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应用核糖体展示技术筛选制备抗TNF-α人源抗体的研究
被引量：
8
1
作者
赵小玲
陈伟强
+5 位作者
李静梅
张素娟
田露芳
王亮
弓景波
杨志华
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期145-149,共5页
目的:构建人源核糖体展示抗体库,筛选制备抗TNF-α的特异性、高亲和力三结构域抗体(VH/K)。方法:应用核糖体抗体库技术,从类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞中分离、构建核糖体展示VH/K基因库;体外转录翻译后,以TNF-α重组蛋白作纯化抗...
目的:构建人源核糖体展示抗体库,筛选制备抗TNF-α的特异性、高亲和力三结构域抗体(VH/K)。方法:应用核糖体抗体库技术,从类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞中分离、构建核糖体展示VH/K基因库;体外转录翻译后,以TNF-α重组蛋白作纯化抗原,采用亲和富集法淘选TNF-α特异性抗体基因;将筛选获得的VH/K基因克隆并在原核系统pET22b(+)/BL21(DE3)中实现可溶性表达;表达产物经进行ELISA鉴定,并对阳性克隆的生物学特性进行初步研究。结果:成功构建了库容量约为6.7×1012核糖体展示VH/K抗体基因库,在180个筛选克隆中,其中两株抗体TRB21、TRB409显示出极高的ELISA值,序列分析表明两株克隆具有全新的人源抗以TNF-α抗体基因,他们不仅可以特异识别TNF-α而且可以抑制以TNF-α对L929细胞的细胞毒性。结论:人源抗TNF-α特异性抗体的获得,为进一步研制抗TNF-α的特异性、高亲和力基因工程抗体奠定了基础。核糖体展示技术为体外筛选制备全人源抗体提供了一种简便、有效的技术平台。
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关键词
核糖体展示
人源抗体
TNF-Α
类风湿性关节炎
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职称材料
题名
应用核糖体展示技术筛选制备抗TNF-α人源抗体的研究
被引量：
8
1
作者
赵小玲
陈伟强
李静梅
张素娟
田露芳
王亮
弓景波
杨志华
机构
军事医学科学院卫生学环境医学研究所应激医学研究室
解放军第
山西医科大学第一附属医院耳鼻喉科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期145-149,共5页
基金
天津市科技攻关资助项目(06YFGSH03600)
文摘
目的:构建人源核糖体展示抗体库,筛选制备抗TNF-α的特异性、高亲和力三结构域抗体(VH/K)。方法:应用核糖体抗体库技术,从类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞中分离、构建核糖体展示VH/K基因库;体外转录翻译后,以TNF-α重组蛋白作纯化抗原,采用亲和富集法淘选TNF-α特异性抗体基因;将筛选获得的VH/K基因克隆并在原核系统pET22b(+)/BL21(DE3)中实现可溶性表达;表达产物经进行ELISA鉴定,并对阳性克隆的生物学特性进行初步研究。结果:成功构建了库容量约为6.7×1012核糖体展示VH/K抗体基因库,在180个筛选克隆中,其中两株抗体TRB21、TRB409显示出极高的ELISA值,序列分析表明两株克隆具有全新的人源抗以TNF-α抗体基因,他们不仅可以特异识别TNF-α而且可以抑制以TNF-α对L929细胞的细胞毒性。结论:人源抗TNF-α特异性抗体的获得,为进一步研制抗TNF-α的特异性、高亲和力基因工程抗体奠定了基础。核糖体展示技术为体外筛选制备全人源抗体提供了一种简便、有效的技术平台。
关键词
核糖体展示
人源抗体
TNF-Α
类风湿性关节炎
Keywords
ribosome display
human antibody
TNF-α
rheumatoid arthritis
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用核糖体展示技术筛选制备抗TNF-α人源抗体的研究
赵小玲
陈伟强
李静梅
张素娟
田露芳
王亮
弓景波
杨志华
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
8
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