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猪瘟病毒E2蛋白重复多表位基因的融合表达及其兔体免疫保护研究
被引量：
1
1
作者
刘思国
涂长春
+3 位作者
余兴龙
张茂林
刘伯华
李作生
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期127-133,共7页
目的 :研究猪瘟病毒 (CSFV)E2蛋白重复多抗原表位基因的融合表达及其免疫攻毒保护作用。方法 :应用PCR方法扩增猪瘟病毒E2蛋白重复多抗原表位基因 ,构建重复多表位基因的原核重组表达质粒PGEX-3E ,进行融合蛋白的表达和纯化。ELISA和Wes...
目的 :研究猪瘟病毒 (CSFV)E2蛋白重复多抗原表位基因的融合表达及其免疫攻毒保护作用。方法 :应用PCR方法扩增猪瘟病毒E2蛋白重复多抗原表位基因 ,构建重复多表位基因的原核重组表达质粒PGEX-3E ,进行融合蛋白的表达和纯化。ELISA和Westernblot方法测定单表位融合蛋白GST-E和多表位融合蛋白GST-3E与猪抗CSFV的阳性血清和兔抗E2阳性血清的反应性 ,并进行融合蛋白的兔体免疫及免疫攻毒保护的比较研究。结果 :分子克隆和构建了原核重组表达质粒pGEX-3E ,表达和纯化了融合蛋白GST-3E ;单表位融合蛋白与重复多表位融合蛋白均能够与猪抗CSFV的阳性血清反应和兔抗E2的阳性血清产生免疫反应。在刺激兔体产生抗体方面 ,单表位融合蛋白刺激兔体产生抗体的能力较弱 ,而多表位融合蛋白则能够使兔体产生高效价的抗体。接种 10 0MID50 剂量猪瘟兔化弱毒 (HCLV)进行的兔体免疫攻毒保护试验表明 ,空白对照组和载体蛋白GST免疫组无保护作用 ,单表位融合蛋白免疫组具有一定的免疫保护作用 ,而重复多表位融合蛋白免疫组则完全能够抵抗猪瘟病毒的攻击。结论 :猪瘟病毒E2蛋白重复多表位的融合表达具有免疫保护作用 。
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关键词
猪瘟病毒
E2蛋白
蛋白质的融合表达
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职称材料
抗HIV-1外膜蛋白单链抗体基因的酵母表达和生物活性分析
被引量：
4
2
作者
李昌
金宁一
+4 位作者
王宏伟
刘玉生
于芳
佟敬山
胡宁宁
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第12期1144-1146,共3页
目的:构建含抗HIV-1外膜蛋白gp120单链抗体(scFv)基因的酵母表达载体,实现目的蛋白的分泌性表达,并检测其生物活性。方法:采用基因工程和重组DNA技术,从质粒pET28-scFv中切下目的基因片段,定向克隆入毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9的相应...
目的:构建含抗HIV-1外膜蛋白gp120单链抗体(scFv)基因的酵母表达载体,实现目的蛋白的分泌性表达,并检测其生物活性。方法:采用基因工程和重组DNA技术,从质粒pET28-scFv中切下目的基因片段,定向克隆入毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9的相应位点,构建重组酵母表达质粒pPIC9-scFv。BglⅡ线性化后,电转化入受体酵母菌GS115中,筛选阳性重组子,进行甲醇诱导表达,并用RT-PCR、SDS-PAGE、双抗体夹心Dot-ELISA法分析目的蛋白表达情况。结果:通过表型筛选、PCR鉴定获得阳性重组酵母工程菌,RT-PCR、SDS-PAGE分析表明目的蛋白得到很好表达,表达量可占培养液上清总蛋白量的18%,双抗体夹心Dot-ELISA法检测,表达产物能够特异识别重组HIV-1gp120抗原蛋白并与之发生特异性免疫反应,证明表达的重组scFv具有良好的抗体活性。结论:成功地实现了scFv基因的分泌性表达,为抗AIDS靶向治疗及进一步研究其抗HIV活性提供了依据。
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关键词
HIV-1
外膜蛋白
单链抗体
酵母分泌表达
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职称材料
题名
猪瘟病毒E2蛋白重复多表位基因的融合表达及其兔体免疫保护研究
被引量：
1
1
作者
刘思国
涂长春
余兴龙
张茂林
刘伯华
李作生
机构
中国农业
科学院
哈尔滨
兽医
研究所
解放军
军事医学科学院军事兽医研究所病毒室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期127-133,共7页
基金
国家自然科学基金重大项目资助 (3 9893 2 90 1)
文摘
目的 :研究猪瘟病毒 (CSFV)E2蛋白重复多抗原表位基因的融合表达及其免疫攻毒保护作用。方法 :应用PCR方法扩增猪瘟病毒E2蛋白重复多抗原表位基因 ,构建重复多表位基因的原核重组表达质粒PGEX-3E ,进行融合蛋白的表达和纯化。ELISA和Westernblot方法测定单表位融合蛋白GST-E和多表位融合蛋白GST-3E与猪抗CSFV的阳性血清和兔抗E2阳性血清的反应性 ,并进行融合蛋白的兔体免疫及免疫攻毒保护的比较研究。结果 :分子克隆和构建了原核重组表达质粒pGEX-3E ,表达和纯化了融合蛋白GST-3E ;单表位融合蛋白与重复多表位融合蛋白均能够与猪抗CSFV的阳性血清反应和兔抗E2的阳性血清产生免疫反应。在刺激兔体产生抗体方面 ,单表位融合蛋白刺激兔体产生抗体的能力较弱 ,而多表位融合蛋白则能够使兔体产生高效价的抗体。接种 10 0MID50 剂量猪瘟兔化弱毒 (HCLV)进行的兔体免疫攻毒保护试验表明 ,空白对照组和载体蛋白GST免疫组无保护作用 ,单表位融合蛋白免疫组具有一定的免疫保护作用 ,而重复多表位融合蛋白免疫组则完全能够抵抗猪瘟病毒的攻击。结论 :猪瘟病毒E2蛋白重复多表位的融合表达具有免疫保护作用 。
关键词
猪瘟病毒
E2蛋白
蛋白质的融合表达
Keywords
CSFV
E2 protein
Multieptope fusion protein
分类号
S825.651 [农业科学—畜牧学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
抗HIV-1外膜蛋白单链抗体基因的酵母表达和生物活性分析
被引量：
4
2
作者
李昌
金宁一
王宏伟
刘玉生
于芳
佟敬山
胡宁宁
机构
军事医学科学院军事兽医研究所病毒室
南方医科大学免疫学教研
室
长春理工大学
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第12期1144-1146,共3页
基金
吉林省科技厅资助项目(20060570)
文摘
目的:构建含抗HIV-1外膜蛋白gp120单链抗体(scFv)基因的酵母表达载体,实现目的蛋白的分泌性表达,并检测其生物活性。方法:采用基因工程和重组DNA技术,从质粒pET28-scFv中切下目的基因片段,定向克隆入毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9的相应位点,构建重组酵母表达质粒pPIC9-scFv。BglⅡ线性化后,电转化入受体酵母菌GS115中,筛选阳性重组子,进行甲醇诱导表达,并用RT-PCR、SDS-PAGE、双抗体夹心Dot-ELISA法分析目的蛋白表达情况。结果:通过表型筛选、PCR鉴定获得阳性重组酵母工程菌,RT-PCR、SDS-PAGE分析表明目的蛋白得到很好表达,表达量可占培养液上清总蛋白量的18%,双抗体夹心Dot-ELISA法检测,表达产物能够特异识别重组HIV-1gp120抗原蛋白并与之发生特异性免疫反应,证明表达的重组scFv具有良好的抗体活性。结论:成功地实现了scFv基因的分泌性表达,为抗AIDS靶向治疗及进一步研究其抗HIV活性提供了依据。
关键词
HIV-1
外膜蛋白
单链抗体
酵母分泌表达
Keywords
HIV-1
envelope glycoprotein
single chain Fv fragment （ scFv ）
secretory expression in pichia pastoris
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪瘟病毒E2蛋白重复多表位基因的融合表达及其兔体免疫保护研究
刘思国
涂长春
余兴龙
张茂林
刘伯华
李作生
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
1
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职称材料
2
抗HIV-1外膜蛋白单链抗体基因的酵母表达和生物活性分析
李昌
金宁一
王宏伟
刘玉生
于芳
佟敬山
胡宁宁
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
4
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