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科研实验室良好规范在动物实验室管理中的应用 被引量：1
1
作者 常影 王燕 +2 位作者 孙成彪 徐梦 许娜 《动物医学进展》 北大核心 2020年第9期119-122,共4页
实验动物科技发展水平与生物医药行业、生物安全、疾病防治等领域息息相关,动物实验室发挥着不可替代的作用,然而目前我国在动物实验室的管理上存在动物质量管理制度不健全、福利伦理制度执行不理想、从业人员素质不一等问题,不利于科... 实验动物科技发展水平与生物医药行业、生物安全、疾病防治等领域息息相关,动物实验室发挥着不可替代的作用,然而目前我国在动物实验室的管理上存在动物质量管理制度不健全、福利伦理制度执行不理想、从业人员素质不一等问题,不利于科研活动的进行。科研实验室良好规范(GRLP)作为实验室规范体系,在档案管理、质量监督、标准化程序、安全管控等科研活动中做了相关要求,有助于提升科研实验室的管理效率,因而对动物实验室高效运转也具有指导性意义。论文引入GRLP理念,旨在依据其原则,为改进动物实验室的管理模式,推进动物实验室认证提供依据。 展开更多
关键词 科研实验室良好规范 动物实验室 实验动物 管理模式
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云南省南部地区蚊携带乙型脑炎病毒的检测和遗传进化分析
2
作者 肖朋朋 李成辉 +5 位作者 张金勇 韩继成 郭晓芳 周红宁 鲁会军 金宁一 《中国动物检疫》 CAS 2018年第9期85-89,共5页
为探索云南省南部地区乙型脑炎病毒(JEV)的流行及基因变异情况,将2016年8—10月在南部4个县级地区采集的6 952只蚊,根据采集地和蚊种合并为69份样品,采用RT-PCR检测JEV并进行基因分析。结果显示:检出7份JEV阳性样品,平均阳性率为10.14%... 为探索云南省南部地区乙型脑炎病毒(JEV)的流行及基因变异情况,将2016年8—10月在南部4个县级地区采集的6 952只蚊,根据采集地和蚊种合并为69份样品,采用RT-PCR检测JEV并进行基因分析。结果显示:检出7份JEV阳性样品,平均阳性率为10.14%,其中思茅区和宁洱县蚊阳性率最高,均为25.00%;扩增的5条完整JEV E基因序列与2009年分离的JEV老挝株亲缘关系最近,同源性为97.3%~98.7%,均属于基因I型;5条E基因序列(YN2016-1/2/3/4/5)在1 323位核苷酸位点首次出现C碱基替换,且YN2016-1在第340位氨基酸位点首次出现丙氨酸替换。结果表明:云南省南部地区蚊JEV的携带率较高,尤其是思茅区和宁洱县;蚊携带的JEV出现了核苷酸和氨基酸变异,应注意对其加强监测。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 蚊 变异分析 进化分析 监测 云南
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TGEV-RBD基因在昆虫杆状病毒中的表达及鉴定 被引量：4
3
作者 伊立超 李乐天 +6 位作者 郝嘉翼 时小双 张爽 徐鹏 任世斌 高旭 李昌 《动物医学进展》 北大核心 2021年第9期65-70,共6页
旨在获得具有天然结构且有反应原性的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)受体结合域(RBD)蛋白。受体结合域是决定病毒宿主和嗜性的关键因素。根据猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白(S)序列(GenBank:ABC72414.1),设计、优化并合成其受体结合域(RBD)部分... 旨在获得具有天然结构且有反应原性的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)受体结合域(RBD)蛋白。受体结合域是决定病毒宿主和嗜性的关键因素。根据猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白(S)序列(GenBank:ABC72414.1),设计、优化并合成其受体结合域(RBD)部分,亚克隆至杆状病毒pFastBacTMDual上,获得重组质粒,命名为pFBD-TGR。将该质粒转化DH10Bac感受态细胞中,筛选较大的白色菌落,获得重组杆状质粒Bacmid-TGR,转染至sf9细胞中进行拯救病毒,转染后5 d~7 d,收上清,传至第3代,应用间接免疫荧光法(IFA)和Western blot检测sf9细胞上清,进行目的蛋白表达鉴定。结果显示,重组穿梭质粒Bacmid-TGR构建成功,Western blot结果证明,杆状病毒表达了TGEV-RBD蛋白且能与Strep tag抗体和抗猪传染性胃肠炎病毒多克隆抗体发生特异性反应,间接免疫荧光结果证明,成功地表达了TGEV-RBD蛋白,为进一步开展猪传染性胃肠炎病毒抗体研究以及新型疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 杆状病毒 受体结合域 蛋白表达
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基于适配体拉曼光谱技术快速检测肠炎沙门氏菌方法 被引量：3
4
作者 邵琳 王玥 +6 位作者 曲晗 郝良玉 王洪利 田栢会 李志萍 李乾学 沈明浩 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第17期225-230,285,共7页
目的:应用SELEX技术筛选高亲和力、高特异性适配体,利用该适配体结合拉曼光谱技术建立肠炎沙门氏菌快速检测方法。方法:采用全细菌指数富集的配体系统进化技术(whole-bacteria systematic evolution of ligands by exponential enrichme... 目的:应用SELEX技术筛选高亲和力、高特异性适配体,利用该适配体结合拉曼光谱技术建立肠炎沙门氏菌快速检测方法。方法:采用全细菌指数富集的配体系统进化技术(whole-bacteria systematic evolution of ligands by exponential enrichment,whole-bacteria-SELEX)筛选肠炎沙门氏菌特异性核酸适配体,并采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)与SERS技术对筛选出的适配体亲和力及特异性进行评价,建立肠炎沙门氏菌检测方法。结果:本研究通过对肠炎沙门氏菌进行十五轮SELEX筛选,并通过ELISA对其亲和力进行评价,筛选出Aptamer 4、Aptamer 10、Aptamer 12三条候选适配体,并通过SERS技术确认Aptamer 4为亲和力最佳适配体;将Aptamer 4与肠炎沙门氏菌、肺炎克雷伯氏菌等5种混合菌结合,结果表明,通过SERS技术可特异的检测出肠炎沙门氏菌,且该方法重复性较好,其最低检测限的细菌浓度为102 CFU/mL。且在猪肉样品的检测中,肠炎沙门氏菌的回收率为93.37%~100.18%。结论:应用SELEX方法成功筛选出与肠炎沙门氏菌高特异性、高亲和力适配体,并建立基于表面增强拉曼光谱技术快速检测肠炎沙门氏菌的方法,该方法特异性强、灵敏度高、成本低、快速简便,可应用于食品加工过程中肠炎沙门氏菌的快速检测。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 快速检测 适配体 表面增强拉曼光谱(SERS) 酶联免疫吸附
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非洲猪瘟病毒pS273R蛋白水解酶单克隆抗体制备 被引量：1
5
作者 张萌 刘英楠 +7 位作者 谢振华 敖清莹 吕璐 于婉琪 金文杰 秦爱建 扈荣良 陈鸿军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期839-844,共6页
本研究旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)S273R蛋白的特异性单克隆抗体。本研究以原核表达的非洲猪瘟病毒重组S273R蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞。结果显示:基于纯化的S273R蛋白建立的间接ELISA方法对杂... 本研究旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)S273R蛋白的特异性单克隆抗体。本研究以原核表达的非洲猪瘟病毒重组S273R蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞。结果显示:基于纯化的S273R蛋白建立的间接ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选和亚克隆,获得了4株可稳定分泌抗ASFV S273R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过免疫印迹(Western blot)和免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)测定了其免疫特性。4株单克隆抗体亚类均为IgG1型,轻链均为κ链。本研究获得的非洲猪瘟病毒S373R蛋白单克隆抗体可为进一步研究ASFV pS273R的生物学功能及基因缺失毒株的鉴别诊断和疫苗开发提供技术储备。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 S273R蛋白 原核表达 单克隆抗体
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黄体酮纳米胶束构建及体外释放行为 被引量：1
6
作者 齐延新 黄宇彬 金宁一 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1340-1342,共3页
为了制备可缓释释放的黄体酮纳米胶束新剂型,构建了两嵌段聚合物载体聚乙二醇-聚丙烯基缩水甘油醚(PEG-PAGE),组装成胶束,对黄体酮担载,考察不同条件下的载药量和包封率,筛选出最佳比例,并进行体外释放研究。结果表明,该胶束能够担载黄... 为了制备可缓释释放的黄体酮纳米胶束新剂型,构建了两嵌段聚合物载体聚乙二醇-聚丙烯基缩水甘油醚(PEG-PAGE),组装成胶束,对黄体酮担载,考察不同条件下的载药量和包封率,筛选出最佳比例,并进行体外释放研究。结果表明,该胶束能够担载黄体酮,载药量为4.26%,包封率为21.30%,48 h内累计释放达61.31%,能够有效地延缓黄体酮的释放,为黄体酮纳米剂型的开发提供了实验和技术参考。 展开更多
关键词 聚合物 聚乙二醇-聚丙烯基缩水甘油醚 黄体酮 胶束
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适配体结合量子点技术同时检测金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌O157:H7方法 被引量：3
7
作者 王玥 邵琳 +4 位作者 李乾学 易乐 曲晗 王洪利 沈明浩 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第8期305-312,共8页
目的:基于适配体结合量子点技术,建立一种同时针对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌O157:H7两种食源性致病菌快速高效、灵敏的检测方法。方法:利用表面增强拉曼光谱技术筛选出与目标菌结合特异性较好的2种适配体;利用免疫磁珠与适配体偶联... 目的:基于适配体结合量子点技术,建立一种同时针对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌O157:H7两种食源性致病菌快速高效、灵敏的检测方法。方法:利用表面增强拉曼光谱技术筛选出与目标菌结合特异性较好的2种适配体;利用免疫磁珠与适配体偶联技术特异性捕获2种目标菌;选取不同发光原理的2种量子点,并结合量子点荧光标记技术构建“磁珠+目标菌+量子点”的“三明治结构”,通过对结构条件优化确定2种目标菌的检出限,并应用到市售无菌牛乳实际样品中进行加标回收率实验。结果:本研究证明所选取的2条适配体与目标菌的结合具有高特异性,可实现对2种目标菌的同时检测。对“三明治结构”优化结果表明:2种目标菌的最佳捕获条件为免疫捕获时间45 min、磁分离时间2 min;适配体最适浓度为400 nmol/L;金黄色葡萄球菌检出限为101 CFU/mL,线性方程为Y=28.51X+126.67(R^(2)=0.973);大肠埃希氏菌O157:H7检出限均为102 CFU/mL,线性方程为Y=92.86X-64.67(R^(2)=0.987),其中,Y为荧光强度,X为细菌菌落数的对数值,拟合度良好。且在牛乳样品中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌O157:H7回收率分别为94.6%~102.8%和93.4%~100.4%。结论:本研究所建立的方法能够实现同时对2种食源性致病菌快速、高效检测,该方法易操作且灵敏度高,在食品加工生产安全检测方面具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 适配体 量子点 三明治结构 荧光检测技术
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健康断奶仔猪携带猪繁殖与呼吸综合征病毒的流行病学调查 被引量：2
8
作者 饶继红 何彪 +3 位作者 涂长春 张家宁 葛淑敏 龚文杰 《安徽农业科学》 CAS 2019年第11期111-114,118,共5页
为进一步了解我国规模化猪场健康断奶仔猪携带猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的情况,对2017年采自我国25个省(市)38个规模化猪场的断奶仔猪咽拭子、肛拭子、血清共4059份样品进行了高通量测序,然后对检测到的病毒进行RT-PCR或PCR验证。... 为进一步了解我国规模化猪场健康断奶仔猪携带猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的情况,对2017年采自我国25个省(市)38个规模化猪场的断奶仔猪咽拭子、肛拭子、血清共4059份样品进行了高通量测序,然后对检测到的病毒进行RT-PCR或PCR验证。基于高通量测序的宏基因组学结果显示,健康断奶仔猪的咽拭子、肛拭子、血清中共出现1706条动脉炎病毒科的病毒基因Reads,其中包括PRRSV。通过RT-PCR扩增从咽拭子和肛拭子中共检测出46个PRRSV样品,样品阳性率为1.1%,猪场阳性率为39.5%。同时,试验成功扩增出7个毒株的ORF5基因,并进行了序列测定。基于ORF5基因核苷酸序列的系统进化分析发现,该试验获得的PRRSV流行毒株为高致病性毒株,属于TypeⅡ中的Subgroup4。对健康断奶仔猪携带PRRSV的研究结果可为猪繁殖与呼吸综合征的防控提供科学数据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 断奶仔猪 ORF5 遗传进化分析
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牛副流感病毒3型感染MDBK细胞后影响天然免疫基因表达的筛选与验证
9
作者 赵贵民 吕丽霞 +3 位作者 王洪梅 乔军 夏咸柱 何洪彬 《动物医学进展》 北大核心 2019年第2期9-16,共8页
为筛选与验证牛副流感病毒3型(BPIV3)感染MDBK细胞后天然免疫相关基因的差异表达变化,通过细胞病变观察、Western blot验证病毒HN蛋白表达,以及病毒增殖复制动力学曲线,确定病毒复制情况。利用转录组测序技术,对1MOI基因C型SD2014BPIV3... 为筛选与验证牛副流感病毒3型(BPIV3)感染MDBK细胞后天然免疫相关基因的差异表达变化,通过细胞病变观察、Western blot验证病毒HN蛋白表达,以及病毒增殖复制动力学曲线,确定病毒复制情况。利用转录组测序技术,对1MOI基因C型SD2014BPIV3毒株感染MDBK细胞的12h对照组与感染组的差异表达基因进行筛选,最后收集BPIV3感染MDBK不同时间点细胞样本,应用RT-qPCR在转录水平验证了天然免疫相关显著差异基因的表达变化情况。结果表明,BPIV3毒株在MDBK细胞上有较强的复制能力,从病毒感染12h的转录组数据中获得了1 401个显著差异基因,经过筛选获得了9个与天然免疫相关的基因,最后在转录水平验证了MDA5、IRF7、STAT1、ISG65、TRIM25等9个与天然免疫相关基因的表达变化,并验证了其上、下游通路或同一家族基因的表达变化。结果表明,筛选与验证的BPIV3感染MDBK细胞差异表达天然免疫相关基因,为宿主细胞影响病毒复制的分子机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 牛副流感病毒3型 牛肾上皮细胞 转录组学 天然免疫 筛选
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基于杂化纳米花、试纸条的大肠杆菌检测方法的建立及评价 被引量：1
10
作者 马丽 卜胜君 +2 位作者 张文广 万家余 陈志宝 《黑龙江八一农垦大学学报》 2022年第3期90-96,122,共8页
建立一种的对病原菌大肠杆菌O157的比色生物传感器检测方法。特异性识别大肠杆菌O157抗体的磁珠作为识别及富集元件,功能性葡萄糖氧化酶纳米花作为信号输出方式,形成“抗体-靶标-纳米花”三明治夹心结构,通过可视化过氧化氢试纸条进行... 建立一种的对病原菌大肠杆菌O157的比色生物传感器检测方法。特异性识别大肠杆菌O157抗体的磁珠作为识别及富集元件,功能性葡萄糖氧化酶纳米花作为信号输出方式,形成“抗体-靶标-纳米花”三明治夹心结构,通过可视化过氧化氢试纸条进行定量定性分析。在10~106 CFU·mL^(-1)检测大肠杆菌O157具有良好的线性关系,最低检测限(LOD)为10 CFU·mL^(-1),实际样品回收率可达93%~102%,符合国家食品理化检测的检测方法确认的技术要求中的加标检测回收率范围,且具有良好特异性。成功建立了一种定性定量的可视化比色传感器用于病原菌大肠杆菌O157的检测,灵敏度可达10 CFU·mL^(-1),与传统病原菌的检测方法相比,具有可视化、操作简便、灵敏性高的优点。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157 纳米花 传感器 快速检测 可视化
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