HPLC/ICP-MS在环境样品的痕量元素形态分析中的应用 被引量：27

1

作者 郭志英 于水 《质谱学报》 EI CAS CSCD 2006年第1期56-64,共9页

综述了高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术(HPLC/ICP-MS)的最新进展和工作特点,介绍了该技术在环境样品分析中的应用概况、接口类型和应用同位素稀释技术进行元素形态分析等。

关键词 环境样品 元素形态分析 联用技术 高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC/1CP-MS)

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采用活体成像技术监测肿瘤生长及转移模型的建立 被引量：9

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作者 徐元基 周涛 +3 位作者 杜芝燕 刘刚 巩伟丽 于晓妉 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2008年第1期19-22,I0003,共5页

目的采用活体成像技术监测稳定高表达荧光素酶报告基因的肿瘤细胞在小鼠体内生长及转移情况,为肿瘤治疗的药物研发提供新的有用工具。方法采用lipofectamine2000介导的基因转染方法,将pcDNA3·1/Luc载体转染小鼠高转移乳腺癌细胞株... 目的采用活体成像技术监测稳定高表达荧光素酶报告基因的肿瘤细胞在小鼠体内生长及转移情况,为肿瘤治疗的药物研发提供新的有用工具。方法采用lipofectamine2000介导的基因转染方法,将pcDNA3·1/Luc载体转染小鼠高转移乳腺癌细胞株4T1、EMT-6及结肠癌细胞株CT26,经G418抗性筛选及有限稀释法获得可稳定高表达荧光素酶的单克隆细胞;MTT法测定各转染细胞对不同化疗药物的抗性,并采用活体成像的方法检测各转染细胞在小鼠体内的成瘤和转移。结果获得了可稳定高表达荧光素酶基因的单克隆细胞株,该单克隆细胞株具有与亲本细胞系相同的对化疗药物的敏感性;将单克隆细胞株植入小鼠皮下,可采用活体成像技术准确监测肿瘤细胞体内生长及转移。结论采用活体成像技术构建的肿瘤动物模型是拓展肿瘤体内生长、转移及治疗相关研究的理想模型。 展开更多

关键词 荧光素酶 肿瘤细胞 活体成像 动物模型

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微丝相关新蛋白hHBRK1相互作用蛋白质的鉴定 被引量：3

3

作者 徐勤枝 丁新民 +4 位作者 霍艳英 张开泰 颜贤忠 周平坤 吴德昌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期471-475,共5页

为了鉴定hHBRK1的相互作用蛋白,通过DNA重组构建重组表达质粒pGEXhHBRK1,并以谷胱甘肽Sepharose4B亲合层析法,获得纯化的重组融合蛋白GSThHBRK1.以小鼠心肌组织为研究对象,采用GSTpulldown技术结合Western印迹法,证实hHBRK1与小鼠心肌... 为了鉴定hHBRK1的相互作用蛋白,通过DNA重组构建重组表达质粒pGEXhHBRK1,并以谷胱甘肽Sepharose4B亲合层析法,获得纯化的重组融合蛋白GSThHBRK1.以小鼠心肌组织为研究对象,采用GSTpulldown技术结合Western印迹法,证实hHBRK1与小鼠心肌肌钙蛋白TEa亚型(EacTnT)相互作用.结果提示,hHBRK1与EacTnT结合,可能参与心肌微丝的聚合,为小鼠cTnT众多的剪接体,提供了一种可能的功能定位. 展开更多

关键词 BRK1 肌钙蛋白 肌动蛋白 鉴定

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HER-2/neu配体结合区2蛋白的甘露糖化修饰 被引量：2

4

作者 徐明 郭宁 +3 位作者 王红霞 李爱玲 胡美茹 沈倍奋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期95-98,共4页

目的 :建立一种蛋白质甘露糖化修饰的方法。方法 :用离子交换层析和钴亲和层析法 ,纯化重组HER 2 /neu配体结合区2 (LBD2 )蛋白 ,并将纯化后的LBD2蛋白进行甘露糖化修饰。新合成的LBD2拟糖蛋白经质谱法检测后 ,用间苯二酚 硫酸法进一步... 目的 :建立一种蛋白质甘露糖化修饰的方法。方法 :用离子交换层析和钴亲和层析法 ,纯化重组HER 2 /neu配体结合区2 (LBD2 )蛋白 ,并将纯化后的LBD2蛋白进行甘露糖化修饰。新合成的LBD2拟糖蛋白经质谱法检测后 ,用间苯二酚 硫酸法进一步鉴定。结果 :纯化后LBD2蛋白的纯度可达 90 %。新合成的LBD2拟糖蛋白在质谱图上呈现相应于甘露糖修饰后蛋白质分子量的预期峰形。经间苯二酚 硫酸法检测 ,结合于LBD2蛋白上的化学基团为糖分子。结论 :获得了LBD2拟糖蛋白 。 展开更多

关键词 HER-2/NEU 配体结合区 甘露糖化 肿瘤疫苗

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凋亡相关蛋白(eIF-5A)——双向电泳分离、编码基因克隆和表达、多抗制备 被引量：1

5

作者 胡美茹 靳宝峰 +2 位作者 何昆 张学敏 沈倍奋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期573-575,共3页

蛋白质组是指特定细胞、组织或生物体在特定时间所表达的全部蛋白, 对其进行分析的学科被称为蛋白质组学[1].在蛋白质组学的诸多研究方法中, 出现最早且目前仍能提供蛋白质组分析所要求的高分辨率的唯一技术, 是双向电泳(2-D PAGE), 由... 蛋白质组是指特定细胞、组织或生物体在特定时间所表达的全部蛋白, 对其进行分析的学科被称为蛋白质组学[1].在蛋白质组学的诸多研究方法中, 出现最早且目前仍能提供蛋白质组分析所要求的高分辨率的唯一技术, 是双向电泳(2-D PAGE), 由于其可提高分辨率、重复性和简易性良好, 已成为蛋白质组研究的核心技术[2].2-D PAGE用于蛋白质组蛋白表达的全面分析时, 能够分离特定细胞和组织中成百上千的蛋白形式(包括翻译后的变异体).本研究中, 我们以白血病细胞系(Mo-7e细胞)为例, 采用2-D PAGE技术分离凋亡相关蛋白, 用两种常用的质谱方法MALDI-TOF/MS和ESI/MS/MS, 对其中的T点进行了鉴定.以设计的引物, 采用RT-PCR从基因组中钓取了该基因(eIF-5A), 并在E.coli中获得表达.纯化的重组蛋白免疫家兔获得了抗eIF-5A的多抗, 为后续的eIF-5A功能研究提供了检测工具.在应用宽pH范围胶条(pH 3～10)分离白血病细胞凋亡相关蛋白的基础上, 进一步采用窄pH范围胶条(pH 4～7)分离凋亡相关蛋白, 使分离和识别差异蛋白的效果明显得到改善, 且能够识别相同区域中更多的差异蛋白. 展开更多

关键词 双向电泳 凋亡相关蛋白 EIF-5A 基因克隆

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细胞凋亡研究中的一些热点问题 被引量：27

6

作者 张学敏 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期81-85,共5页

本文评述了当前细胞凋亡研究中存在的普遍问题和主要热点领域 ,并重点论述了半胱天冬酶 - 3( caspase- 3)和 Bcl- 2之间的相互关系 ,对细胞凋亡调控研究的现状以及以凋亡机制中关键性蛋白为靶标的新药设计等热点领域最新进展 .

关键词 细胞凋亡 BCL-2 半胱天冬酶 调控

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荧光素酶标记的BEL-7405细胞体内外成像及肿瘤动物模型建立 被引量：9

7

作者 孙宝昌 靳宝锋 +3 位作者 侗冬青 梁冰 李卫华 周涛 《中国比较医学杂志》 2008年第1期1-4,I0001,共5页

目的筛选表达荧光素酶(luciferase)基因的人单克隆肝癌细胞系,用活体成像技术(bioluminescentimaging)在细胞及整体动物水平检测其发光能力,为监测肿瘤生长和转移建立一种新的肿瘤动物模型。方法构建表达荧光素酶基因的真核表达载体并... 目的筛选表达荧光素酶(luciferase)基因的人单克隆肝癌细胞系,用活体成像技术(bioluminescentimaging)在细胞及整体动物水平检测其发光能力,为监测肿瘤生长和转移建立一种新的肿瘤动物模型。方法构建表达荧光素酶基因的真核表达载体并将其转入肝癌细胞(BEL-7405),用G418筛选稳定表达荧光素酶的单细胞克隆,在体外用活体成像技术评价其稳定发光能力。BALB/c nu/nu裸鼠皮下接种1×106个发光细胞使其成瘤,活体内观察肿瘤的生长及转移情况。结果在肝癌细胞中获得稳定表达荧光素酶的克隆,利用活体成像技术可检测到细胞克隆发光。将稳定表达荧光素酶的克隆皮下接种到裸鼠体内可成瘤,利用活体成像系统观察了肿瘤的生长过程,肿瘤发光随着观察时间的延长而增强,但是没有观察到肿瘤转移的现象。结论本研究筛选得到了稳定表达荧光素酶的肿瘤单克隆细胞系,结合活体成像技术,建立了一套新的能够用于活体内监测肿瘤生长的研究方法。 展开更多

关键词 荧光素酶 肝癌细胞BEL-7405 生物发光成像

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FlAsh在标记细胞内蛋白质中的应用 被引量：1

8

作者 满江红 巩伟丽 +3 位作者 杨怡 张飒 周涛 张德添 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期502-502,共1页

关键词 绿色荧光蛋白质GFP 荧光素-有机砷发夹型结合物 蛋白质标记 激光扫描共聚焦显微镜

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甘油醛-3-磷酸脱氢酶与人脑胶质瘤的相关性研究

9

作者 王雪原 杨新宇 +4 位作者 杨树源 于士柱 李卫华 王杰 张学敏 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2005年第1期35-39,共5页

目的探讨甘油醛-3-磷酸脱氢酶在神经胶质瘤中的表达及其临床意义。方法选择1999年11月-2004年1月手术切除,经病理证实的胶质瘤标本51例(胶质瘤组)、脑膜瘤9例(脑膜瘤组)、垂体瘤5例(垂体瘤组)。根据WHO2000年分级标准,胶质瘤组Ⅱ级胶质... 目的探讨甘油醛-3-磷酸脱氢酶在神经胶质瘤中的表达及其临床意义。方法选择1999年11月-2004年1月手术切除,经病理证实的胶质瘤标本51例(胶质瘤组)、脑膜瘤9例(脑膜瘤组)、垂体瘤5例(垂体瘤组)。根据WHO2000年分级标准,胶质瘤组Ⅱ级胶质瘤16例(星形细胞瘤13例、少突胶质细胞瘤1例、室管膜瘤1例、混合性星形-少突胶质细胞瘤1例);Ⅲ级胶质瘤17例(间变性星形细胞瘤9例、间变性少突胶质细胞瘤7例、间变性室管膜瘤1例);Ⅳ级胶质瘤18例(均为胶质母细胞瘤)。脑膜瘤组为Ⅰ级脑膜瘤6例(纤维型脑膜瘤),Ⅱ级脑膜瘤3例(非典型性脑膜瘤)。垂体瘤组中垂体生长激素/催乳素细胞腺瘤1例,垂体催乳素细胞腺瘤1例,垂体多激素细胞腺瘤3例。采用免疫组化方法检测脑肿瘤组织中甘油-3-磷酸脱氢酶的表达程度。结果(1)胶质瘤Ⅱ～Ⅳ级标本免疫组化染色均呈阳性反应,脑膜瘤、垂体瘤和正常对照组则为阴性反应。(2)不同病理分级的胶质瘤标本中甘油醛-3-磷酸脱氢酶表达水平各异,其中胶质瘤Ⅱ级者甘油醛-3-磷酸脱氢酶阳性细胞检出率为12.8%,Ⅲ级22.9%,Ⅳ级44.5%,三者间差异具有显著性意义(P<0.05);而且甘油醛-3-磷酸脱氢酶阳性细胞检出率与胶质瘤的病理分级呈线性正相关(r=0.606,P<0.05)。结论甘油醛-3-磷酸脱氢酶蛋白表达水平的增高在胶? 展开更多

关键词 人脑胶质瘤 少突胶质细胞瘤 垂体瘤 腺瘤 脑膜瘤 脱氢酶 甘油醛 瘤标 室管膜瘤 星形细胞瘤

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NMR谱在确定克罗烷二萜立体构型中的运用

10

作者 谢宁 冯锐 +1 位作者 闵知大 赵守训 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第3期138-140,共3页

１９－去甲基克罗烷（１９－Ｎｏｒ－ｎｅｏｃｌｅｒｏｄａｎｅ）二萜的化学结构较为复杂，含有多个手性碳。本文对此类化合物进行了系统的核磁共振（ＮＭＲ）谱研究，首次提出运用Ｈ－６、Ｈ－１０及Ｃ－６，Ｃ－１０的化学位移（δ）... １９－去甲基克罗烷（１９－Ｎｏｒ－ｎｅｏｃｌｅｒｏｄａｎｅ）二萜的化学结构较为复杂，含有多个手性碳。本文对此类化合物进行了系统的核磁共振（ＮＭＲ）谱研究，首次提出运用Ｈ－６、Ｈ－１０及Ｃ－６，Ｃ－１０的化学位移（δ）值推测这类二萜化合物的绝对构型，并从理论上对此实验结果进行了论证。运用这一方法，推证了两个新化合物庐山香科素丁（ｔｅｕｐｅｒｎｉｎＤ１）和穗花香科素（ｔｅｕｐｏｎｉｎ２）的立体构型，与圆二色散（ＣＤ）光谱法及Ｘ射线单晶衍射法所得结果完全一致。 展开更多

关键词 克罗烷二萜 立体构型 化学位移植

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铁轴草中的黄酮化合物(英文)

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作者 谢宁 闵知大 +1 位作者 赵守训 冯锐 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第4期200-202,共3页

从唇形科香科科属植物铁轴草(Teucrium quadrifarium)中分离得的四个黄酮化合物。经UV,IR,MS,NMR以及化学反应等方法,分别鉴定其结构为:5,4′,5′-三羟基-6,2′-二甲氧基黄酮(1),柳穿鱼新甙(2),金合欢素(3)和洋芹素(4)。其中化合物1为... 从唇形科香科科属植物铁轴草(Teucrium quadrifarium)中分离得的四个黄酮化合物。经UV,IR,MS,NMR以及化学反应等方法,分别鉴定其结构为:5,4′,5′-三羟基-6,2′-二甲氧基黄酮(1),柳穿鱼新甙(2),金合欢素(3)和洋芹素(4)。其中化合物1为新化合物,化合物2为首次从唇形科中发现,其^(13)CNMR谱也为首次报道。 展开更多

关键词 铁轴草 黄酮化合物 鉴定

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激光扫描共聚焦显微镜技术用于eIF-5A与syntenin及TIMP4的共定位及相互作用研究

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作者 周涛 巩伟丽 《电子显微学报》 CAS CSCD 2005年第4期399-399,共1页

关键词 激光扫描共聚焦显微镜 EIF-5A 显微镜技术 相互作用 共定位 laser 肿瘤细胞 药物作用 设计原理

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IFI27L2慢病毒稳定干涉细胞系的建立以及其在炎症小体激活中的功能鉴定

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作者 张宇程 涂海情 +2 位作者 徐广 谭博 李慧艳 《科学技术与工程》 北大核心 2015年第24期29-33,51,共6页

通过构建IFI27L2分子的慢病毒干涉表达载体,建立IFI27L2表达下调的THP1、U937稳定细胞系。将携带特异性干涉IFI27L2的DNA片段克隆插入p LKO.1载体中,并制备携带不同干涉序列的慢病毒颗粒。将获得的慢病毒颗粒感染THP1、U937细胞,建立稳... 通过构建IFI27L2分子的慢病毒干涉表达载体,建立IFI27L2表达下调的THP1、U937稳定细胞系。将携带特异性干涉IFI27L2的DNA片段克隆插入p LKO.1载体中,并制备携带不同干涉序列的慢病毒颗粒。将获得的慢病毒颗粒感染THP1、U937细胞,建立稳定干涉细胞系,经Real-time PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白质水平检测THP1、U937细胞中内源IFI27L2的干涉效果。构建的重组质粒经酶切鉴定shRNA正确插入慢病毒载体,测序鉴定序列正确;并有干涉效果。成功制备了稳定干涉IFI27L2的慢病毒颗粒,建立IFI27L2稳定下调的THP1、U937两种细胞系;并初步证明稳定干涉IFI27L2能够抑制NLRP3炎症小体的激活。 展开更多

关键词 IFI27L2 慢病毒 稳定干涉 NLRP3炎症小体

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