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hsa-miR-654-5p通过抑制骨形态发生蛋白2调控人骨髓基质干细胞成骨分化
被引量：
11
1
作者
魏均强
陈华
+6 位作者
郑晓飞
张伯勋
王岩
唐佩福
佘飞
宋青
黎檀实
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期291-295,共5页
目的明确萎缩性骨不连组织水平表达上调的hsa-miR-654-5p在人骨髓基质干细胞(hBMSCs)中对其预测靶基因骨形态发生蛋白2(BMP2)mRNA和蛋白的抑制作用,探索其在成骨分化过程中的生物学调控功能。方法分离培养hBMSCs,将第4代hBMSCs培养16 h...
目的明确萎缩性骨不连组织水平表达上调的hsa-miR-654-5p在人骨髓基质干细胞(hBMSCs)中对其预测靶基因骨形态发生蛋白2(BMP2)mRNA和蛋白的抑制作用,探索其在成骨分化过程中的生物学调控功能。方法分离培养hBMSCs,将第4代hBMSCs培养16 h后分别按相应体系转染细胞,再培养48 h后取六孔板内细胞提取总RNA和总蛋白,进行实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting,取24孔板内细胞进行双荧光素酶报告基因检测。结果当hBMSCs中hsa-miR-654-5p过表达时,BMP2的mRNA和蛋白表达水平均发生明显下调;双荧光素酶报告基因检测提示,BMP2的预测靶位点直接受hsa-miR-654-5p的抑制调控,该靶位点被突变后hsa-miR-654-5p对BMP2的抑制作用消失。结论 hsa-miR-654-5p可通过作用于BMP2的特定靶位点而直接抑制BMP2的mRNA和蛋白表达。hsa-miR-654-5p的变化在成骨分化调控过程中具有重要作用。
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关键词
微小核糖核酸
骨形态发生蛋白2
成骨分化
实时定量PCR
蛋白印迹
荧光素酶报告基因
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职称材料
Tpr-Met转化的Ba/F3稳定株的构建
被引量：
1
2
作者
术凌飞
李围
+3 位作者
詹轶群
许望翔
杨晓明
李长燕
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第11期1151-1153,1157,共4页
目的:建立一种可用于高通量筛选c-Met抑制剂的细胞模型。方法:采用电转染将Tpr-Met表达载体导入Ba/F3细胞中并筛选出能够稳定表达Tpr-Met的细胞株。而后对这种稳定株的白细胞介素3(IL-3)非依赖性增殖、Tpr-Met的表达及下游通路的活化、c...
目的:建立一种可用于高通量筛选c-Met抑制剂的细胞模型。方法:采用电转染将Tpr-Met表达载体导入Ba/F3细胞中并筛选出能够稳定表达Tpr-Met的细胞株。而后对这种稳定株的白细胞介素3(IL-3)非依赖性增殖、Tpr-Met的表达及下游通路的活化、c-Met抑制剂SU11274对细胞增殖和信号通路的抑制作用进行全面评价。通过酶标仪检测细胞MTS吸光度值判断细胞的增殖水平,通过Western blot法检测Tpr-Met的表达及下游通路的活化、c-Met抑制剂SU11274对细胞信号通路的抑制作用。结果:获得稳定表达Tpr-Met的Ba/F3细胞株,该细胞株呈现IL-3非依赖性生长;能够表达持续活化的Tpr-Met;下游信号通路中关键分子Erk的磷酸化水平显著提升;c-Met特异性抑制剂SU11274通过抑制Tpr-Met磷酸化抑制下游信号通路的活化并抑制稳定株细胞增殖。结论:成功构建了Tpr-Met转化的Ba/F3细胞株。
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关键词
Tpr-Met
BA
F3细胞
IL-3非依赖性生长
信号通路
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职称材料
题名
hsa-miR-654-5p通过抑制骨形态发生蛋白2调控人骨髓基质干细胞成骨分化
被引量：
11
1
作者
魏均强
陈华
郑晓飞
张伯勋
王岩
唐佩福
佘飞
宋青
黎檀实
机构
解放军总医院骨科专科医院
解放军总医院急救部
军事医学科学院辐射医学研究所
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期291-295,共5页
基金
国家自然科学青年基金(81000803)
北京市自然科学基金(7083114)~~
文摘
目的明确萎缩性骨不连组织水平表达上调的hsa-miR-654-5p在人骨髓基质干细胞(hBMSCs)中对其预测靶基因骨形态发生蛋白2(BMP2)mRNA和蛋白的抑制作用,探索其在成骨分化过程中的生物学调控功能。方法分离培养hBMSCs,将第4代hBMSCs培养16 h后分别按相应体系转染细胞,再培养48 h后取六孔板内细胞提取总RNA和总蛋白,进行实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting,取24孔板内细胞进行双荧光素酶报告基因检测。结果当hBMSCs中hsa-miR-654-5p过表达时,BMP2的mRNA和蛋白表达水平均发生明显下调;双荧光素酶报告基因检测提示,BMP2的预测靶位点直接受hsa-miR-654-5p的抑制调控,该靶位点被突变后hsa-miR-654-5p对BMP2的抑制作用消失。结论 hsa-miR-654-5p可通过作用于BMP2的特定靶位点而直接抑制BMP2的mRNA和蛋白表达。hsa-miR-654-5p的变化在成骨分化调控过程中具有重要作用。
关键词
微小核糖核酸
骨形态发生蛋白2
成骨分化
实时定量PCR
蛋白印迹
荧光素酶报告基因
Keywords
miRNA
bone morphogenetic protein 2
osteogenic differentiation
human bone marrow mesenchymal stem cells
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
Tpr-Met转化的Ba/F3稳定株的构建
被引量：
1
2
作者
术凌飞
李围
詹轶群
许望翔
杨晓明
李长燕
机构
安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室
军事医学科学院
放射
辐射
医学
研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第11期1151-1153,1157,共4页
基金
国家高技术研究发展计划(863)资助(2012AA020206)
文摘
目的:建立一种可用于高通量筛选c-Met抑制剂的细胞模型。方法:采用电转染将Tpr-Met表达载体导入Ba/F3细胞中并筛选出能够稳定表达Tpr-Met的细胞株。而后对这种稳定株的白细胞介素3(IL-3)非依赖性增殖、Tpr-Met的表达及下游通路的活化、c-Met抑制剂SU11274对细胞增殖和信号通路的抑制作用进行全面评价。通过酶标仪检测细胞MTS吸光度值判断细胞的增殖水平,通过Western blot法检测Tpr-Met的表达及下游通路的活化、c-Met抑制剂SU11274对细胞信号通路的抑制作用。结果:获得稳定表达Tpr-Met的Ba/F3细胞株,该细胞株呈现IL-3非依赖性生长;能够表达持续活化的Tpr-Met;下游信号通路中关键分子Erk的磷酸化水平显著提升;c-Met特异性抑制剂SU11274通过抑制Tpr-Met磷酸化抑制下游信号通路的活化并抑制稳定株细胞增殖。结论:成功构建了Tpr-Met转化的Ba/F3细胞株。
关键词
Tpr-Met
BA
F3细胞
IL-3非依赖性生长
信号通路
Keywords
Tpr-Met
Ba/F3 cell
IL-3 independentgrowth
signal pathway
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
hsa-miR-654-5p通过抑制骨形态发生蛋白2调控人骨髓基质干细胞成骨分化
魏均强
陈华
郑晓飞
张伯勋
王岩
唐佩福
佘飞
宋青
黎檀实
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
11
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
Tpr-Met转化的Ba/F3稳定株的构建
术凌飞
李围
詹轶群
许望翔
杨晓明
李长燕
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
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