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质粒表达型siRNA对SARS-CoV复制与感染干扰的初步研究
被引量：
5
1
作者
李阳
倪兵
+6 位作者
石辛甫
王希良
何仰东
肖宇
姜曼
黎万玲
吴玉章
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期91-94,共4页
目的 构建针对SARS CoV的特异性siRNA质粒 ,利用RNA干扰技术抑制该病毒复制与感染。方法 根据SARS CoV的全长基因序列 ,以 4个不同的部位为靶点 ,分别设计、合成含有 19nt干扰序列的一段寡核苷酸 ,将两两互补的寡核苷酸经退火后所形...
目的 构建针对SARS CoV的特异性siRNA质粒 ,利用RNA干扰技术抑制该病毒复制与感染。方法 根据SARS CoV的全长基因序列 ,以 4个不同的部位为靶点 ,分别设计、合成含有 19nt干扰序列的一段寡核苷酸 ,将两两互补的寡核苷酸经退火后所形成的序列克隆到pSilencer 3 .1 H1载体中 ,构建表达siRNA的质粒。采用脂质体法将质粒转染VeroE6细胞 ,经潮霉素抗性筛选后 ,再对稳定表达的细胞进行细胞病变、病毒空斑形成和MTT实验 ,以观察干扰效应。结果 对所构建的质粒分别测序 ,确定其含有siRNA的序列与预期的特异性干扰序列一致。用不同浓度的SARS CoV感染转染质粒后的细胞 ,与阴性对照相比 ,其细胞病变减轻、活细胞显著增加 ,病毒空斑明显减少。结论 利用RNA干扰能有效的抑制SARS CoV在细胞中的复制 ,并对细胞有保护作用 ,为预防、治疗SARS提供了新的思路和方法。
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关键词
SARS病毒
RNA干扰
小干扰RNA
基因治疗
在线阅读
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职称材料
RNA干扰能有效抑制SARS相关冠状病毒复制
被引量：
3
2
作者
李阳
倪兵
+6 位作者
石辛甫
吴玉章
王希良
何仰东
肖宇
姜曼
黎万玲
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期F002-F002,共1页
关键词
RNA干扰
SARS
冠状病毒
复制
在线阅读
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职称材料
抗牛型结核杆菌单克隆抗体的制备、鉴定及其纯化抗原的研究
被引量：
1
3
作者
李晓明
黄蓉蓉
+1 位作者
庄玉辉
苏新
《单克隆抗体通讯》
CSCD
1992年第2期6-11,共6页
用牛结核杆菌超声抗原及纯蛋白衍生物(PPD)免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选和克隆化得到9株稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,应用抗原蛋白酶消化试验、抗原过碘酸氧化试验、加成试验及免疫印迹分析等,表明9株McAbs所识别抗原决定...
用牛结核杆菌超声抗原及纯蛋白衍生物(PPD)免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选和克隆化得到9株稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,应用抗原蛋白酶消化试验、抗原过碘酸氧化试验、加成试验及免疫印迹分析等,表明9株McAbs所识别抗原决定簇均对蛋白酶敏感,其中2株的抗原决定簇既存在于蛋白质中,又存在于脂类中。9株McAbs所识别的抗原分子量均为30kDa。4株均作用于同一抗原决定簇,其它McAb各作用于另外互不相同的抗原决定簇。免疫电镜观察,McAb 1A3所作用的蛋白质抗原主要分布在细胞内,少量分布于细菌胞壁。9株McAbs除1株外均显示出很强的特异性,其中4株仅与牛型结核茵反应阳性。利用McAb 1A3通过亲和层析柱纯化牛型结核杆菌PPD后,得到亲和层析纯抗原Ag 1A3,它仅与牛型结核杆菌免疫血清反应阳性,与其它分枝杆菌免疫血清反应阴性;对牛型结核杆菌致敏的豚鼠皮肤反应阳性,而与人型及BCG致敏豚鼠皮肤反应阴性。
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关键词
牛型结核杆菌
单克隆抗体
抗原
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职称材料
题名
质粒表达型siRNA对SARS-CoV复制与感染干扰的初步研究
被引量：
5
1
作者
李阳
倪兵
石辛甫
王希良
何仰东
肖宇
姜曼
黎万玲
吴玉章
机构
第
三
军医大学全军免疫学研究所
军事医学科学院五所三室
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期91-94,共4页
基金
国家重点基础研究发展规划资助项目 ("973"项目 ) ( 2 0 0 3CB514 10 8)~~
文摘
目的 构建针对SARS CoV的特异性siRNA质粒 ,利用RNA干扰技术抑制该病毒复制与感染。方法 根据SARS CoV的全长基因序列 ,以 4个不同的部位为靶点 ,分别设计、合成含有 19nt干扰序列的一段寡核苷酸 ,将两两互补的寡核苷酸经退火后所形成的序列克隆到pSilencer 3 .1 H1载体中 ,构建表达siRNA的质粒。采用脂质体法将质粒转染VeroE6细胞 ,经潮霉素抗性筛选后 ,再对稳定表达的细胞进行细胞病变、病毒空斑形成和MTT实验 ,以观察干扰效应。结果 对所构建的质粒分别测序 ,确定其含有siRNA的序列与预期的特异性干扰序列一致。用不同浓度的SARS CoV感染转染质粒后的细胞 ,与阴性对照相比 ,其细胞病变减轻、活细胞显著增加 ,病毒空斑明显减少。结论 利用RNA干扰能有效的抑制SARS CoV在细胞中的复制 ,并对细胞有保护作用 ,为预防、治疗SARS提供了新的思路和方法。
关键词
SARS病毒
RNA干扰
小干扰RNA
基因治疗
Keywords
SARS-CoV
RNA interference
small interfering RNA
gene therapy
分类号
R373.1 [医药卫生—病原生物学]
R394-33 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
RNA干扰能有效抑制SARS相关冠状病毒复制
被引量：
3
2
作者
李阳
倪兵
石辛甫
吴玉章
王希良
何仰东
肖宇
姜曼
黎万玲
机构
第
三
军医大学基础
医学
部全军免疫学研究所
军事医学科学院五所三室
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期F002-F002,共1页
基金
国家重点基础研究发展规划资助项目 ("973"项目 ) :SARS防治基础研究 ( 2 0 0 3CB514 10 8)~~
关键词
RNA干扰
SARS
冠状病毒
复制
分类号
R563.1 [医药卫生—呼吸系统]
R373.1 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
抗牛型结核杆菌单克隆抗体的制备、鉴定及其纯化抗原的研究
被引量：
1
3
作者
李晓明
黄蓉蓉
庄玉辉
苏新
机构
解放军
军事医学科学院五所三室
出处
《单克隆抗体通讯》
CSCD
1992年第2期6-11,共6页
文摘
用牛结核杆菌超声抗原及纯蛋白衍生物(PPD)免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选和克隆化得到9株稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,应用抗原蛋白酶消化试验、抗原过碘酸氧化试验、加成试验及免疫印迹分析等,表明9株McAbs所识别抗原决定簇均对蛋白酶敏感,其中2株的抗原决定簇既存在于蛋白质中,又存在于脂类中。9株McAbs所识别的抗原分子量均为30kDa。4株均作用于同一抗原决定簇,其它McAb各作用于另外互不相同的抗原决定簇。免疫电镜观察,McAb 1A3所作用的蛋白质抗原主要分布在细胞内,少量分布于细菌胞壁。9株McAbs除1株外均显示出很强的特异性,其中4株仅与牛型结核茵反应阳性。利用McAb 1A3通过亲和层析柱纯化牛型结核杆菌PPD后,得到亲和层析纯抗原Ag 1A3,它仅与牛型结核杆菌免疫血清反应阳性,与其它分枝杆菌免疫血清反应阴性;对牛型结核杆菌致敏的豚鼠皮肤反应阳性,而与人型及BCG致敏豚鼠皮肤反应阴性。
关键词
牛型结核杆菌
单克隆抗体
抗原
Keywords
mycobacterium bovis, antibodies, monoclonal
antigenic determinants
purified antigen
分类号
R392－33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
质粒表达型siRNA对SARS-CoV复制与感染干扰的初步研究
李阳
倪兵
石辛甫
王希良
何仰东
肖宇
姜曼
黎万玲
吴玉章
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
5
在线阅读
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职称材料
2
RNA干扰能有效抑制SARS相关冠状病毒复制
李阳
倪兵
石辛甫
吴玉章
王希良
何仰东
肖宇
姜曼
黎万玲
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
抗牛型结核杆菌单克隆抗体的制备、鉴定及其纯化抗原的研究
李晓明
黄蓉蓉
庄玉辉
苏新
《单克隆抗体通讯》
CSCD
1992
1
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职称材料
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