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人源抗破伤风毒素单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达
被引量：
3
1
作者
王晗
于蕊
+7 位作者
张晓鹏
任军
谢娜
樊红艳
张金龙
房婷
于长明
陈薇
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期60-64,共5页
目的构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并进行原核表达和生物学特性鉴定。方法采用PCR定点突变的方法,获得二硫键稳定的抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)单链抗体基因(27G-scdsFv)。连接pET22b(+)载体,转化大肠...
目的构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并进行原核表达和生物学特性鉴定。方法采用PCR定点突变的方法,获得二硫键稳定的抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)单链抗体基因(27G-scdsFv)。连接pET22b(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot法鉴定表达产物。ELISA检测27G-scdsFv体外抗原特异结合活性和抗体相对稳定性;非竞争酶免法检测抗体亲和力。采用免疫荧光法检测27G-scdsFv体外中和活性。结果测序结果显示获得正确的27G-scdsFv基因。原核表达scdsFv以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的50%。复性后的27G-scdsFv保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,亲和力较其scFv形式略有提升,KD=0.93×10-7mol/L,1 L培养物可获得5 mg scdsFv蛋白。27G-scdsFv的稳定性较scFv形式明显增强。27G-scdsFv在体外可以明显抑制TeNT-Hc与神经元细胞的结合。结论成功构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并获得有活性的目的蛋白,为27G-scdsFv的进一步生物学功能研究奠定基础。
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关键词
单链二硫键稳定抗体
亲和力
原核表达
破伤风痉挛毒素C端
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职称材料
抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体的制备及活性分析
被引量：
1
2
作者
张金龙
任军
+6 位作者
于婷
宋小红
付广成
刘树玲
张章
李冰
李建民
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期1299-1302,1306,共5页
目的在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体,并对其活性进行分析。方法将具有保护活性的鼠源单克隆抗体(mAb)的轻、重链可变区基因,分别与人κ型轻链恒定区、IgG1重链恒定区基因融合后构建轻重链嵌合抗体基因...
目的在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体,并对其活性进行分析。方法将具有保护活性的鼠源单克隆抗体(mAb)的轻、重链可变区基因,分别与人κ型轻链恒定区、IgG1重链恒定区基因融合后构建轻重链嵌合抗体基因,克隆到T载体上进行序列测定确证。然后分别构建含有嵌合轻、重链基因的表达载体pcDNA3.1-L和pcDNA3.1-H。构建完成的表达载体电转化CHO-S细胞,G418筛选获得稳定表达细胞株。扩大培养、收集上清用MabSelect Sure亲和层析填料纯化。纯化后的抗体进行SDS-PAGE、ELISA、Western blot分析以及小鼠体内保护活性评价。结果 PCR鉴定及测序结果表明pcDNA3.1-H和pcDNA3.1-L构建完成,序列正确;Dot blot结果表明获得表达量高的稳转株细胞;SDSPAGE及Western blot法证明抗体纯化获得成功,ELISA结果表明该抗体具有结合与F1抗原的活性;小鼠体内攻击实验表明其保护活性与鼠mAb大致相同。结论成功在CHO-S细胞中表达了具有中和活性的抗F1人-鼠嵌合抗体。
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关键词
鼠疫
F1
嵌合抗体
中国仓鼠卵巢细胞
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职称材料
新型疫苗研发与下一代技术
被引量：
6
3
作者
杨益隆
徐俊杰
《生物产业技术》
2017年第2期43-50,共8页
疫苗接种是人类历史上最为成功的医疗干预措施。近年来,疫苗研发出现了突破性进展,国内外上市了多种针对重要传染病的新型疫苗。尽管如此,疫苗研发仍面临很大挑战,传统的疫苗设计存在诸多技术缺陷,目前仍没有疫苗能够用于防控诸如艾滋...
疫苗接种是人类历史上最为成功的医疗干预措施。近年来,疫苗研发出现了突破性进展,国内外上市了多种针对重要传染病的新型疫苗。尽管如此,疫苗研发仍面临很大挑战,传统的疫苗设计存在诸多技术缺陷,目前仍没有疫苗能够用于防控诸如艾滋病、疟疾、寨卡病毒等对人类健康具有重大威胁的传染病。随着生物信息学和结构生物学等技术的发展,疫苗设计领域出现了保护组学分析、结构疫苗学和合成生物学等新的研究方向,这些新的技术平台为今后新型疫苗的设计提供了全新的研究思路。
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关键词
新型疫苗
疫苗设计
保护组学分析
结构疫苗学
合成生物学
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职称材料
题名
人源抗破伤风毒素单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达
被引量：
3
1
作者
王晗
于蕊
张晓鹏
任军
谢娜
樊红艳
张金龙
房婷
于长明
陈薇
机构
军事医学科学院生物工程研究所疫苗与抗体工程研究室
解放军第
解放军第
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期60-64,共5页
基金
国家杰出青年科学基金(81025018)
国家自然科学基金青年基金(81102360
81172980)
文摘
目的构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并进行原核表达和生物学特性鉴定。方法采用PCR定点突变的方法,获得二硫键稳定的抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)单链抗体基因(27G-scdsFv)。连接pET22b(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot法鉴定表达产物。ELISA检测27G-scdsFv体外抗原特异结合活性和抗体相对稳定性;非竞争酶免法检测抗体亲和力。采用免疫荧光法检测27G-scdsFv体外中和活性。结果测序结果显示获得正确的27G-scdsFv基因。原核表达scdsFv以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的50%。复性后的27G-scdsFv保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,亲和力较其scFv形式略有提升,KD=0.93×10-7mol/L,1 L培养物可获得5 mg scdsFv蛋白。27G-scdsFv的稳定性较scFv形式明显增强。27G-scdsFv在体外可以明显抑制TeNT-Hc与神经元细胞的结合。结论成功构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并获得有活性的目的蛋白,为27G-scdsFv的进一步生物学功能研究奠定基础。
关键词
单链二硫键稳定抗体
亲和力
原核表达
破伤风痉挛毒素C端
Keywords
disulfide-stabilized single-chain Fv antibody
affinity
prokaryotic expression
tetanus toxin Hc fragment
分类号
R392.12 [医药卫生—免疫学]
R965.3 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体的制备及活性分析
被引量：
1
2
作者
张金龙
任军
于婷
宋小红
付广成
刘树玲
张章
李冰
李建民
机构
解放军
军事医学科学院生物工程研究所疫苗与抗体工程研究室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期1299-1302,1306,共5页
基金
国家自然科学基金(81000710)
"重大新药创制"科技重大专项(2013ZX09304103)
文摘
目的在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体,并对其活性进行分析。方法将具有保护活性的鼠源单克隆抗体(mAb)的轻、重链可变区基因,分别与人κ型轻链恒定区、IgG1重链恒定区基因融合后构建轻重链嵌合抗体基因,克隆到T载体上进行序列测定确证。然后分别构建含有嵌合轻、重链基因的表达载体pcDNA3.1-L和pcDNA3.1-H。构建完成的表达载体电转化CHO-S细胞,G418筛选获得稳定表达细胞株。扩大培养、收集上清用MabSelect Sure亲和层析填料纯化。纯化后的抗体进行SDS-PAGE、ELISA、Western blot分析以及小鼠体内保护活性评价。结果 PCR鉴定及测序结果表明pcDNA3.1-H和pcDNA3.1-L构建完成,序列正确;Dot blot结果表明获得表达量高的稳转株细胞;SDSPAGE及Western blot法证明抗体纯化获得成功,ELISA结果表明该抗体具有结合与F1抗原的活性;小鼠体内攻击实验表明其保护活性与鼠mAb大致相同。结论成功在CHO-S细胞中表达了具有中和活性的抗F1人-鼠嵌合抗体。
关键词
鼠疫
F1
嵌合抗体
中国仓鼠卵巢细胞
Keywords
Yersinia pestis； F1； chimeric antibody； CHO cells
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
新型疫苗研发与下一代技术
被引量：
6
3
作者
杨益隆
徐俊杰
机构
军事医学科学院生物工程研究所疫苗与抗体工程研究室
出处
《生物产业技术》
2017年第2期43-50,共8页
基金
国家传染病防治科技重大专项资助(2016ZX10004001)
文摘
疫苗接种是人类历史上最为成功的医疗干预措施。近年来,疫苗研发出现了突破性进展,国内外上市了多种针对重要传染病的新型疫苗。尽管如此,疫苗研发仍面临很大挑战,传统的疫苗设计存在诸多技术缺陷,目前仍没有疫苗能够用于防控诸如艾滋病、疟疾、寨卡病毒等对人类健康具有重大威胁的传染病。随着生物信息学和结构生物学等技术的发展,疫苗设计领域出现了保护组学分析、结构疫苗学和合成生物学等新的研究方向,这些新的技术平台为今后新型疫苗的设计提供了全新的研究思路。
关键词
新型疫苗
疫苗设计
保护组学分析
结构疫苗学
合成生物学
Keywords
novel vaccines
vaccine design
protectome analysis
structural vaccinology
synthetic biology
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人源抗破伤风毒素单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达
王晗
于蕊
张晓鹏
任军
谢娜
樊红艳
张金龙
房婷
于长明
陈薇
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体的制备及活性分析
张金龙
任军
于婷
宋小红
付广成
刘树玲
张章
李冰
李建民
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
1
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下载PDF
职称材料
3
新型疫苗研发与下一代技术
杨益隆
徐俊杰
《生物产业技术》
2017
6
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职称材料
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