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蓖麻毒蛋白A链基因RNAi转化研究 被引量:3
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作者 陈永胜 王永佳 +3 位作者 王莹 黄凤兰 李国瑞 王文跃 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期39-42,共4页
通过基因沉默技术调控蓖麻毒蛋白A链基因的表达,以期获得低毒蓖麻新材料。利用基因克隆技术获得蓖麻毒蛋白A链基因762bp片段,命名为RTA基因。进一步利用该基因构建了植物RNAi表达载体pBI-RTA-S-AS,通过农杆菌介导法转化蓖麻子叶节,用卡... 通过基因沉默技术调控蓖麻毒蛋白A链基因的表达,以期获得低毒蓖麻新材料。利用基因克隆技术获得蓖麻毒蛋白A链基因762bp片段,命名为RTA基因。进一步利用该基因构建了植物RNAi表达载体pBI-RTA-S-AS,通过农杆菌介导法转化蓖麻子叶节,用卡那抗性筛选转化再生植株,PCR进一步鉴定转基因植株。结果表明:克隆得到目的基因长762bp,与预期结果一致;卡那抗性筛选和PCR鉴定结果显示,获得了3株转基因阳性植株。 展开更多
关键词 蓖麻毒蛋白 RNAI RNAi表达载体 遗传转化
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蓖麻标雌/单雌/两性系花序MSAP反应体系的建立 被引量:5
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作者 赵永 朱国立 +8 位作者 何智彪 包春光 陈晓凤 姜桐桐 李佳会 黄凤兰 周婷婷 常旭丰 刘佳琪 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第3期114-120,共7页
为了建立Lm型雌性系蓖麻不同发育时期的标雌/单雌/两性系花序MSAP反应体系,提取不同类型不同发育时期的花序基因组DNA,混合成基因池;用EcoRⅠ和HpaⅡ/MspⅠ的组合,12 h可将DNA酶切完全;16℃条件下,将酶切产物与EcoRⅠ、HpaⅡ/MspⅠ接头... 为了建立Lm型雌性系蓖麻不同发育时期的标雌/单雌/两性系花序MSAP反应体系,提取不同类型不同发育时期的花序基因组DNA,混合成基因池;用EcoRⅠ和HpaⅡ/MspⅠ的组合,12 h可将DNA酶切完全;16℃条件下,将酶切产物与EcoRⅠ、HpaⅡ/MspⅠ接头过夜连接;连接产物用于预扩增。优化后的预扩增反应体系为10×PCR Buffer 2.5μL、d NTPs(10 mmol/L)2.5μL、Mg2+(25 mmol/L)2.0μL、模板2.0μL、E0扩增引物(10pmol/μL)1.5μL、H0扩增引物(10 pmol/μL)1.5μL、LA Taq(5 U/μL)0.25μL、dd H2O 12.75μL。预扩增产物稀释10倍后用于选择性扩增。优化后的选择性扩增体系为10×PCR Buffer 2.5μL、d NTPs(10 mmol/L)2.0μL、Mg2+(25mmol/L)4.0μL、模板3.0μL、EX扩增引物(10 pmol/μL)1.0μL、H/MX扩增引物(10 pmol/μL)1.0μL、LA Taq(5U/μL)0.30μL、dd H2O 11.2μL。 展开更多
关键词 蓖麻 花序 MSAP
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蓖麻种子cDNA-AFLP反应体系的优化 被引量:2
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作者 陈晓凤 黄凤兰 +5 位作者 李国瑞 王文跃 张智勇 包春光 吴春桃 张现世 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期74-80,共7页
以蓖麻种子为研究对象,优化其cDNA-AFLP反应体系,为研究不同蓖麻材料或不同发育阶段的蓖麻种子内脂肪酸基因表达差异奠定理论基础。试验结果表明:提取蓖麻种子总RNA;将RNA逆转录为cDNA,用高频限制性内切酶EcoRⅠ和MseⅠ进行酶切,并与Eco... 以蓖麻种子为研究对象,优化其cDNA-AFLP反应体系,为研究不同蓖麻材料或不同发育阶段的蓖麻种子内脂肪酸基因表达差异奠定理论基础。试验结果表明:提取蓖麻种子总RNA;将RNA逆转录为cDNA,用高频限制性内切酶EcoRⅠ和MseⅠ进行酶切,并与EcoRⅠ、MseⅠ接头连接,得到连接产物;连接产物稀释40倍作为预扩增模板,进行预扩增;优化选择性扩增反应体系,得到最佳反应体系为:10×PCR Buffer 2.0μL、dNTPs(10 mmol/L)1.4μL、Mg2+(25 mmol/L)1.4μL、模板稀释80倍1.0μL、Ex扩增引物(50 pmol/μL)1.2μL、My扩增引物(50 pmol/μL)1.2μL、LA Taq(5 U/μL)0.2μL、ddH2O 11.6μL。采用优化后的体系,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对256对选择性引物进行筛选,得到适合蓖麻种子cDNA-AFLP分析的选择性扩增引物10对。 展开更多
关键词 蓖麻 脂肪酸 CDNA-AFLP
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半支莲快繁技术培养
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作者 姜桐桐 黄凤兰 +7 位作者 陈晓凤 赵永 李佳会 杨丽凤 常如慧 周婷婷 常旭丰 刘佳琪 《北方农业学报》 2017年第4期109-112,共4页
半支莲为马齿苋科马齿苋属一生或多年生肉质草本花卉,具有很高的观赏价值、药用功效和保健价值。为实现半支莲的快速繁殖,满足市场需求,文章以半支莲茎节作为外植体,采用腋芽生枝途径对半支莲进行快繁,筛选出最佳消毒时间以及促进腋芽... 半支莲为马齿苋科马齿苋属一生或多年生肉质草本花卉,具有很高的观赏价值、药用功效和保健价值。为实现半支莲的快速繁殖,满足市场需求,文章以半支莲茎节作为外植体,采用腋芽生枝途径对半支莲进行快繁,筛选出最佳消毒时间以及促进腋芽生枝阶段培养基中PGR最佳浓度配比和芽诱导生根阶段培养基中最佳PGR浓度配比。结果表明:半支莲茎节用0.1%氯化汞处理5.5 min为最佳消毒时间;添加有2.5 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA生枝数最多,添加有0.5mg/L NAA的PGR配比的培养基中芽的诱导率最高。 展开更多
关键词 半支莲 快繁技术
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