目的:用T7噬菌体展示文库鉴定1株单克隆抗体(mAb)DBD02的特异性。方法:用Protein G Sepharose结合mAb后对T7噬菌体展示文库进行2轮生物淘洗,用洗脱的通过特异mAb富集的噬菌体铺板后,以DBD02为一抗进行Dotblot筛选,阳性克隆进一步通过Wes...目的:用T7噬菌体展示文库鉴定1株单克隆抗体(mAb)DBD02的特异性。方法:用Protein G Sepharose结合mAb后对T7噬菌体展示文库进行2轮生物淘洗,用洗脱的通过特异mAb富集的噬菌体铺板后,以DBD02为一抗进行Dotblot筛选,阳性克隆进一步通过Western blot检测,PCR扩增阳性噬菌体插入的肝脏cDNA片段,测序后,通过BLAST比对确定mAb DBD02所识别的抗原。结果:在2轮淘洗后得到了>50个阳性克隆,取其中2个点扩增后进行了Western blot检测,并对这2个阳性克隆进行了PCR,序列测定后鉴定了此mAb所识别的抗原为乙醇脱氢酶,并将此mAb识别的表位限定于22个多肽内。结论:T7噬菌体展示文库可应用于mAb特异性的鉴定,与cDNA表达文库的免疫筛选相比,具有省时、省力和经济的特点,是mAb特异性鉴定的有力工具。展开更多
