利用抑制消减杂交技术(SSH)研究与Ty21a免疫相关的基因 被引量：2

1

作者 王华 高杰英 +1 位作者 周洁 李海民 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期521-524,共4页

目的:利用抑制消减杂交技术（SSH）筛选与Ty21a免疫相关的新基因。方法:以Ty21a免疫小鼠的肠细胞为tester,以正常小鼠的肠细胞为diver,提取mRNA,反转录构建cDNA文库,利用SSH技术筛选Ty21a免疫相关的新基因。结果:通过SSH技术和cDNA微矩... 目的:利用抑制消减杂交技术（SSH）筛选与Ty21a免疫相关的新基因。方法:以Ty21a免疫小鼠的肠细胞为tester,以正常小鼠的肠细胞为diver,提取mRNA,反转录构建cDNA文库,利用SSH技术筛选Ty21a免疫相关的新基因。结果:通过SSH技术和cDNA微矩阵技术,发现了7条与GenBank中已公布的表达序列标签（expressed　sequence tag,EST）片段没有明显同源性,可能为Ty21a免疫相关的新基因。其中3条正在用RACE-PCR法进行获得全长cDNA的工作。结论:SSH技术是一种高效的差异基因筛选方法,基因表达谱芯片技术是高通量进行基因表达模式研究的方法,Ty21a可诱导多种免疫相关新基因的表达。 展开更多

关键词 抑制消减杂交技术 研究 TY21A 免疫相关 cDNA微矩阵 肠细胞 分子免疫 细胞免疫

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双价痢疾菌苗不同途径免疫小鼠对脾细胞及GALT中ASC影响的实验研究 被引量：1

2

作者 徐辉 高杰英 +3 位作者 彭虹 舒翠莉 邢丽 石辛甫 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期633-635,639,共4页

目的：观察侵袭蛋白表达阴性（FSM-2117）和阳性（FS-5416）的两株双价痢疾菌苗经不同途径免疫小鼠后，脾细胞和粘膜相关淋巴组织（gut associated lymphoid tissues，GALT）中抗体分泌细胞（antibody secreting cell，ASC）的变化，以... 目的：观察侵袭蛋白表达阴性（FSM-2117）和阳性（FS-5416）的两株双价痢疾菌苗经不同途径免疫小鼠后，脾细胞和粘膜相关淋巴组织（gut associated lymphoid tissues，GALT）中抗体分泌细胞（antibody secreting cell，ASC）的变化，以探讨免疫途径及侵袭蛋白表达与否对痢疾菌苗免疫效果的影响。方法： BALB／c小鼠随机分为 3组，每组 20只， FSM－2ll7或 FS-5416 4 x10^7CFU分别经滴鼻、灌胃及肠内注射3种途径免疫小鼠，间隔2w，第3次免疫后7d活杀分离脾、小肠pp及MIN淋巴细胞，采用BA－ELISASPOT法检测其中特异性抗福氏、宋内氏LPSIgA和IgG分泌细胞。结果：滴鼻途径及小肠内免疫都能够诱生脾细胞特异性IgA-ASC、IgG-ASC显著升高（P＜0．01）；仅滴鼻免疫组Ipa+株较Ipa-株升高显著（P＜0．01）。滴鼻和小肠内免疫同时诱生肠GALT中派伊尔小结（Payer's patch,PP)和肠系膜淋巴结（mesenteric lymph node,MLN)淋巴细胞ASC显著升高（P＜0．05，P＜0．01），但株间比较无统计学差异。而同等剂量的灌胃免疫未能诱发脾细胞及GALT特异性ASC升高。结论：鼻粘膜和小肠内免疫可以有效地诱导脾脏和GALT淋巴细胞的免疫反应，且显著降低免疫原用量（本实验滴鼻剂量为常规灌胃的1/20），是一个安全有效的免疫途径。研? 展开更多

关键词 痢疾菌苗 滴鼻免疫 肠内免疫 GALT ASC 小鼠

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布鲁菌免疫分子研究进展 被引量：2

3

作者 吴朔 赵忠鹏 +1 位作者 于三科 王希良 《动物医学进展》 CSCD 2007年第9期65-69,共5页

布鲁菌病是布鲁菌引起的人兽共患传染病,包括7种21型,其中感染人的主要有牛、羊、猪布鲁菌3种,其免疫涉及体液免疫和细胞免疫。在布鲁菌的免疫过程中,先天性免疫应答主要通过补体、自然杀伤细胞、巨噬细胞、细胞因子等的参与。获得性免... 布鲁菌病是布鲁菌引起的人兽共患传染病,包括7种21型,其中感染人的主要有牛、羊、猪布鲁菌3种,其免疫涉及体液免疫和细胞免疫。在布鲁菌的免疫过程中,先天性免疫应答主要通过补体、自然杀伤细胞、巨噬细胞、细胞因子等的参与。获得性免疫应答中,CD4+、CD8+、γβT细胞起重要作用。布鲁菌重组亚单位疫苗是近年研究的热点,而且发现的免疫分子也很多。文章围绕布鲁菌免疫机理、免疫相关分子进行探讨,为筛选疫苗候选分子奠定基础。 展开更多

关键词 布鲁菌 免疫组 免疫分子

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双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠诱导粘膜与系统免疫反应 被引量：11

4

作者 舒翠莉 高杰英 +6 位作者 彭虹 徐辉 陈志华 王华 陈洁 石辛甫 邢丽 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第10期521-524,共4页

目的 :探讨双价痢疾菌苗滴鼻免疫后对小鼠不同粘膜部位和系统免疫部位的影响。方法 :BALB/c小鼠随机分为3组 ,每组 2 0只 ,FSM 2 117或FS 5 416 4× 10 7CFU/只经滴鼻途径免疫小鼠 ,间隔 2w ,3次免疫后 7d活杀 ,分离NALT、鼻通道、... 目的 :探讨双价痢疾菌苗滴鼻免疫后对小鼠不同粘膜部位和系统免疫部位的影响。方法 :BALB/c小鼠随机分为3组 ,每组 2 0只 ,FSM 2 117或FS 5 416 4× 10 7CFU/只经滴鼻途径免疫小鼠 ,间隔 2w ,3次免疫后 7d活杀 ,分离NALT、鼻通道、脾、小肠PP及MLN淋巴细胞 ,采用流式细胞术检测其淋巴细胞表型的变化 ;收集鼻咽、肺、肠、生殖道冲洗液和血清 ,采用ELISA法检测其中特异性抗福氏、宋内氏LPSIgA和IgG。结果 :两株菌苗经鼻内免疫都诱发了鼻咽、肺、胃肠道和生殖道等不同粘膜部位及血清中特异性抗福氏、宋内氏LPSIgA、IgG的显著增加 (P <0 0 1) ;NALT、NP和PP淋巴细胞中CD3+ T细胞显著增加 ,其中以CD4+ T细胞增加为主 ;FSM 2 117免疫组的脾细胞中B2 2 0 + 细胞显著增加 ,而FS 5 416免疫组的脾细胞中CD3+ T细胞显著增加。结论 :两株菌苗经鼻粘膜免疫均可诱导不同粘膜部位及系统免疫反应的发生 ,鼻粘膜是一个安全有效的免疫途径。 展开更多

关键词 痢疾菌苗 滴鼻免疫 淋巴细胞表型 抗原特异性抗体 流式细胞术

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痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠诱导不同部位淋巴组织的免疫应答 被引量：3

5

作者 舒翠莉 高杰英 +2 位作者 彭虹 王华 陈洁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期49-51,共3页

目的 探讨痢疾菌苗滴鼻免疫后，小鼠不同粘膜部位和其它部位免疫应答的影响。方法将Ｂａｌｂ／ｃ小鼠随机分为３组，每组１５只。舰疾菌苗株 ＴＩＭ－２１１７或 ＦＳ－５４１６，按 ５×10～6、１×１０～７、４×１０～... 目的 探讨痢疾菌苗滴鼻免疫后，小鼠不同粘膜部位和其它部位免疫应答的影响。方法将Ｂａｌｂ／ｃ小鼠随机分为３组，每组１５只。舰疾菌苗株 ＴＩＭ－２１１７或 ＦＳ－５４１６，按 ５×10～6、１×１０～７、４×１０～７和４×１０～７ＣＦＵ／只滴鼻跟 Ｂａｌｂ／ｃ小鼠４次涧隔两 ｗｂ。分离鼻相关淋巴组织（ＮＡＬＴ）、鼻通道（ＮＰ）及脾、小肠的ＰＰ结淋巴细胞。一部分细胞采用流式细胞术检测淋巴细胞表型的变化；另一部分细胞与全菌破碎抗原共培养，于不同时间点取出，提取ＲＮＡ做ＲＴ－ＰＣＲ。结果两株菌苗经鼻内免疫后，ＮＡＬ、ＮＰ和ＰＰ结的淋巴细胞中ＣＤ３Ｔ细胞显著增加，其中以ＣＤ４＋Ｔ细胞增加为主。ＴＳＭ－２１１７株免疫组的脾细胞中，Ｂ２２０＋细胞显著增加；而ＦＳ－５４１６株免疫组的脾细胞中，ＣＤ３＋Ｔ细胞显著增加。免疫小鼠的ＮＡＬＴ、ＮＰ和ＰＰ结淋巴细胞，在体外经抗原刺激后，均在不同时间出现ＩＦＮ－γ和ＩＬ-４ｍＲＮＡ的表达，ＴＧＦ－β ｍＲＮＡ的表达在免疫前后无明显变化。结论痢疾菌苗经鼻粘膜免疫，可诱导不同粘膜部位及全身免疫应答的产生。 展开更多

关键词 痢疾菌苗 滴鼻免疫 淋巴细胞表型 流式细胞 细胞因子

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双价痢疾菌苗免疫小鼠后抗体记忆反应的观测 被引量：1

6

作者 石辛甫 徐辉 +3 位作者 彭虹 陈志华 邢丽 高杰英 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期130-131,134,共3页

目的 :FSM 2 117和FS 5 416是我室构建的具有不同生物表型的福氏、宋内氏双价痢疾菌苗株 ,前者不表达侵袭蛋白 ,无侵袭力 ,而后者表达侵袭蛋白 (Ipa) ,具有侵袭力。拟观测两株菌苗FSM 2 117(Ipa- )、FS 5 416 (Ipa+ )免疫后所引起的肠... 目的 :FSM 2 117和FS 5 416是我室构建的具有不同生物表型的福氏、宋内氏双价痢疾菌苗株 ,前者不表达侵袭蛋白 ,无侵袭力 ,而后者表达侵袭蛋白 (Ipa) ,具有侵袭力。拟观测两株菌苗FSM 2 117(Ipa- )、FS 5 416 (Ipa+ )免疫后所引起的肠粘膜局部和系统中的免疫记忆反应 ,为研制痢疾菌苗提供理论依据。方法 :以小鼠灌胃免疫为模型 ,3次免疫后 ,间隔 3个月再次免疫 ,第 7天取血清和小肠冲洗夜 ,应用ELISA方法检测福氏、宋内氏特异性抗体。结果 :两菌苗株免疫组 ,血清中及局部抗原特异性sIgA、IgG抗体明显升高。两株菌苗与对照组相比 ,都具有显著差异。结论 :两株双价痢疾菌苗免疫小鼠后 。 展开更多

关键词 双价痢疾菌苗 特异性抗体 记忆反应 小鼠 细菌性痢疾

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双价痢疾菌苗角结膜免疫豚鼠后泪液中特异性抗体的检测

7

作者 石辛甫 邢丽 +2 位作者 陈志华 彭虹 高杰英 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期302-304,共3页

目的 :研究痢疾杆菌侵袭蛋白与局部免疫反应的关系 ,为痢疾菌苗的研制提供理论依据。方法 :用表达和不表达侵袭蛋白 (Ipa+ /Ipa-)的两株福氏、宋内氏双价痢疾菌苗经角结膜免疫豚鼠 ,并分别用福氏、宋内氏毒株攻击 ,BA ELISA方法检测豚... 目的 :研究痢疾杆菌侵袭蛋白与局部免疫反应的关系 ,为痢疾菌苗的研制提供理论依据。方法 :用表达和不表达侵袭蛋白 (Ipa+ /Ipa-)的两株福氏、宋内氏双价痢疾菌苗经角结膜免疫豚鼠 ,并分别用福氏、宋内氏毒株攻击 ,BA ELISA方法检测豚鼠泪液中特异性抗体升高情况。结果 :发现角结膜免疫后豚鼠泪液中特异性双价抗体水平较对照显著升高 ,差别具有统计学意义 ,Ipa+ 菌苗免疫组宋内氏抗体水平较Ipa-免疫组升高 ,差别具有统计学意义 ;攻击后 ,两免疫组局部抗体呈二次反应变化。结论 :侵袭蛋白的表达可加强痢疾菌苗诱导的局部抗体水平。两株双价痢疾菌苗均有较好的免疫原性。 展开更多

关键词 侵袭蛋白 双价痢疾菌苗 特异性抗体 免疫生物学 局部抗体水平 免疫原法

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减毒流感病毒A/California/07/2009ca疫苗候选株在雪貂上的保护性研究

8

作者 段跃强 李晓楠 +5 位作者 曹东 魏澍 杨鹏辉 邢丽 王希良 李培锋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第S1期1167-1170,共4页

目的:评价减毒A/California/07/2009ca流感病毒在雪貂上的减毒性及免疫保护性。方法:减毒A/California/07/2009ca流感病毒和BJ501病毒滴鼻免疫雪貂。应用TCID50的方法检测雪貂不同时间点的各个器官的病毒载量。结果:减毒A/California/07... 目的:评价减毒A/California/07/2009ca流感病毒在雪貂上的减毒性及免疫保护性。方法:减毒A/California/07/2009ca流感病毒和BJ501病毒滴鼻免疫雪貂。应用TCID50的方法检测雪貂不同时间点的各个器官的病毒载量。结果:减毒A/California/07/2009ca流感病毒初次免疫后雪貂的精神状态、死亡率、体重没有变化,一免4天后雪貂鼻腔内无病毒复制,A/California/07/2009ca流感病毒二免14天免疫BJ501病毒,BJ501病毒在鼻腔、肺中的毒力(TCID50)显著降低。结论:实验证明减毒A/California/07/2009ca病毒在雪貂上无致病性,是减毒的流感病毒株。通过雪貂免疫保护性实验证明,减毒A/California/07/2009ca病毒具有一定的免疫保护效果,这些实验结论的获得为今后流感减毒喷鼻疫苗的研制提供了有力的数据支持。 展开更多

关键词 A/California/07/2009ca病毒 雪貂 TCID50

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布鲁氏菌17.3kDa蛋白的表达及其免疫学评价(英文) 被引量：3

9

作者 曾政 邓小红 王希良 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第10期835-840,共6页

目的获得布鲁氏菌保护性抗原17.3kDa重组蛋白并以此构建亚单位疫苗。方法用PET32a(+)原核表达载体表达17.3kDa蛋白纯化后加氟氏佐剂肌肉注射免疫小鼠,三免后测定免疫功能进行免疫效果的评价。结果ELISA、WesternBlot检测到免疫鼠体内有... 目的获得布鲁氏菌保护性抗原17.3kDa重组蛋白并以此构建亚单位疫苗。方法用PET32a(+)原核表达载体表达17.3kDa蛋白纯化后加氟氏佐剂肌肉注射免疫小鼠,三免后测定免疫功能进行免疫效果的评价。结果ELISA、WesternBlot检测到免疫鼠体内有特异性抗体产生,蛋白苗所诱导产生的IgG1抗体远远高于IgG2a;通过细胞因子和CD分子测定表明重组蛋白以诱发ThⅡ型免疫为主。结论所表达的布鲁氏菌17.3kDa蛋白苗具有诱导特异性细胞和体液免疫应答的能力,可作为潜在的布鲁氏菌新型疫苗或诊断抗原,有进一步研究的意义。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 保护性抗原7.3kDa 重组蛋白 基因表达 免疫学 疫苗

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山茱萸总甙对HUVEC表达ICAM-1、CD44的影响 被引量：14

10

作者 李建民 周勇 +4 位作者 张丽 高杰英 赵世萍 付桂香 王旭丹 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第11期604-606,共3页

关键词 山茱萸总甙 HUVEC ICAM-1 CD44 TNF-Α

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人整合素分子α4亚基片段的克隆和表达 被引量：2

11

作者 刘永全 高杰英 +3 位作者 罗振革 孔祥英 梅俊杰 彭虹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期13-15,共3页

目的克隆并表达人整合素分子α４亚基１．２ｋｂｃＤ－ＮＡ片段。方法从 ＨＬ－６０细胞系中提取总 ＲＮＡ，以 ＲＴ－ ＰＣＲ法扩增人整合素分子 α４亚基片段 １． ２ ｋｂ ｃＤＮＡ（１７５３－ ２ ９３４ｂｐ），并将该片段亚克隆... 目的克隆并表达人整合素分子α４亚基１．２ｋｂｃＤ－ＮＡ片段。方法从 ＨＬ－６０细胞系中提取总 ＲＮＡ，以 ＲＴ－ ＰＣＲ法扩增人整合素分子 α４亚基片段 １． ２ ｋｂ ｃＤＮＡ（１７５３－ ２ ９３４ｂｐ），并将该片段亚克隆至表达载体ｐＧＥＸ－３Ｘ，用ＩＰＴＧ（诱导表达。结果克隆了 α４亚基 １．２ ｋｂ ｃＤＮＡ片段。序列分析表明，其所编码的氨基酸序列与文献相比较只有一处错义突变（Ａｒｇ→Ｇｌｎ），经分析该突变对抗原性影响不大。将该片段亚克隆至表达载体ｐＧＥＸ－３Ｘ，经ＩＰＴＧ诱导在大肠杆菌中获得高效表达。结论获得了α４亚基１．２ｋｂｃＤＮＡ片段及其原核表达产物，对研究α４整合素的功能具有重要的意义。 展开更多

关键词 整合素分子 α4亚基 RT-PCR CDNA 克隆 表达

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Peyer’s结淋巴细胞对上皮屏障功能的影响 被引量：2

12

作者 陈洁 高杰英 +3 位作者 曾丽玲 徐鹏辉 钟耀华 陈小章 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期744-746,756,共4页

目的 :体外建立稳定的上皮细胞与Peyer’s结淋巴细胞 (PPL)共培养体系 ,进一步研究该体系中的上皮细胞生理学特性。方法 :采用短路电流检测单层上皮细胞跨上皮电阻 (TER)的变化、半定量RT PCR方法检测上皮细胞间的紧密连接相关蛋白ZO 1... 目的 :体外建立稳定的上皮细胞与Peyer’s结淋巴细胞 (PPL)共培养体系 ,进一步研究该体系中的上皮细胞生理学特性。方法 :采用短路电流检测单层上皮细胞跨上皮电阻 (TER)的变化、半定量RT PCR方法检测上皮细胞间的紧密连接相关蛋白ZO 1和ZO 2mRNA的表达。结果 :①Caco 2细胞单层与PPL共培养的第 2天 ,无论是混合共培养还是上下共培养组的TER均与对照有统计学差异 (P <0 0 5 ) ;②同时上下共培养或混合共培养组在第 8天TER仍保持较高水平 ,与对照有统计学差异 (P <0 0 5 ) ;③在上下共培养和混合共培养组中 ,半定量RT PCR检测ZO 1mRNA的表达也均明显高于对照。结论 :Peyer’s结淋巴细胞 (PPL)可以较好地维持上皮屏障功能。 展开更多

关键词 共培养 Peyer's结淋巴细胞 CACO-2 跨上皮电阻

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福氏2a宋内氏双价痢疾菌aroD基因缺失减毒株FS－5441的构建 被引量：7

13

作者 曾关富 高杰英 毛培基 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第2期68-69,共2页

通过Ｐｌｋｃ噬菌体将Ｔｎ１０插入灭活的ａｒｏＤ基因片段导入双价有毒痢疾菌ＦＳ－１５中，构建了该株的芳香族氨基酸营养缺陷减毒株，并通过Ｂｏｃｈｎｅｒ培养基去除Ｔｎ１０所携带的四环素抗性，经原位杂交从中检测到ａｒｏＤ基因... 通过Ｐｌｋｃ噬菌体将Ｔｎ１０插入灭活的ａｒｏＤ基因片段导入双价有毒痢疾菌ＦＳ－１５中，构建了该株的芳香族氨基酸营养缺陷减毒株，并通过Ｂｏｃｈｎｅｒ培养基去除Ｔｎ１０所携带的四环素抗性，经原位杂交从中检测到ａｒｏＤ基因缺失株ＦＳ－５４４１。该株稳定表达福氏及宋内氏双价Ｏ抗原，Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ显示该株表达Ｉｐａ蛋白，具有穿入ＨｅＬａ细胞的能力，穿入率为１９％。营养缺陷表型的回复突变率小于１０￣（－１１）。小白鼠毒力试验证明安全无毒，免疫小白鼠后对福氏及宋内氏毒株的攻击具有保护活性。 展开更多

关键词 志贺氏菌 aroD基因 减毒活疫菌 FS-5441

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膜抗原单抗对痢疾杆菌入侵HeLa细胞细胞骨架的影响 被引量：1

14

作者 王岚 高杰英 +1 位作者 张德添 周涛 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期367-369,共3页

目的:观察抗痢疾杆菌膜蛋白IpaB和LPS的单抗对痢疾杆菌入侵HeLa细胞细胞骨架的影响。方法:采用不同膜抗原的单抗处理痢疾杆菌后进行HeLa细胞入侵及阻断实验,观察不同膜抗原单抗对痢疾杆菌入侵的作用。结果:观察到抗菌膜蛋白IpaB的单抗和... 目的:观察抗痢疾杆菌膜蛋白IpaB和LPS的单抗对痢疾杆菌入侵HeLa细胞细胞骨架的影响。方法:采用不同膜抗原的单抗处理痢疾杆菌后进行HeLa细胞入侵及阻断实验,观察不同膜抗原单抗对痢疾杆菌入侵的作用。结果:观察到抗菌膜蛋白IpaB的单抗和LPS的单抗均不能阻断细菌的入侵且能促进细菌的入侵,单抗作用后受感染的HeLa细胞胞内肌动蛋白极性分布现象更为显著,入侵的细菌数量明显增多。结论:提示痢疾杆菌的膜蛋白和LPS单抗所识别的表位,均具有使细胞骨架发生改变、调节S.flexneri2a 12菌进入HeLa细胞的能力。 展开更多

关键词 单抗 HELA细胞 痢疾杆菌 抗原 细胞骨架 LPS 观察 入侵 细菌数量 菌膜

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痢疾菌毒力表型与抗原表达的关系 被引量：2

15

作者 陈志华 高杰英 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第5期401-403,406,共4页

目的 分析研究本室保存或构建的各类痢疾菌毒株、减毒突变株、菌苗株的毒力及其生物表的相互关系，探讨与致病有关的成分。为改进现有菌苗和构建新型菌菌提供参考依据。方法 采用刚果红结合试验、接触性溶血试验、ＨｅＬａ细胞入侵试... 目的 分析研究本室保存或构建的各类痢疾菌毒株、减毒突变株、菌苗株的毒力及其生物表的相互关系，探讨与致病有关的成分。为改进现有菌苗和构建新型菌菌提供参考依据。方法 采用刚果红结合试验、接触性溶血试验、ＨｅＬａ细胞入侵试验及豚鼠角结合膜炎试验。对不同痢疾菌的毒力表型进行检测。并对大质粒及其侵袭相关的基因（４．１ｋｂ）进行跗背景分析。用ＢＡ－ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔ法。 展开更多

关键词 痢疾菌 毒力相关蛋白抗原 毒力表型 LPS

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人整合素分子β7亚基片段的表达鉴定及多抗制备 被引量：2

16

作者 刘永全 高杰英 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第5期398-400,共3页

目的 在大肠杆菌中高效表达人整合素分子β７片段并制备多抗。方法 ＤＮＡ重组法构建表达质粒，经ＩＰＴＧ诱导在大肠杆菌中获高效表达。表达产物经免疫印迹鉴定后，用８ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解包涵体，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纯化，免疫家兔... 目的 在大肠杆菌中高效表达人整合素分子β７片段并制备多抗。方法 ＤＮＡ重组法构建表达质粒，经ＩＰＴＧ诱导在大肠杆菌中获高效表达。表达产物经免疫印迹鉴定后，用８ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解包涵体，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纯化，免疫家兔获得多抗。结果 β７片段在大肠杆菌中训效表达。表达产物以包涵体形式存在。免疫印迹鉴定为目的蛋白。多抗效价达１：１０２４００。结论 制备了抗β７的多抗，对β７整合素的功能研究有重要意义。 展开更多

关键词 人整合素分子β7片段 基因表达 鉴定 多抗制备

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慢性髓系白血病bcr-abl融合基因的克隆及其在COS-7细胞中的表达

17

作者 刘楠 孙秉中 +3 位作者 冯琦 高杰英 刘永全 罗振革 《细胞与分子免疫学杂志》 CSCD 2000年第4期346-348,359,共4页

目的克隆慢性髓系白血病(CML)融合基因bcr abl的cDNA序列 ,并在真核细胞中表达。方法以设计的两条引物扩增bcr abl融合位点两侧的cDNA ,测序后克隆至真核表达载体 pcDNA3.1 ,转染COS 7细胞。取常规培养的细胞进行RT PCR鉴定。结果①PCR... 目的克隆慢性髓系白血病(CML)融合基因bcr abl的cDNA序列 ,并在真核细胞中表达。方法以设计的两条引物扩增bcr abl融合位点两侧的cDNA ,测序后克隆至真核表达载体 pcDNA3.1 ,转染COS 7细胞。取常规培养的细胞进行RT PCR鉴定。结果①PCR扩增出490bp大小的cDNA ,其序列测定除第452位的碱基C突变为T外 ,其余序列均正确。②RT PCR法检测到转染细胞系中 ,有bcr ablmRNA的表达。结论成功地克隆了CML融合基因bcr abl融合位点两侧的490bp 序列并表达 ,为研制bcr abl基因疫苗治疗CML奠定了基础。 展开更多

关键词 慢性髓系白血病 BCR-ABL融合基因 克隆

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