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HIV-1整合酶的纯化及活性检测
1
作者 李南 张健慧 凌世淦 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期70-73,共4页
含整合酶基因的重组质粒 pET p31在E coliBL2 1(DE3)中以包含体形式高效表达HIV 1整合酶 (p31蛋白 )。初步纯化的包含体用 8mol/L尿素变性溶解 ,经阳离子交换剂柱层析和分子筛柱层析纯化 ,并通过梯度透析的复性过程去除尿素 ,获得可溶... 含整合酶基因的重组质粒 pET p31在E coliBL2 1(DE3)中以包含体形式高效表达HIV 1整合酶 (p31蛋白 )。初步纯化的包含体用 8mol/L尿素变性溶解 ,经阳离子交换剂柱层析和分子筛柱层析纯化 ,并通过梯度透析的复性过程去除尿素 ,获得可溶性及高纯度 p31。测定证实 ,复性后的 p31蛋白呈现良好的 3′加工。 展开更多
关键词 艾滋病毒 整合酶 包含体 生物活性 纯化
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影响HIV—1整合酶活性因素的探讨
2
作者 李南 张健慧 等 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第6期527-530,共4页
目的：探讨HIV－1整合酶活性的影响因素，优化其活性测定条件。方法 以同位素标记的寡核苷酸链为底物，体外模拟HIV－1病毒DNA整合过程，检测HIV－1整合酶的3'端加工，链转移和去整合活性，并考察HIV－1整合酶活性测定中，二价高... 目的：探讨HIV－1整合酶活性的影响因素，优化其活性测定条件。方法 以同位素标记的寡核苷酸链为底物，体外模拟HIV－1病毒DNA整合过程，检测HIV－1整合酶的3'端加工，链转移和去整合活性，并考察HIV－1整合酶活性测定中，二价高子、酸碱度、温度和时间等的影响。结果 Mn^2+对整合酶活性的辅助作用，明显强于Mg^2+，而3'端加工反应对二价离子的依赖性较小。酸碱度对各种反应的影响较大，温度和时间影响较小。结论 整合酶活性检测的最佳反应条件为pH7.0-7.5,37℃，15mmol/L M^2+及反应时间1h。 展开更多
关键词 HIV 整合酶 活性测定 影响因素
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