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生物反应器内再造组织工程化心肌的实验研究 被引量:5
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作者 刘霞 王常勇 +1 位作者 郭希民 欧阳五庆 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期7-12,共6页
目的在体外模拟微重力条件下构建心肌细胞-胶原复合体,探索组织工程化心肌组织体外再造的可行性。方法采用顺序消化及差速贴壁法从1~2d龄新生大鼠的心肌组织中分离心肌细胞,并将其与多孔胶原复合形成复合体。复合体在旋转生物反应器(ro... 目的在体外模拟微重力条件下构建心肌细胞-胶原复合体,探索组织工程化心肌组织体外再造的可行性。方法采用顺序消化及差速贴壁法从1~2d龄新生大鼠的心肌组织中分离心肌细胞,并将其与多孔胶原复合形成复合体。复合体在旋转生物反应器(rotarycellculturesystem,RCCS)中进行培养,观测复合体内心肌细胞的生长状况、超微结构、细胞代谢率及细胞组分的变化,并将其与正常心肌和常规培养的复合体进行比较。结果在RCCS中培养的复合体内的细胞具有心肌细胞的特殊超微结构,免疫组化显示其中的α-横纹肌肌动蛋白染色呈强阳性,与静止培养的复合体细胞相比,细胞代谢更加旺盛。结论采用组织工程技术可以在RCCS中培育出组织工程化心肌组织。 展开更多
关键词 心肌细胞 胶原 旋转生物反应器 组织工程
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体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的初步研究 被引量:10
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作者 王秀丽 王常勇 +4 位作者 虞星炬 郭希民 段翠密 赵云山 董灵芝 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期441-445,共5页
目的 :5 -氮胞苷作为分化诱导剂 ,初步探讨其单独或联合全反式维甲酸应用时对小鼠胚胎干细胞(mESC)分化为心肌细胞的影响 ,旨在建立一种体外诱导mESC分化为心肌细胞的实验方法。方法 :采用MTT法确定 5 -氮胞苷的非细胞毒性参考剂量。设... 目的 :5 -氮胞苷作为分化诱导剂 ,初步探讨其单独或联合全反式维甲酸应用时对小鼠胚胎干细胞(mESC)分化为心肌细胞的影响 ,旨在建立一种体外诱导mESC分化为心肌细胞的实验方法。方法 :采用MTT法确定 5 -氮胞苷的非细胞毒性参考剂量。设计不同条件培养基 (5 -氮胞苷单独或配伍全反式维甲酸应用 )对mESC进行诱导分化 ,并通过免疫组化技术及RT -PCR方法等对分化细胞进行鉴定。结果 :5 -氮胞苷的非细胞毒性参考剂量为 8μmol/L ,能够诱导mESC分化为心肌合胞体 (与阴性对照组比较 ,P <0 0 1) ,诱导分化率可达 5 0 %。配伍全反式维甲酸持续诱导的结果等同于单独应用全反式维甲酸的作用效果 (P >0 0 5 ) :即对ESC向心肌细胞的诱导分化没有促进作用。结论 :5 -氮胞苷能够诱导mESC分化为心肌合胞体 ,从而得以建立一种体外诱导mESC分化为心肌细胞的方法。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 心肌 分化 阿扎胞苷 维甲酸
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大鼠脂肪干细胞的分离培养及基本生物学性状研究 被引量:4
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作者 张雪莲 马依彤 +5 位作者 王常勇 马翔 阿迪拉.阿扎提 刘芬 陈邦党 王宝珠 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1217-1219,共3页
目的:探讨体外分离培养大鼠脂肪干细胞(ADSC)的方法,并研究其基本生物学特性,为可注射的组织工程化心肌治疗心肌梗死提供种子细胞来源。方法:体外分离培养大鼠脂肪来源的干细胞并进行传代培养,流式细胞术鉴定CD90、CD29、CD34及CD4... 目的:探讨体外分离培养大鼠脂肪干细胞(ADSC)的方法,并研究其基本生物学特性,为可注射的组织工程化心肌治疗心肌梗死提供种子细胞来源。方法:体外分离培养大鼠脂肪来源的干细胞并进行传代培养,流式细胞术鉴定CD90、CD29、CD34及CD45的表达及检测细胞周期;绘制ADSC的生长曲线;通过细胞形态观察、特异性染色来检测脂肪干细胞向成骨、成脂肪细胞分化的能力。结果:大鼠ADSC表型特征为CD90、CD29阳性,CD34、CD45阴性;ADSC能连续传代达15代以上,且在第7代仍保持较强的增殖能力。流式细胞术显示各代次的ADSC约80%左右处于细胞周期的G0-G1期。ADSC具有向成骨、成脂肪细胞分化的潜能。结论:大鼠脂肪干细胞增殖能力强,具有向成骨、成脂肪细胞分化的潜能,第7代之前的细胞可作为组织工程的种子细胞来源。 展开更多
关键词 脂肪干细胞 细胞培养 细胞分化
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胰岛移植及胰岛干细胞研究进展 被引量:5
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作者 郭希民 王常勇 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期83-87,共5页
本文综述了近年来胰岛移植相关研究的进展,包括胰岛的分离、纯化、培养、冷冻保存和免疫隔离;同时还介绍了胰岛组织干细胞以及诱导胚胎干细胞分化为胰岛的最新进展,在对胰岛移植治疗糖尿病的现状及研究发展趋势进行全面分析的基础上,笔... 本文综述了近年来胰岛移植相关研究的进展,包括胰岛的分离、纯化、培养、冷冻保存和免疫隔离;同时还介绍了胰岛组织干细胞以及诱导胚胎干细胞分化为胰岛的最新进展,在对胰岛移植治疗糖尿病的现状及研究发展趋势进行全面分析的基础上,笔者认为异体胰岛移植是当前I型糖尿病治疗的重要手段之一,而胰岛干细胞移植则是未来糖尿病治疗的趋势。 展开更多
关键词 糖尿病 胰岛移植 胰岛干细胞
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海藻酸钠胰岛素纳米粒对糖尿病大鼠的降血糖作用 被引量:6
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作者 董宝军 王常勇 +4 位作者 郭希民 马海霞 段翠密 李晶 范明 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期590-592,共3页
目的研究海藻酸钠胰岛素纳米粒的制备方法及其对糖尿病大鼠的降血糖作用。方法采用离子交联法制备海藻酸钠胰岛素纳米粒,分别用透射电镜和纳米粒度分析仪测定纳米粒形态和粒径。建立Wistar大鼠糖尿病模型,观察海藻酸钠胰岛素纳米粒灌胃... 目的研究海藻酸钠胰岛素纳米粒的制备方法及其对糖尿病大鼠的降血糖作用。方法采用离子交联法制备海藻酸钠胰岛素纳米粒,分别用透射电镜和纳米粒度分析仪测定纳米粒形态和粒径。建立Wistar大鼠糖尿病模型,观察海藻酸钠胰岛素纳米粒灌胃给药后的降血糖作用。结果制备得到的纳米粒形态为球形或近球形,粒径为236.4±19.3nm,胰岛素包封率为78.5%±6.1%,载药量为22.6%±4.4%。降血糖试验表明,海藻酸钠胰岛素纳米粒灌胃(26U/kg)后7h,血糖含量开始下降,这种降血糖作用可维持12h,其中血糖维持在正常水平的时间可达6h(血糖值≤7.0mmol/L)。结论海藻酸钠胰岛素纳米粒具有一定的缓释功能,灌胃给药后可降低糖尿病大鼠血糖水平。 展开更多
关键词 胰岛素 海藻酸钠 纳米粒 降血糖药
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Dextran分离纯化大鼠胰岛的生物学特性 被引量:2
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作者 吴靖芳 刘杰 +4 位作者 江红 孔庆学 李洪波 张静 王常勇 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期338-341,共4页
目的探讨一种分离纯化大鼠胰岛的方法,并评价该法分离得到的胰岛的生物学特性。方法常规外科手术分离胰腺。然后将其剪为lrnm3左右碎块,置于0.9mg/ml胶原酶V37℃振荡消化10~17min,以含10%胎牛血清的Hank’s液终止消化。60目筛网... 目的探讨一种分离纯化大鼠胰岛的方法,并评价该法分离得到的胰岛的生物学特性。方法常规外科手术分离胰腺。然后将其剪为lrnm3左右碎块,置于0.9mg/ml胶原酶V37℃振荡消化10~17min,以含10%胎牛血清的Hank’s液终止消化。60目筛网过滤。DextranT40非连续密度梯度离心纯化胰岛。纯化后的胰岛经DTZ染色,吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)染色、放射免疫分析检测胰岛素分泌量,纯化后的胰岛进行异种移植,检测降糖效果。结果胰岛分布于11%Dextran和1640及11%和22%Dextran界面之间,平均每只Wistar大鼠消化后可获得2181士14个胰岛,纯化后回收1826±24个胰岛,胰岛收获量达(85.7±5.9)%,纯度高达95%以上。胰岛对葡萄糖刺激有良好的反应性,纯化后胰岛异种移植,可逆转实验性糖尿病SD大鼠血糖7~10天。结论胶原酶消化,Dextran T40纯化是一种简单、高效的胰岛分离纯化方法,获得的胰岛有良好的生物学特性。 展开更多
关键词 胰岛 分离 纯化 糖尿病 移植 大鼠
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