuEChERS方法,应... 展开更多; 关键词 QUECHERS 高效液相色谱-串联质谱法氟吡菌胺代谢物最终残留; 在线阅读下载PDF 职称材料

水稻CRISPR/Cas12a系统的优化及其介导的腺嘌呤碱基编辑器的建立被引量：3: 3; 作者王敬文严芳 +3 位作者柳浪周雪平王道文周焕斌《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期279-285,共7页; 为了构建高效的CRISPR/Cas12a介导的水稻基因编辑系统,通过测试不同来源的Cas12a蛋白、crRNA长度和构型来探索影响Cas12a编辑活性的因素发现,相对于AsCas12a和LbCas12a在crRNA为23 nt时具有更高的编辑效率,并且crRNA 3'端的U_(4)AU_... 展开更多; 关键词 CRISPR Cas12a 腺嘌呤碱基编辑器水稻; 在线阅读下载PDF 职称材料

利用胞嘧啶碱基编辑技术创制耐草甘膦水稻被引量：3: 4; 作者卢振万李雪琪 +1 位作者黄金光周焕斌《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期63-69,共7页; 草甘膦是目前使用最广泛的广谱灭生性除草剂,培育耐草甘膦基因编辑水稻将有助于改善稻田杂草化学防控效果、减少用药量和简化防控措施。本研究利用胞嘧啶碱基编辑技术对水稻内源草甘膦靶标蛋白基因OsEPSPS的第177位脯氨酸密码子进行碱... 展开更多; 关键词水稻 OsEPSPS 胞嘧啶碱基编辑草甘膦抗性农艺性状; 在线阅读下载PDF 职称材料

基于CRISPR/CasX介导的水稻基因组编辑技术的建立: 5; 作者李雪琪张素杰 +2 位作者于曼黄金光周焕斌《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期40-48,共9页; Cas蛋白作为核酸酶发挥其切割活性需要识别特定的PAM序列,如SpCas9识别NGG PAM位点,LbCas12a识别TTTV PAM。已挖掘到新的能够识别TTCN PAM序列的蛋白—CasX蛋白,扩展了基因组编辑技术的编辑范围。本研究利用CasX的两个衍生型蛋白PlmCasX... 展开更多; 关键词水稻基因组编辑 CRISPR CasX; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于CRISPR/LanCas9的水稻基因编辑系统的开发和优化: 1; 作者李欣格王美霞王晨阳马桂根周常勇王亚南周焕斌; 机构河北农业大学植物保护学院中国农业科学院植物保护所植物病虫害综合治理全国重点实验室西南大学柑橘研究所国家柑橘工程研究中心农业农村部基因编辑创新利用重点实验室(海南) 农业农村部桂林作物有害生物科学观测实验站; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期233-242,共10页; 基金科技创新2030—重大项目(2023ZD0407405-03)。; 文摘【目的】在水稻中建立CRISPR/LanCas9和CRISPR/SLanCas9基因编辑系统,扩展CRISPR/Cas基因编辑工具箱。【方法】将来自动物乳酸杆菌KCTC 3501的LanCas9进行密码子优化,并且进一步通过蛋白融合重组LanCas9和SpCas9的活性结构域形成嵌合体SLanCas9,分别构建CRISPR/LanCas9和CRISPR/SLanCas9编辑工具;以OsWRKY45、OsCPK4、OsCPK6、OsCPK7、OsMPK8、OsGSK3、OsGSK4为靶基因,在NGG PAM或者NAG PAM设计20 nt或者24 nt的sgRNA,通过水稻遗传转化,检测分析其编辑效率。【结果】LanCas9在水稻中可以识别NGG PAM,结合20 nt的sgRNA编辑效率更高,对OsWRKY45基因的编辑效率为25.00%;融合的SLanCas9不仅能够识别NGG PAM,在NAG PAM位点也有一定的编辑效率,在不同PAM位点的编辑效率分别可达100%和39.58%。此外,SLanCas9还具有多重基因编辑能力,在NGG PAM位点的多重基因编辑效率高达74.07%。【结论】开发了具有自主知识产权的新型CRISPR/LanCas9和CRISPR/SLanCas9基因编辑技术。; 关键词 CRISPR LanCas9 SLanCas9 基因编辑水稻; Keywords CRISPR LanCas9 SLanCas9 genome editing rice; 分类号 Q943.2 [生物学—植物学] S511 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名氟吡菌胺及其代谢物在黄瓜中的残留被引量：5: 2; 作者于博驰陈超王平平满彦利刘新刚董丰收徐军吴小虎郑永权; 机构中国农业科学院植物保护研究所农业农村部桂林作物有害生物科学观测实验站; 出处《农业资源与环境学报》 CAS 北大核心 2020年第3期419-423,共5页; 基金中国农业科学院科技创新工程协同创新任务(CAAS-XTCX2016015)。; 文摘为评价氟吡菌胺及其代谢物在黄瓜上的安全性,建立了同时检测氟吡菌胺及其代谢物2,6-二氯苯甲酰胺的高效液相色谱-串联质谱法。前处理采用以乙腈提取,无水硫酸镁、石墨化碳(GCB)和乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)为分散净化剂的QuEChERS方法,应用高效液相色谱-串联质谱仪在多反应监测(MRM)模式下进行检测。结果表明,在0.05~5 mg·kg-1的加标范围内,氟吡菌胺和2,6-二氯苯甲酰胺的平均回收率分别为82%~98%和90%~100%,相对标准偏差(RSD,n=5)分别为1.6%~7.9%和3.2%~9.4%,定量检出限(LOQ)为0.05 mg·kg-1。最终残留试验表明:在氟吡菌胺推荐剂量(735 g·hm-2)下,施药3次,距最后一次施药间隔1、3 d和5 d时采收,氟吡菌胺及2,6-二氯苯甲酰胺在黄瓜上的最高残留量均小于0.05 mg·kg-1,低于我国规定的氟吡菌胺在黄瓜中的最大残留限量0.5 mg·kg-1。该方法前处理过程简单、方便、快速,灵敏度、准确度和精密度均满足残留分析的要求,可用于氟吡菌胺及代谢物2,6-二氯苯甲酰胺在黄瓜中的残留检测。; 关键词 QUECHERS 高效液相色谱-串联质谱法氟吡菌胺代谢物最终残留; Keywords QuEChERS high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry fluopicolide metabolites final residue; 分类号 S481.8 [农业科学—农药学] O657.63 [理学—分析化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名水稻CRISPR/Cas12a系统的优化及其介导的腺嘌呤碱基编辑器的建立被引量：3: 3; 作者王敬文严芳柳浪周雪平王道文周焕斌; 机构中国农业科学院植物保护研究所浙江大学农业与生物技术学院中国科学院遗传与发育生物学研究所河南农业大学农学院农业农村部桂林作物有害生物科学观测实验站; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期279-285,共7页; 基金国家自然科学基金项目(31871948) 中国农业科学院科技创新工程(Y2020PT26)。; 文摘为了构建高效的CRISPR/Cas12a介导的水稻基因编辑系统,通过测试不同来源的Cas12a蛋白、crRNA长度和构型来探索影响Cas12a编辑活性的因素发现,相对于AsCas12a和LbCas12a在crRNA为23 nt时具有更高的编辑效率,并且crRNA 3'端的U_(4)AU_(4)结构并不能增强其在水稻中的编辑活性,同时利用大肠杆菌腺嘌呤脱氨酶变体TadA8e开发了CRISPR/LbCas12a介导的腺嘌呤碱基编辑系统pUbi∶rBE58,成功地将水稻内源基因OsCPK15实现A到G替换(A>G),其效率为33.33%。本研究证明了利用CRISPR/Cas12a可以对水稻基因组进行编辑,丰富了水稻基因编辑工具,拓宽了基因编辑工具箱。; 关键词 CRISPR Cas12a 腺嘌呤碱基编辑器水稻; Keywords CRISPR Cas12a adenine base editor Oryza sativa; 分类号 S511 [农业科学—作物学] Q943.2 [生物学—植物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名利用胞嘧啶碱基编辑技术创制耐草甘膦水稻被引量：3: 4; 作者卢振万李雪琪黄金光周焕斌; 机构中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室农业农村部桂林作物有害生物科学观测实验站青岛农业大学植物医学学院; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期63-69,共7页; 基金海南省崖州湾种子实验室资助项目(B21HJ0215) 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(Y2022PT24)。; 文摘草甘膦是目前使用最广泛的广谱灭生性除草剂,培育耐草甘膦基因编辑水稻将有助于改善稻田杂草化学防控效果、减少用药量和简化防控措施。本研究利用胞嘧啶碱基编辑技术对水稻内源草甘膦靶标蛋白基因OsEPSPS的第177位脯氨酸密码子进行碱基定向替换,通过农杆菌介导的遗传转化获得了靶碱基C定向替换为T的OsEPSPS(P177L)编辑材料,在其自交后代中分离鉴定获得了无外源转基因成分的纯合编辑水稻材料OsEPSPS(P177L)。载药平板试验和喷雾塔喷施试验结果表明OsEPSPS(P177L)纯合编辑水稻材料对草甘膦具有明显的抗性,可耐受四倍的草甘膦田间推荐剂量浓度。进一步调查发现P177L突变并不会对株高和发芽率等经济性状造成干扰。本研究获得的耐草甘膦水稻碱基编辑新种质OsEPSPS(P177L)为水稻的草甘膦抗性改良和稻田的杂草防治开辟了一条新的途径。; 关键词水稻 OsEPSPS 胞嘧啶碱基编辑草甘膦抗性农艺性状; Keywords Oryza sativa L. OsEPSPS cytosine base editing glyphosate-tolerance agronomic traits; 分类号 S511 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于CRISPR/CasX介导的水稻基因组编辑技术的建立: 5; 作者李雪琪张素杰于曼黄金光周焕斌; 机构青岛农业大学植物医学学院中国农业科学院植物保护研究所农业农村部桂林作物有害生物科学观测实验站; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期40-48,共9页; 基金海南省崖州湾种子实验室资助项目(B21HJ0215) 农业农村部基因编辑创新利用重点实验室(海南) 中国农业科学院农业科技创新工程。; 文摘 Cas蛋白作为核酸酶发挥其切割活性需要识别特定的PAM序列,如SpCas9识别NGG PAM位点,LbCas12a识别TTTV PAM。已挖掘到新的能够识别TTCN PAM序列的蛋白—CasX蛋白,扩展了基因组编辑技术的编辑范围。本研究利用CasX的两个衍生型蛋白PlmCasX和DpbCasX,建立基于CRISPR/CasX介导的水稻基因编辑系统。通过PEG介导的水稻原生质体瞬时表达分析其编辑活性发现,PlmCasX和DpbCasX两个蛋白能够对水稻内源基因OsCPK16实现有效编辑。后通过水稻稳定遗传转化进一步验证,在TTCA PAM识别位点,DpbCasX蛋白对水稻内源基因OsCPK21的编辑效率为17.5%,PlmCasX蛋白对水稻内源基因OsCPK21的编辑效率为66.07%;在TTCG PAM识别位点,PlmCasX蛋白对OsCPK4的编辑效率为23.21%,而DpbCasX蛋白不能实现有效的基因编辑。并且基于MIDAS方法对PlmCasX蛋白的优化并不能提高其编辑活性。本研究证明了CRISPR/CasX系统在水稻中具有编辑活性,且其能识别TTCR PAM这一特性,扩大了基因编辑技术在水稻中的应用范围。; 关键词水稻基因组编辑 CRISPR CasX; Keywords Oryza sativa L. genome editing CRISPR CasX; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] S511 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	基于CRISPR/LanCas9的水稻基因编辑系统的开发和优化	李欣格王美霞王晨阳马桂根周常勇王亚南周焕斌	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	氟吡菌胺及其代谢物在黄瓜中的残留	于博驰陈超王平平满彦利刘新刚董丰收徐军吴小虎郑永权	《农业资源与环境学报》 CAS 北大核心	2020	5	在线阅读下载PDF 职称材料
3	水稻CRISPR/Cas12a系统的优化及其介导的腺嘌呤碱基编辑器的建立	王敬文严芳柳浪周雪平王道文周焕斌	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2021	3	在线阅读下载PDF 职称材料
4	利用胞嘧啶碱基编辑技术创制耐草甘膦水稻	卢振万李雪琪黄金光周焕斌	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2023	3	在线阅读下载PDF 职称材料
5	基于CRISPR/CasX介导的水稻基因组编辑技术的建立	李雪琪张素杰于曼黄金光周焕斌	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2023	0	在线阅读下载PDF 职称材料