目的:探讨外源性p53AIP1(p53-regulated apoptosis-inducing protein 1)基因抗肿瘤效应及其作用机制,以评估p53AIP1基因在肿瘤基因治疗中应用的可行性。方法:构建携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒Ad-p53AIP1,感染人肝癌细胞HepG2...目的:探讨外源性p53AIP1(p53-regulated apoptosis-inducing protein 1)基因抗肿瘤效应及其作用机制,以评估p53AIP1基因在肿瘤基因治疗中应用的可行性。方法:构建携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒Ad-p53AIP1,感染人肝癌细胞HepG2,应用MTT比色法、Western blotting、流式细胞术、罗丹明染色以及电镜等观察外源性p53AIP1基因表达对肿瘤细胞的作用及其相关机制。小鼠皮下接种感染Ad-p53AIP1的小鼠乳腺癌4T1细胞,观察Ad-p53AIP1对肿瘤细胞体内成瘤性的影响;建立4T1细胞皮下移植瘤小鼠模型,直接瘤内多点注射重组腺病毒,观察Ad-p53AIP1的抗肿瘤疗效。结果:感染Ad-p53AIP1的HepG2细胞能够高效表达P53AIP1蛋白。MTT检测显示Ad-p53AIP1对人肝癌细胞HepG2的生长抑制率达50%以上;流式细胞术分析证实p53AIP1使肿瘤细胞周期阻滞于G_2/M期;罗丹明染色、电镜观察以及凋亡相关蛋白PARP表达的检测均证实p53AIP1能诱导肿瘤细胞发生明显凋亡。感染Ad-p53AIP1的肿瘤细胞体内成瘤受到非常明显的抑制(P<0.01),Ad-p53AIP1瘤体注射对移植瘤生长也有明显的抑制作用(P<0.05)。Western blotting以及RT-PCR检测证实Ad-p53AIP1对p53 mRNA表达无影响,能下调mdm2基因的表达;p53AIP1能上调P53蛋白的表达、下调MDM2蛋白的表达水平,同时还影响P21等细胞周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达。结论:p53AIP1有明显的体内外抗肿瘤作用,其作用机制与其反向调控P53蛋白、调控多种细胞周期和细胞凋亡相关蛋白、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡有关,该基因在肿瘤基因治疗中具有潜在的应用前景。展开更多
背景与目的肺癌转移相关基因-1(Pulmonary cancer Metastasis Associated Gene-1,MAG-1)是利用抑制消减杂交技术获得的与肺癌转移相关的基因。此研究的目的在于探讨基因MAG-1对肺巨细胞癌细胞的转移相关生物学行为的影响及其在24例肺癌...背景与目的肺癌转移相关基因-1(Pulmonary cancer Metastasis Associated Gene-1,MAG-1)是利用抑制消减杂交技术获得的与肺癌转移相关的基因。此研究的目的在于探讨基因MAG-1对肺巨细胞癌细胞的转移相关生物学行为的影响及其在24例肺癌组织中的表达情况。方法构建MAG-1的正反义表达载体,分别转染PLA801C和PLA801D,获得稳定表达相应序列的细胞株,观察稳定转染细胞的多种肿瘤转移相关能力的改变,并检测MAG-1对CD44、MMP-2等分子的影响,最后还检测了MAG-1在源于不同转移状况患者的肺癌标本中的表达情况。结果MAG-1对细胞生长、细胞与胞外基质的粘附能力以及侵袭能力均有促进作用;并能促进细胞中CD44和MMP-2的表达;MAG-1mRNA在有转移的肺癌中的阳性率(7/12)高于其在无转移的肺癌标本中的阳性率(2/12)。结论MAG-1具有增强肺癌细胞转移能力的功能,并且在转移性肺癌组织中其mRNA具有较高的阳性检出率,是可能的肺癌转移相关基因。展开更多
本研究旨在建立可稳定高效表达E3泛素连接酶CHIP(carboxyl terminus of Hsc70/Hsp70-interactingprotein)的慢性髓系白血病细胞株K562细胞模型,以观察过表达CHIP对细胞生物学特性的影响。采用脂质体介导的方法,经G418筛选及有限稀释法...本研究旨在建立可稳定高效表达E3泛素连接酶CHIP(carboxyl terminus of Hsc70/Hsp70-interactingprotein)的慢性髓系白血病细胞株K562细胞模型,以观察过表达CHIP对细胞生物学特性的影响。采用脂质体介导的方法,经G418筛选及有限稀释法成功建立了可稳定表达野生型CHIP及其TPR及U-box结构域缺失突变体的慢性髓系白血病K562细胞克隆。对过表达CHIP的K562细胞用MTT法检测体外增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测相关蛋白表达,瑞氏-姬姆萨染色进行细胞形态学观测。结果表明,过表达野生型CHIP对K562细胞体外增殖能力没有明显影响,细胞周期中G2/M期细胞比率增加,CHIP对BCR-ABL激酶的稳定性没有影响,但却明显导致细胞形态异常,表现为细胞体积增大及异常核细胞数目增多,出现异常有丝分裂相等,提示CHIP分子对细胞有丝分裂过程可能具有调控作用。结论:野生型CHIP可诱导K562细胞发生有丝分裂异常。展开更多
文摘背景与目的肺癌转移相关基因-1(Pulmonary cancer Metastasis Associated Gene-1,MAG-1)是利用抑制消减杂交技术获得的与肺癌转移相关的基因。此研究的目的在于探讨基因MAG-1对肺巨细胞癌细胞的转移相关生物学行为的影响及其在24例肺癌组织中的表达情况。方法构建MAG-1的正反义表达载体,分别转染PLA801C和PLA801D,获得稳定表达相应序列的细胞株,观察稳定转染细胞的多种肿瘤转移相关能力的改变,并检测MAG-1对CD44、MMP-2等分子的影响,最后还检测了MAG-1在源于不同转移状况患者的肺癌标本中的表达情况。结果MAG-1对细胞生长、细胞与胞外基质的粘附能力以及侵袭能力均有促进作用;并能促进细胞中CD44和MMP-2的表达;MAG-1mRNA在有转移的肺癌中的阳性率(7/12)高于其在无转移的肺癌标本中的阳性率(2/12)。结论MAG-1具有增强肺癌细胞转移能力的功能,并且在转移性肺癌组织中其mRNA具有较高的阳性检出率,是可能的肺癌转移相关基因。
文摘本研究旨在建立可稳定高效表达E3泛素连接酶CHIP(carboxyl terminus of Hsc70/Hsp70-interactingprotein)的慢性髓系白血病细胞株K562细胞模型,以观察过表达CHIP对细胞生物学特性的影响。采用脂质体介导的方法,经G418筛选及有限稀释法成功建立了可稳定表达野生型CHIP及其TPR及U-box结构域缺失突变体的慢性髓系白血病K562细胞克隆。对过表达CHIP的K562细胞用MTT法检测体外增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测相关蛋白表达,瑞氏-姬姆萨染色进行细胞形态学观测。结果表明,过表达野生型CHIP对K562细胞体外增殖能力没有明显影响,细胞周期中G2/M期细胞比率增加,CHIP对BCR-ABL激酶的稳定性没有影响,但却明显导致细胞形态异常,表现为细胞体积增大及异常核细胞数目增多,出现异常有丝分裂相等,提示CHIP分子对细胞有丝分裂过程可能具有调控作用。结论:野生型CHIP可诱导K562细胞发生有丝分裂异常。
