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组织型纤溶酶原激活物基因的DNA改组
被引量：
2
1
作者
黄庆生
徐静
+2 位作者
徐俊杰
童贻刚
王海涛
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第1期97-99,102,共4页
目的:探索利用DNA改组(DNA shuffling)技术,获得更高活性tPA的可能性。方法:以人、恒河猴及大白鼠tPA cDNA为一组基因,进行tPA的DNA改组(DNA family shuffling)。以改组后构建的tPA多样性文库转染CHO细胞并进行克隆和筛选。结果:得到了...
目的:探索利用DNA改组(DNA shuffling)技术,获得更高活性tPA的可能性。方法:以人、恒河猴及大白鼠tPA cDNA为一组基因,进行tPA的DNA改组(DNA family shuffling)。以改组后构建的tPA多样性文库转染CHO细胞并进行克隆和筛选。结果:得到了两株有意义的克隆:t9和t17,其中t9克隆表达的tPA活性略高于人tPA,初步的比活性测定结果表明,活性约提高4倍。t17克隆表达的tPA虽然有88个氨基酸的缺失,但仍表现出与人tPA相同的活性。两株克隆经测序证明,为改组后的基因,其序列以人和恒河猴的tPA cDNA序列为主,少数序列来源于大白鼠tPA cDNA。结论:这一探索性结果将为后续几轮的tPA DNA改组探明道路,为最终从改 组后tPA多样性基因库中筛选到比较理想的重组体打下基础。
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关键词
组织型纤溶酶原激活物
DNA改组
真核表达
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职称材料
应用随机PCR技术制备靶基因文库随机片段
2
作者
吕永强
杜桂鑫
童贻刚
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第20期1878-1880,共3页
目的 用随机PCR技术制备构建靶基因文库的随机基因片段。方法 先扩出靶基因 (HIV1Envgp160 )片段 ,然后设计两条引物 ,1条为锚定随机引物用于扩出靶基因的随机片段 ,另 1条为锚定特异引物用于对随机片段进行扩增 ,得到大量的随机片段 ...
目的 用随机PCR技术制备构建靶基因文库的随机基因片段。方法 先扩出靶基因 (HIV1Envgp160 )片段 ,然后设计两条引物 ,1条为锚定随机引物用于扩出靶基因的随机片段 ,另 1条为锚定特异引物用于对随机片段进行扩增 ,得到大量的随机片段 ;优化模板量、dNTP浓度、反应时间、温度和DNA聚合酶等反应条件 ,扩出靶基因的随机片段。结果 得到用于建库的理想靶基因随机片段。结论 随机PCR是制备靶基因文库随机片段的一个简便有效方法。
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关键词
靶基因
随机PCR
文库
HIV
扩增
制备
基因片段
dNTP浓度
DNA聚合酶
随机引物
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职称材料
题名
组织型纤溶酶原激活物基因的DNA改组
被引量：
2
1
作者
黄庆生
徐静
徐俊杰
童贻刚
王海涛
机构
军事医学科学院微生物流行病研究所二室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第1期97-99,102,共4页
文摘
目的:探索利用DNA改组(DNA shuffling)技术,获得更高活性tPA的可能性。方法:以人、恒河猴及大白鼠tPA cDNA为一组基因,进行tPA的DNA改组(DNA family shuffling)。以改组后构建的tPA多样性文库转染CHO细胞并进行克隆和筛选。结果:得到了两株有意义的克隆:t9和t17,其中t9克隆表达的tPA活性略高于人tPA,初步的比活性测定结果表明,活性约提高4倍。t17克隆表达的tPA虽然有88个氨基酸的缺失,但仍表现出与人tPA相同的活性。两株克隆经测序证明,为改组后的基因,其序列以人和恒河猴的tPA cDNA序列为主,少数序列来源于大白鼠tPA cDNA。结论:这一探索性结果将为后续几轮的tPA DNA改组探明道路,为最终从改 组后tPA多样性基因库中筛选到比较理想的重组体打下基础。
关键词
组织型纤溶酶原激活物
DNA改组
真核表达
Keywords
tissue-type plasminogen activator
DNA shuffling
eukaryotic expression
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
应用随机PCR技术制备靶基因文库随机片段
2
作者
吕永强
杜桂鑫
童贻刚
机构
军事医学科学院微生物流行病研究所二室
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第20期1878-1880,共3页
文摘
目的 用随机PCR技术制备构建靶基因文库的随机基因片段。方法 先扩出靶基因 (HIV1Envgp160 )片段 ,然后设计两条引物 ,1条为锚定随机引物用于扩出靶基因的随机片段 ,另 1条为锚定特异引物用于对随机片段进行扩增 ,得到大量的随机片段 ;优化模板量、dNTP浓度、反应时间、温度和DNA聚合酶等反应条件 ,扩出靶基因的随机片段。结果 得到用于建库的理想靶基因随机片段。结论 随机PCR是制备靶基因文库随机片段的一个简便有效方法。
关键词
靶基因
随机PCR
文库
HIV
扩增
制备
基因片段
dNTP浓度
DNA聚合酶
随机引物
分类号
R378.25 [医药卫生—病原生物学]
R516.4 [医药卫生—内科学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
组织型纤溶酶原激活物基因的DNA改组
黄庆生
徐静
徐俊杰
童贻刚
王海涛
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
应用随机PCR技术制备靶基因文库随机片段
吕永强
杜桂鑫
童贻刚
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004
0
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