目的探讨α吡喃酮类化合物Rasfonin对鸟苷酸交换因子SOS1表达的调控作用及其机制。方法(1)将MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞分别分为溶剂对照组和Rasfonin组(1、5、10和15μmol·L^(-1)),处理24 h后CCK-8法检测MCF-7、Calu-1和UM-UC-3...目的探讨α吡喃酮类化合物Rasfonin对鸟苷酸交换因子SOS1表达的调控作用及其机制。方法(1)将MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞分别分为溶剂对照组和Rasfonin组(1、5、10和15μmol·L^(-1)),处理24 h后CCK-8法检测MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞存活率。将MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞分别分为细胞对照组(培养基)、表皮生长因子组(EGF 50μg·L^(-1)处理5 min),EGF+Rasfonin组(Rasfonin分别以5和10μmol·L^(-1)预处理不同时间后,再EGF 50μg·L^(-1)处理5 min),实时荧光定量PCR和Western印迹法检测MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞中SOS1 m RNA和蛋白表达水平。(2)将阴性对照(NC)质粒、KRASWT质粒和KRASG12C质粒分别与SOS1质粒共转染至293T细胞,转染后分为溶剂对照组和Rasfonin组(1、5和10μmol·L^(-1)),处理12 h后采用双荧光素酶报告基因实验检测SOS1启动子活性。将质粒KRAS^(WT)、KRAS^(G12C)、NC+SOS1、KRAS^(WT)+SOS1和KRAS^(G12C)+SOS1分别转染至293T细胞,分为EGF组和EGF+Rasfonin组(Rasfonin 10μmol·L^(-1)预处理12 h后,再EGF处理5 min),Western印迹法检测293T细胞中SOS1蛋白表达水平。结果(1)与溶剂对照组相比,Rasfonin 5、10和15μmol·L^(-1)显著抑制Calu-1和UM-UC-3细胞增殖,IC_(50)分别为8.22和4.94μmol·L^(-1),MCF-7细胞的IC50为45.15μmol·L^(-1)。Rasfonin处理3 h MCF-7细胞SOS1 m RNA水平升高;Rasfonin处理1 h Calu-1细胞SOS1 m RNA水平升高,3和6 h SOS1 m RNA水平降低;Rasfonin处理3 h UM-UC-3细胞SOS1 m RNA表达,6 h降低。与EGF组相比,EGF+Rasfonin组MCF-7细胞的SOS1蛋白表达水平无显著变化,Calu-1与UM-UC-3细胞的SOS1蛋白表达水平显著降低。(2)与溶剂对照组相比,Rasfonin对SOS1单表达组SOS1启动子活性无显著影响,但SOS1与KRAS^(WT)或KRAS^(G12C)蛋白共表达时,SOS1启动子活性被Rasfonin显著抑制。与EGF组相比,Rasfonin对SOS1单表达组及SOS1+KRAS^(WT)共表达组的SOS1蛋白表达水平无显著变化,SOS1+KRAS^(G12C)共表达组的SOS1蛋白表达水平显著降低。结论Rasfonin通过KRASG12C依赖性途径抑制SOS1表达,这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。展开更多
目的:考察高血浆蛋白结合率药物对千金藤素血浆蛋白结合率的影响。方法:采用分子对接方法观察千金藤素与血浆蛋白之间的结合效应,使用Discovery Studio 2021筛选上市药物分子库中与千金藤素竞争结合药物,建立千金藤素在犬血浆及透析外...目的:考察高血浆蛋白结合率药物对千金藤素血浆蛋白结合率的影响。方法:采用分子对接方法观察千金藤素与血浆蛋白之间的结合效应,使用Discovery Studio 2021筛选上市药物分子库中与千金藤素竞争结合药物,建立千金藤素在犬血浆及透析外液中含量测定方法。血浆样品和磷酸盐缓冲溶液样品经液-液萃取法处理后,采用液相色谱串联质谱联用仪进行测定。采用平衡透析法测定利奥西胍、迪拉马尼、孟鲁司特和安倍生坦合用时千金藤素的血浆蛋白结合率。结果:通过分子对接,从上市药物分子库中筛选与千金藤素具有相同结合位点的高血浆蛋白结合候选药物,这些药物可能与千金藤素竞争结合血浆蛋白。选择利奥西胍、迪拉马尼、孟鲁司特和安倍生坦4种药物进行体外竞争结合试验。结果表明,千金藤素与犬血浆的蛋白结合率很高,达到(99.47±0.13)%。在测试浓度下,合并利奥西胍、孟鲁司特和安倍生坦对千金藤素的血浆蛋白结合率没有显著影响。合并低浓度(200 ng/mL)的迪拉马尼对千金藤素的血浆蛋白结合率也没有显著影响,而合并高浓度(500 ng/mL)的迪拉马尼则显著增加血浆中游离千金藤素的浓度。结论:利奥西胍、孟鲁司特、安倍生坦和低浓度迪拉马尼与千金藤素不存在明显的竞争关系,而高浓度迪拉马尼能够使千金藤素的血浆蛋白结合率降低。展开更多
文摘目的探讨α吡喃酮类化合物Rasfonin对鸟苷酸交换因子SOS1表达的调控作用及其机制。方法(1)将MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞分别分为溶剂对照组和Rasfonin组(1、5、10和15μmol·L^(-1)),处理24 h后CCK-8法检测MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞存活率。将MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞分别分为细胞对照组(培养基)、表皮生长因子组(EGF 50μg·L^(-1)处理5 min),EGF+Rasfonin组(Rasfonin分别以5和10μmol·L^(-1)预处理不同时间后,再EGF 50μg·L^(-1)处理5 min),实时荧光定量PCR和Western印迹法检测MCF-7、Calu-1和UM-UC-3细胞中SOS1 m RNA和蛋白表达水平。(2)将阴性对照(NC)质粒、KRASWT质粒和KRASG12C质粒分别与SOS1质粒共转染至293T细胞,转染后分为溶剂对照组和Rasfonin组(1、5和10μmol·L^(-1)),处理12 h后采用双荧光素酶报告基因实验检测SOS1启动子活性。将质粒KRAS^(WT)、KRAS^(G12C)、NC+SOS1、KRAS^(WT)+SOS1和KRAS^(G12C)+SOS1分别转染至293T细胞,分为EGF组和EGF+Rasfonin组(Rasfonin 10μmol·L^(-1)预处理12 h后,再EGF处理5 min),Western印迹法检测293T细胞中SOS1蛋白表达水平。结果(1)与溶剂对照组相比,Rasfonin 5、10和15μmol·L^(-1)显著抑制Calu-1和UM-UC-3细胞增殖,IC_(50)分别为8.22和4.94μmol·L^(-1),MCF-7细胞的IC50为45.15μmol·L^(-1)。Rasfonin处理3 h MCF-7细胞SOS1 m RNA水平升高;Rasfonin处理1 h Calu-1细胞SOS1 m RNA水平升高,3和6 h SOS1 m RNA水平降低;Rasfonin处理3 h UM-UC-3细胞SOS1 m RNA表达,6 h降低。与EGF组相比,EGF+Rasfonin组MCF-7细胞的SOS1蛋白表达水平无显著变化,Calu-1与UM-UC-3细胞的SOS1蛋白表达水平显著降低。(2)与溶剂对照组相比,Rasfonin对SOS1单表达组SOS1启动子活性无显著影响,但SOS1与KRAS^(WT)或KRAS^(G12C)蛋白共表达时,SOS1启动子活性被Rasfonin显著抑制。与EGF组相比,Rasfonin对SOS1单表达组及SOS1+KRAS^(WT)共表达组的SOS1蛋白表达水平无显著变化,SOS1+KRAS^(G12C)共表达组的SOS1蛋白表达水平显著降低。结论Rasfonin通过KRASG12C依赖性途径抑制SOS1表达,这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。
文摘目的:考察高血浆蛋白结合率药物对千金藤素血浆蛋白结合率的影响。方法:采用分子对接方法观察千金藤素与血浆蛋白之间的结合效应,使用Discovery Studio 2021筛选上市药物分子库中与千金藤素竞争结合药物,建立千金藤素在犬血浆及透析外液中含量测定方法。血浆样品和磷酸盐缓冲溶液样品经液-液萃取法处理后,采用液相色谱串联质谱联用仪进行测定。采用平衡透析法测定利奥西胍、迪拉马尼、孟鲁司特和安倍生坦合用时千金藤素的血浆蛋白结合率。结果:通过分子对接,从上市药物分子库中筛选与千金藤素具有相同结合位点的高血浆蛋白结合候选药物,这些药物可能与千金藤素竞争结合血浆蛋白。选择利奥西胍、迪拉马尼、孟鲁司特和安倍生坦4种药物进行体外竞争结合试验。结果表明,千金藤素与犬血浆的蛋白结合率很高,达到(99.47±0.13)%。在测试浓度下,合并利奥西胍、孟鲁司特和安倍生坦对千金藤素的血浆蛋白结合率没有显著影响。合并低浓度(200 ng/mL)的迪拉马尼对千金藤素的血浆蛋白结合率也没有显著影响,而合并高浓度(500 ng/mL)的迪拉马尼则显著增加血浆中游离千金藤素的浓度。结论:利奥西胍、孟鲁司特、安倍生坦和低浓度迪拉马尼与千金藤素不存在明显的竞争关系,而高浓度迪拉马尼能够使千金藤素的血浆蛋白结合率降低。
