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基于密码子优化mSaCas9蛋白的重组表达与应用
被引量：
1
1
作者
陈若雪
蒋月雯
+3 位作者
王梦洋
许朝然
梁晶婕
陈天圣
《广东海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期19-26,共8页
【目的】利用金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)来源的SaCas9研究可替代商业Cas9的基因编辑蛋白,为生产适用于鱼类基因编辑的蛋白酶提供参考。【方法】以青鳉(Oryzias latipes)密码子偏好优化SaCas9(命名为mSaCas9),克隆构建重组质...
【目的】利用金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)来源的SaCas9研究可替代商业Cas9的基因编辑蛋白,为生产适用于鱼类基因编辑的蛋白酶提供参考。【方法】以青鳉(Oryzias latipes)密码子偏好优化SaCas9(命名为mSaCas9),克隆构建重组质粒pET28a-mSaCas9,并利用大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)原核表达mSaCas9重组蛋白,对纯化蛋白活性进行体外酶切验证;利用纯化蛋白进行显微注射,验证mSaCas9-RNP递送方式的应用性。【结果】成功构建重组质粒pET28a-mSaCas9,其重组蛋白分子质量为130 ku;在1 L培养基中纯化获得2.5 mg mSaCas9蛋白,纯度为95%;体外酶切结果显示,其终质量浓度为30 ng/μL时即可编辑tyr和oca2基因的PCR产物,表明纯化所得蛋白具备体外编辑活性;向青鳉胚胎中注射mSaCas9蛋白和黑色素合成相关基因oca2-gRNA,胚胎眼部出现色素缺失,表明mSaCas9-RNP可应用于青鳉基因组编辑。【结论】通过体外表达纯化获得了有活性且分子质量更小的Cas9蛋白,并在鱼类中证明了以递送SaCas9核糖核蛋白(SaCas9-RNP)形式,实现个体水平基因编辑的有效性。
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关键词
mSaCa9
基因编辑蛋白
CRISPR/Cas9
原核表达
SaCas9-RNP
显微注射
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职称材料
luxR基因调控嗜水气单胞菌耐药性的分子机制初探
被引量：
3
2
作者
毛磊磊
鄢庆枇
+4 位作者
黄力行
张梅梅
王素云
张萌萌
覃映雪
《渔业科学进展》
CSCD
北大核心
2019年第4期147-155,共9页
LuxR家族蛋白是一类在革兰氏阴性细菌中发挥重要作用的调控蛋白,参与细菌多项重要生理活动。采用RNAi技术构建嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila) luxR05735稳定沉默菌株luxR05735-RNAi,并利用qRT-PCR检测基因沉默效果。结果显示,与野...
LuxR家族蛋白是一类在革兰氏阴性细菌中发挥重要作用的调控蛋白,参与细菌多项重要生理活动。采用RNAi技术构建嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila) luxR05735稳定沉默菌株luxR05735-RNAi,并利用qRT-PCR检测基因沉默效果。结果显示,与野生株相比,沉默株中luxR05735的表达量降低了96.8%。药物敏感性实验表明,与野生株相比,luxR05735-RNAi对庆大霉素、诺氟沙星、卡那霉素、吡哌酸的耐药性显著降低。对野生株与沉默株luxR05735-RNAi的转录组数据进行分析发现,表达差异显著的基因共有1286个,其中,上调基因353个,下调基因933个;显著富集的通路4条,分别是核糖体通路、精氨酸生物合成通路、硫代谢通路、硒化合物代谢通路;在这4条通路中可能与嗜水气单胞菌耐药性相关的重要功能基因包括metE、glnA、rplB、rplX、rpsA、rpsJ等,这些功能基因编码的蛋白主要与细菌的生物成膜及核糖体蛋白合成相关。综合以上研究结果,可以推测嗜水气单胞菌的luxR05735通过调控细菌的生物膜形成相关基因及核糖体蛋白相关基因的表达,从而调控细菌对药物的耐受性。
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关键词
嗜水气单胞菌
LuxR调控蛋白
耐药
转录组
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职称材料
受体相互作用蛋白的功能及在硬骨鱼类中的研究进展
3
作者
李凯晴
李莹
+1 位作者
王艺磊
邹鹏飞
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第5期197-211,共15页
受体相互作用蛋白(RIP)是介导细胞死亡信号和炎症反应的关键调节因子,在调节免疫反应和维持机体稳态方面起着至关重要的作用。RIP在哺乳动物中参与了细胞死亡、炎症反应、先天免疫等不同的生物学过程,而鱼类作为重要的脊椎动物类群,关于...
受体相互作用蛋白(RIP)是介导细胞死亡信号和炎症反应的关键调节因子,在调节免疫反应和维持机体稳态方面起着至关重要的作用。RIP在哺乳动物中参与了细胞死亡、炎症反应、先天免疫等不同的生物学过程,而鱼类作为重要的脊椎动物类群,关于RIP在鱼类中的功能我们仍然所知有限。因此,主要综述了RIP家族成员的分子结构、介导的信号通路和作用机制,以及其在硬骨鱼类中的研究进展,旨为深入解析鱼类乃至哺乳动物的免疫反应和抗病机制奠定基础。
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关键词
受体相互作用蛋白
先天免疫
细胞死亡
炎症反应
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职称材料
题名
基于密码子优化mSaCas9蛋白的重组表达与应用
被引量：
1
1
作者
陈若雪
蒋月雯
王梦洋
许朝然
梁晶婕
陈天圣
机构
海水
养殖
生物育种全国
重点
实验室
(
集美大学
)/鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心/
农业
农村部
东海
海水
健康
养殖
重点
实验室
/
集美大学
水产
学院
华中
农业
大学
水产
学院
出处
《广东海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期19-26,共8页
基金
国家自然科学基金(32273127,31771648)
集美大学科研基金(ZQ2020003)。
文摘
【目的】利用金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)来源的SaCas9研究可替代商业Cas9的基因编辑蛋白,为生产适用于鱼类基因编辑的蛋白酶提供参考。【方法】以青鳉(Oryzias latipes)密码子偏好优化SaCas9(命名为mSaCas9),克隆构建重组质粒pET28a-mSaCas9,并利用大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)原核表达mSaCas9重组蛋白,对纯化蛋白活性进行体外酶切验证;利用纯化蛋白进行显微注射,验证mSaCas9-RNP递送方式的应用性。【结果】成功构建重组质粒pET28a-mSaCas9,其重组蛋白分子质量为130 ku;在1 L培养基中纯化获得2.5 mg mSaCas9蛋白,纯度为95%;体外酶切结果显示,其终质量浓度为30 ng/μL时即可编辑tyr和oca2基因的PCR产物,表明纯化所得蛋白具备体外编辑活性;向青鳉胚胎中注射mSaCas9蛋白和黑色素合成相关基因oca2-gRNA,胚胎眼部出现色素缺失,表明mSaCas9-RNP可应用于青鳉基因组编辑。【结论】通过体外表达纯化获得了有活性且分子质量更小的Cas9蛋白,并在鱼类中证明了以递送SaCas9核糖核蛋白(SaCas9-RNP)形式,实现个体水平基因编辑的有效性。
关键词
mSaCa9
基因编辑蛋白
CRISPR/Cas9
原核表达
SaCas9-RNP
显微注射
Keywords
mSaCa9
gene editing protein
CRISPR/Cas9
prokaryotic expression
SaCas9-RNP
microinjection
分类号
Q812 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
luxR基因调控嗜水气单胞菌耐药性的分子机制初探
被引量：
3
2
作者
毛磊磊
鄢庆枇
黄力行
张梅梅
王素云
张萌萌
覃映雪
机构
农业农村部东海海水健康养殖重点实验室集美大学水产学院
出处
《渔业科学进展》
CSCD
北大核心
2019年第4期147-155,共9页
基金
国家自然科学基金(31502194)
福建省自然科学基金(2017J01451)共同资助~~
文摘
LuxR家族蛋白是一类在革兰氏阴性细菌中发挥重要作用的调控蛋白,参与细菌多项重要生理活动。采用RNAi技术构建嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila) luxR05735稳定沉默菌株luxR05735-RNAi,并利用qRT-PCR检测基因沉默效果。结果显示,与野生株相比,沉默株中luxR05735的表达量降低了96.8%。药物敏感性实验表明,与野生株相比,luxR05735-RNAi对庆大霉素、诺氟沙星、卡那霉素、吡哌酸的耐药性显著降低。对野生株与沉默株luxR05735-RNAi的转录组数据进行分析发现,表达差异显著的基因共有1286个,其中,上调基因353个,下调基因933个;显著富集的通路4条,分别是核糖体通路、精氨酸生物合成通路、硫代谢通路、硒化合物代谢通路;在这4条通路中可能与嗜水气单胞菌耐药性相关的重要功能基因包括metE、glnA、rplB、rplX、rpsA、rpsJ等,这些功能基因编码的蛋白主要与细菌的生物成膜及核糖体蛋白合成相关。综合以上研究结果,可以推测嗜水气单胞菌的luxR05735通过调控细菌的生物膜形成相关基因及核糖体蛋白相关基因的表达,从而调控细菌对药物的耐受性。
关键词
嗜水气单胞菌
LuxR调控蛋白
耐药
转录组
Keywords
Aeromonas hydrophila
LuxR regulatory protein
Drug resistance
Transcriptome
分类号
S917.1 [农业科学—水产科学]
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职称材料
题名
受体相互作用蛋白的功能及在硬骨鱼类中的研究进展
3
作者
李凯晴
李莹
王艺磊
邹鹏飞
机构
厦门
大学
环境与生态
学院
河口生态安全与环境
健康
福建省高校
重点
实验室
厦门
大学
嘉庚
学院
农业农村部东海海水健康养殖重点实验室集美大学水产学院
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第5期197-211,共15页
基金
国家自然科学基金面上项目(31772878)
福建省自然科学基金杰出青年科学基金项目(2018J06008)。
文摘
受体相互作用蛋白(RIP)是介导细胞死亡信号和炎症反应的关键调节因子,在调节免疫反应和维持机体稳态方面起着至关重要的作用。RIP在哺乳动物中参与了细胞死亡、炎症反应、先天免疫等不同的生物学过程,而鱼类作为重要的脊椎动物类群,关于RIP在鱼类中的功能我们仍然所知有限。因此,主要综述了RIP家族成员的分子结构、介导的信号通路和作用机制,以及其在硬骨鱼类中的研究进展,旨为深入解析鱼类乃至哺乳动物的免疫反应和抗病机制奠定基础。
关键词
受体相互作用蛋白
先天免疫
细胞死亡
炎症反应
Keywords
receptor-interacting protein
innate immunity
cell death
inflammatory response
分类号
S917.4 [农业科学—水产科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于密码子优化mSaCas9蛋白的重组表达与应用
陈若雪
蒋月雯
王梦洋
许朝然
梁晶婕
陈天圣
《广东海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
luxR基因调控嗜水气单胞菌耐药性的分子机制初探
毛磊磊
鄢庆枇
黄力行
张梅梅
王素云
张萌萌
覃映雪
《渔业科学进展》
CSCD
北大核心
2019
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
受体相互作用蛋白的功能及在硬骨鱼类中的研究进展
李凯晴
李莹
王艺磊
邹鹏飞
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
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职称材料
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