联合应用凋亡素基因、新城疫病毒HN基因及IL-18基因对黑色素瘤的抑制效应研究 被引量：8

1

作者 李霄 金宁一 +4 位作者 米志强 连海 孙迎春 李杰 管国芳 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第12期33-36,共4页

以前的研究结果表明，来自于鸡贫血病毒的凋亡素基因、来自于鸡新城疫病毒的HN基因和IL-18基因具有不同的抗肿瘤效应，但上述基因抗肿瘤的机制不同，本研究在双启动子真核表达质粒pIRES中的CMV启动子下游插入凋亡素基因，IRES启动子下... 以前的研究结果表明，来自于鸡贫血病毒的凋亡素基因、来自于鸡新城疫病毒的HN基因和IL-18基因具有不同的抗肿瘤效应，但上述基因抗肿瘤的机制不同，本研究在双启动子真核表达质粒pIRES中的CMV启动子下游插入凋亡素基因，IRES启动子下游插入IL-18HN嵌合基因，构建能同时表达三种基因的真核表达质粒pIRVP3IL-18HN。复制C57BL／6小鼠荷黑色素瘤模型，并将质脂体包裹的重组质粒进行瘤内注射，共注射3次，每次100μg质粒，拟观察凋亡素、新城疫病毒HN基因和IL-18基因以核酸疫苗的形式联合应用对小鼠黑色素瘤的抑制效应。结果显示pVIL-18HN、pVlL-18和pVVP3IL-18均有抑制肿瘤作用，但pIRVP3IL-18HN组抑瘤率高于pVIL-18HN组、pVIL-18VP3组、pVIL-18组和Hanks液对照组。研究结果提示，上述3种基因联合应用具有协同抑瘤效应。 展开更多

关键词 IL-18 HN基因 联合应用 凋亡素 黑色素瘤 基因 IRES 鸡新城疫病毒 下游 鸡贫血病毒

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新城疫病毒HN基因对肝癌细胞SMMC7721的细胞毒性研究 被引量：5

2

作者 孙迎春 金宁一 +3 位作者 米志强 李霄 连海 李萍 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2005年第3期193-196,共4页

目的:探讨新城疫病毒HN基因对肝癌细胞SMMC7721的杀伤作用及其机制。方法:以脂质体介导方法在体外转染含新城疫病毒HN基因的质粒pVHN于细胞SMMC7721 24 h后,采用MTT法检测细胞活性;3,5-二羟基甲苯测定其唾液酸含量的变化;丫啶橙/溴化乙... 目的:探讨新城疫病毒HN基因对肝癌细胞SMMC7721的杀伤作用及其机制。方法:以脂质体介导方法在体外转染含新城疫病毒HN基因的质粒pVHN于细胞SMMC7721 24 h后,采用MTT法检测细胞活性;3,5-二羟基甲苯测定其唾液酸含量的变化;丫啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色,荧光显微镜观察细胞形态学改变;以及FCM检测病毒HN基因和HLA-A,B, C的表达。结果:体外转染pVHN能显著地降低细胞表面唾液酸含量(P<0.05),有效地杀伤肿瘤细胞SMMC7721;荧光显微镜观察可见典型的细胞死亡形态学改变;实验组细胞与对照组比较HN表达差异显著,HLA-A,B,C表达上调。结论:HN基因在体外能够显著降低肿瘤细胞表面唾液酸含量,同时,使其高表达HN抗原,上调HLA-A,B,C表达,从而,可能增强了肿瘤细胞的抗原性和免疫识别,诱导了细胞SMMC7721死亡。 展开更多

关键词 新城疫病毒HN基因 细胞毒性 唾液酸 MHC-I 抗肿瘤

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表达新城疫病毒HN基因重组鸡痘病毒的构建及其抑瘤作用 被引量：5

3

作者 李雪梅 金宁一 +4 位作者 李霄 连海 管国芳 孙丽丽 陈立刚 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第2期112-115,共4页

目的：构建表达新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)HN基因的重组鸡痘病毒vFVHN,探讨vFVHN对体外培养人肝癌细胞SMMC7721的抑制作用和对小鼠荷肝癌模型的体内抑瘤效果。方法：以野生型鸡痘病毒(fowl poxvirus,FPV)282 E4株为载体,... 目的：构建表达新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)HN基因的重组鸡痘病毒vFVHN,探讨vFVHN对体外培养人肝癌细胞SMMC7721的抑制作用和对小鼠荷肝癌模型的体内抑瘤效果。方法：以野生型鸡痘病毒(fowl poxvirus,FPV)282 E4株为载体,构建表达新城疫病毒HN基因的重组鸡痘病毒vFVHN。采用5-溴-2-脱氧尿苷(5-bromo-2-deoxyribouri- dine,BrdU)加压法筛选重组体,并通过RT-PCR和Western blot等方法对其进行鉴定。采用噻唑蓝(methylthiazoletetrazolium,MTT)染色法检测vFVHN对人肝癌细胞SMMC7721的杀伤率,并通过检测抑瘤率观察其在C57BL/6小鼠荷肝癌模型的抑瘤效果。结果：成功构建重组鸡痘病毒vFVHN,其对SMMC7721细胞的杀伤率为43．37%,对C57BL/6小鼠肝癌模型的抑瘤率为20．65%。结论：重组鸡痘病毒vFVHN可有效杀伤体外培养的人肝癌细胞SMMC7721,并对C57BL/6小鼠荷肝癌模型体内的实体肿瘤有一定抑制作用。 展开更多

关键词 重组鸡痘病毒 HN基因 肝癌细胞SMMC7721

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共表达HIV-1 gp120与IFN-α重组鸡痘病毒诱导特异性CTL的初步研究 被引量：1

4

作者 江文正 金宁一 +2 位作者 李子健 张立树 金洪涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期254-256,共3页

目的:探讨共表达HIV -1gp12 0与IFN- α重组鸡痘病毒诱导小鼠产生特异性的CTL杀伤活性。方法:将重组鸡痘病毒经肌肉注射免疫BALB c小鼠后,制备小鼠脾淋巴细胞悬液。以免疫小鼠的脾淋巴细胞为效应细胞,以表达HIV- 1结构蛋白的P815细胞为... 目的:探讨共表达HIV -1gp12 0与IFN- α重组鸡痘病毒诱导小鼠产生特异性的CTL杀伤活性。方法:将重组鸡痘病毒经肌肉注射免疫BALB c小鼠后,制备小鼠脾淋巴细胞悬液。以免疫小鼠的脾淋巴细胞为效应细胞,以表达HIV- 1结构蛋白的P815细胞为靶细胞,用乳酸脱氢酶释放法测定免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性。结果:重组病毒可有效地诱导特异性CTL的产生,且重组病毒免疫组小鼠脾特异性CTL对靶细胞的杀伤活性显著高于FPV对照组(P <0 .0 1)和PBS对照组(P <0. 0 1)。结论:共表达HIV- 1gp12 0和IFN -α的重组鸡痘病毒可激发强烈的细胞免疫,可作为我国HIV- 1疫苗候选株。 展开更多

关键词 HIV-1 GP120 重组鸡痘病毒 细胞毒性T淋巴细胞

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尼帕病毒研究进展 被引量：4

5

作者 金明兰 鲁会军 《吉林畜牧兽医》 2010年第8期13-16,共4页

尼帕病毒(Nipahvirus,NiV)是近年来新发现的副粘病毒属的亨尼帕病毒,是一种引起人和猪的急性、高度致死性传染性疾病。主要侵害中枢神经系统和呼吸系统,引起急性发热、头痛和不同程度的意识障碍。本文就NiV的流行病学、临床症状、病理... 尼帕病毒(Nipahvirus,NiV)是近年来新发现的副粘病毒属的亨尼帕病毒,是一种引起人和猪的急性、高度致死性传染性疾病。主要侵害中枢神经系统和呼吸系统,引起急性发热、头痛和不同程度的意识障碍。本文就NiV的流行病学、临床症状、病理变化、病原学、分子生物特性、诊断、治疗等方面进行简单综述。 展开更多

关键词 尼帕病毒 生物学特性 致病机理 诊断

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pIRApoptinHNIL18对结肠癌细胞HCT-116的抑制效应

6

作者 郑洪玲 金宁一 +6 位作者 李霄 米志强 连海 李昌 田明尧 李雪梅 孙丽丽 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第1期42-46,共5页

目的:探讨联合应用凋亡素(apoptin)基因、新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶(he-magglutinin-neuramidinase,HN)基因及人白介素18(hIL-18)基因体外对人结肠癌细胞HCT-116的抑制效应。方法:重组质粒pIRApoptinHN... 目的:探讨联合应用凋亡素(apoptin)基因、新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶(he-magglutinin-neuramidinase,HN)基因及人白介素18(hIL-18)基因体外对人结肠癌细胞HCT-116的抑制效应。方法:重组质粒pIRApoptinHNIL18通过脂质体介导法体外转染人结肠癌细胞HCT-116,通过Western blotting和RT-PCR检测外源基因表达;采用AO/EB染色法检测pIRApoptinHNIL18对人结肠癌细胞HCT-116抑制作用;利用流式细胞术分析pIRApoptinHNIL18对人结肠癌细胞HCT-116线粒体膜电位(mitochondrial transmembrane potential,△Ψ)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用3,5-二羟基甲苯法测定唾液酸含量。结果:pIRApoptinHNIL18转染人结肠癌细胞HCT-116后,外源基因能够有效表达;肿瘤细胞生长受到抑制;线粒体△Ψ由(94.41±8.17)%下降到(30.70±8.01)%(P<0.05);唾液酸含量由(0.33±0.06)mmol/L下降到(0.09±0.03)mmol/L(P<0.01);ROS水平由(52.48±6.09)%升高到(68.98±7.26)%(P<0.05)。结论:pIRApoptinHNIL18可通过线粒体途径诱导细胞凋亡,从而抑制人结肠癌细胞HCT-116的生长。 展开更多

关键词 凋亡素基因 血凝素-神经氨酸酶基因 人白介素18基因 结肠癌细胞 线粒体 凋亡

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反转录病毒介导的稳定表达HIV-1 Gag蛋白和增强型绿色荧光蛋白细胞系的建立 被引量：4

7

作者 王婧 李昌 +6 位作者 李林溪 胡博 丛艳昭 任大勇 王卓越 杜寿文 金宁一 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期203-209,共7页

本研究旨在建立中国流行株人免疫缺陷病毒(HIV-1)衣壳蛋白(Gag)哺乳动物稳定表达细胞系。将HIV-1核心蛋白基因gag和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP依次串联插入反转录病毒载体pFB-neo,构建重组反转录病毒载体pFB-gag-EGFP,并与含有辅助病毒... 本研究旨在建立中国流行株人免疫缺陷病毒(HIV-1)衣壳蛋白(Gag)哺乳动物稳定表达细胞系。将HIV-1核心蛋白基因gag和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP依次串联插入反转录病毒载体pFB-neo,构建重组反转录病毒载体pFB-gag-EGFP,并与含有辅助病毒gag-pol和env基因的质粒pVPack-GP、pVPack-10A1共转染HEK293T细胞,包装出的反转录病毒感染小鼠骨髓瘤细胞SP2/0。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白EGFP表达,验证HIV-1核心蛋白Gag表达,G418抗性筛选阳性细胞。结果表明,HIV-1核心蛋白Gag和增强型绿色荧光蛋白可在SP2/0细胞中稳定表达,HIV-1核心蛋白gag基因稳定表达细胞系成功建立,为抗AIDS治疗用基因工程制剂及靶向药物的活性检测提供了理想方法。 展开更多

关键词 反转录病毒载体 人免疫缺陷病毒 核心蛋白 增强型绿色荧光蛋白 小鼠骨髓瘤细胞SP2/0

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基于SFVRNA复制子核酸疫苗pIRSFV-HN的构建及其体内外抑瘤作用 被引量：2

8

作者 张钰 金宁一 +7 位作者 李霄 朱继红 陈漉 刘立明 李昌 佟敬山 李群 陈勇志 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第1期20-24,共5页

目的:构建基于塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)RNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN,并探讨其体内外的抑瘤作用。方法:基于SFV RNA复制子和新城疫病毒HN基因构建核酸疫苗pIRSFV-HN,pIRSFV-HN转染人结肠癌细胞HC... 目的:构建基于塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)RNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN,并探讨其体内外的抑瘤作用。方法:基于SFV RNA复制子和新城疫病毒HN基因构建核酸疫苗pIRSFV-HN,pIRSFV-HN转染人结肠癌细胞HCT-116,以Western blotting检测转染后HCT-116细胞HN的表达水平,以AO/EB双荧光染色检测肿瘤细胞的凋亡,以MTT法检测疫苗对HCT-116细胞增殖的抑制。构建C57BL/6小鼠右后肢皮下荷H22腹水瘤细胞模型,瘤体内注射pIRSFV-HN(共3次),检测该小鼠血清IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ水平和特异性CTL活性。结果:成功构建基于SFV RNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN。结肠癌细胞HCT-116被疫苗转染后可有效表达HN蛋白,对照细胞则无表达;转染后HCT-116细胞出现凋亡的征象;该细胞的增殖受到明显抑制,最大抑制率达55.34%。移植瘤体内注射疫苗后,荷瘤小鼠血清IL-2、IFN-γ水平显著升高(P<0.05),其CTL活性也显著升高(P<0.01)。结论:基于SFVRNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN在体外可有效地抑制肿瘤细胞;在体内可促使免疫趋向Th1优势,提高其抑瘤免疫水平。 展开更多

关键词 塞姆利基森林病毒 RNA复制子 新城疫病毒 核酸疫苗 结肠癌 抑瘤作用 细胞毒性T淋巴细胞

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一起小鹅瘟病毒与链球菌混合感染的诊治

9

作者 金明兰 《养殖技术顾问》 2010年第6期183-183,共1页

小鹅瘟是由小鹅瘟病毒引起的急性、高度接触性、败血性传染病，主要侵害10～20日龄的雏鹅，传染性强，病程短，发病率和死亡率高。

关键词 小鹅瘟病毒 混合感染 链球菌 诊治 败血性传染病 接触性 传染性 死亡率

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猪繁殖与呼吸综合征、副猪嗜血杆菌病与大肠杆菌病混合感染的诊治

10

作者 金明兰 《养殖技术顾问》 2010年第5期106-106,共1页

1 发病情况 公主岭市某养殖户自繁自养40余头存栏母猪，表现突然发热、呼吸困难等症状后发生流产或产出的仔猪为死胎或木乃伊胎。同舍内有几头母猪也出现以上症状，新生仔猪刚产出时未见异常，但几天后出现呼吸道症状，陆续死亡。2～3... 1 发病情况 公主岭市某养殖户自繁自养40余头存栏母猪，表现突然发热、呼吸困难等症状后发生流产或产出的仔猪为死胎或木乃伊胎。同舍内有几头母猪也出现以上症状，新生仔猪刚产出时未见异常，但几天后出现呼吸道症状，陆续死亡。2～3周龄乳猪发病，断奶仔猪相继发病。2个月内该场共有35头母猪出现流产、早产现象，死亡仔猪78头。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征 副猪嗜血杆菌病 大肠杆菌病 混合感染 呼吸道症状 诊治 新生仔猪 发病情况

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猪瘟荧光抗体的制备及应用评价 被引量：1

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作者 陈义锋 赵亚荣 +2 位作者 赵建增 金扩世 金宁一 《中国兽药杂志》 2008年第12期16-19,共4页

制备猪瘟荧光抗体并用于猪只活体扁桃体组织抹/涂片检测。将制备的猪瘟高免血清采用硫酸铵分级沉淀法纯化免疫球蛋白,反向透析法标记荧光素,过葡聚糖凝胶柱(Sephadex G-50)去除游离荧光素,通过扁桃体组织匀浆吸附去除异嗜性或交叉反应... 制备猪瘟荧光抗体并用于猪只活体扁桃体组织抹/涂片检测。将制备的猪瘟高免血清采用硫酸铵分级沉淀法纯化免疫球蛋白,反向透析法标记荧光素,过葡聚糖凝胶柱(Sephadex G-50)去除游离荧光素,通过扁桃体组织匀浆吸附去除异嗜性或交叉反应抗体。以5%FCS做稀释液,以RT-PCR检测阳性样本的冰冻切片确定其最大稀释度为1/60,最佳工作浓度为1/30,阻抑试验证明荧光为特异荧光。用标记的荧光抗体检测活体扁桃体样本39份,检出阳性11份,与IDEXX猪瘟抗原检测试剂盒复核结果完全吻合。结果表明,本实验所制备的猪瘟荧光抗体具有很高的灵敏性和特异性,可用于猪瘟净化中扁桃体组织抹/涂片检测。 展开更多

关键词 猪瘟 荧光抗体 制备 应用评价

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