miR-125b-5p修饰脐带间充质干细胞对系统性红斑狼疮的免疫调控机制

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作者 武志慧 胡明智 +6 位作者 赵巧英 吕凤凤 张晶莹 张伟 王永福 孙晓林 王慧 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期860-867,共8页

目的:研究miR-125b-5p修饰脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)的免疫调控作用机制。方法:实时荧光定量PCR检测miR-125b-5p在UC-MSCs和SLE患者、健... 目的:研究miR-125b-5p修饰脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)的免疫调控作用机制。方法:实时荧光定量PCR检测miR-125b-5p在UC-MSCs和SLE患者、健康体检者外周血单个核细胞中的表达水平;Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测miR-125b-5p对UC-MSCs的凋亡影响;每周对MRL/lpr小鼠进行尾静脉注射UC-MSCs, 5周后流式细胞术检测各组小鼠脾细胞T淋巴细胞亚群分化情况;ELISA法检测各组MRL/lpr小鼠血清中白细胞介素(interleukin, IL)-4和IL-17A表达水平;苏木精-伊红染色法观察MRL/lpr小鼠肺和肾组织病理变化。结果:与健康对照组相比,SLE患者外周血单个核细胞中miR-125b-5p的表达水平显著下调(P<0.01);与UC-MSCs相比,miR-125b-5p转染UC-MSCs组miR-125b-5p的表达水平显著上调(P<0.01)。miR-125b-5p转染UC-MSCs 48 h可显著提高细胞存活率(P<0.01);与未处理的MRL/lpr小鼠组相比,miR-125b-5p修饰UC-MSCs对MRL/lpr小鼠脾脏Th17细胞分化具有明显的下调作用(P<0.05),且在小鼠血清中IL-4表达水平明显升高(P<0.05),IL-17A表达水平明显减低(P<0.05)。经miR-125b-5p修饰的UC-MSCs治疗后,MRL/lpr小鼠肺和肾组织内炎性细胞浸润和微血栓减少。结论:miR-125b-5p修饰UC-MSCs对SLE具有免疫调控作用。 展开更多

关键词 间充质干细胞 基因修饰 系统性红斑狼疮 免疫调节 脐带

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miR-125b-5p修饰脐带间充质干细胞介导JAK2/STAT3信号通路对系统性红斑狼疮的免疫调节作用 被引量：5

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作者 武志慧 丁丽丽 +4 位作者 胡明智 王永福 王慧 张伟 孙晓林 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第1期28-36,共9页

目的研究miR-125b-5p修饰脐带间充质干细胞(UC-MSCs)介导JAK2/STAT3信号通路对系统性红斑狼疮(SLE)的免疫调节作用。方法UC-MSCs的分离、培养及鉴定;密度梯度离心法分离SLE患者外周血单个核细胞(PBMCs),实时荧光定量PCR检测与各组UC-MSC... 目的研究miR-125b-5p修饰脐带间充质干细胞(UC-MSCs)介导JAK2/STAT3信号通路对系统性红斑狼疮(SLE)的免疫调节作用。方法UC-MSCs的分离、培养及鉴定;密度梯度离心法分离SLE患者外周血单个核细胞(PBMCs),实时荧光定量PCR检测与各组UC-MSCs共培养48 h后的PBMCs中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素17A(IL-17 A)、叉头状转录因子3(Foxp 3)基因的相对表达量;Western blot检测治疗后MRL/lpr小鼠肾组织中Janus激酶2(JAK2)、磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)、磷酸化信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)、白细胞介素18(IL-18)蛋白的相对表达量。结果与PBMCs组相比,UC-MSCs+miR-125b-5p组、UC-MSCs+miR-NC组、UC-MSCs组的IFN-γ、IL-17 A的表达和辅助性T细胞17(Th 17)/调节性T细胞(Treg)的细胞比例显著下调(P<0.01),UC-MSCs+miR-125b-5p组、UC-MSCs+miR-NC组的辅助性T细胞1(Th 1)/辅助性T细胞2(Th 2)细胞比例下调(P<0.05);与MRL/lpr小鼠未处理组相比,UC-MSCs+miR-125b-5p组治疗后的MRL/lpr小鼠肾组织中p-JAK2/JAK2、p-STAT3(s 705)/STAT3、IL-18的表达水平显著下调(P<0.01);UC-MSCs+miR-NC组、UC-MSCs组治疗后的MRL/lpr小鼠肾组织中IL-18的表达水平显著下调(P<0.01)。结论miR-125b-5p基因修饰UC-MSCs后,对调节SLE患者PBMCs中Th2细胞亚群分化以及MRL/lpr小鼠肾组织中p-JAK 2/JAK 2、p-STAT 3(s 705)/STAT 3、IL-18的表达起到了协同作用。miR-125b-5p基因修饰的UC-MSCs可能通过介导JAK2/STAT3通路对SLE起到免疫调节作用。 展开更多

关键词 基因修饰 脐带间充质干细胞 系统性红斑狼疮 JAK2/STAT3信号通路

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miRNA-125家族与自身免疫性疾病关系的研究进展 被引量：4

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作者 武志慧 孙晓林 王慧 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第9期128-136,共9页

MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性非编码小分子RNA,长度为20~23个核苷酸。MicroRNA-125(miR-125)是一个高度保守的miRNA家族,由miR-125a、miR-125b-1和miR-125b-2组成。越来越多的证据表明miR-125参与体内的多种病理生理过程,调节包括免... MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性非编码小分子RNA,长度为20~23个核苷酸。MicroRNA-125(miR-125)是一个高度保守的miRNA家族,由miR-125a、miR-125b-1和miR-125b-2组成。越来越多的证据表明miR-125参与体内的多种病理生理过程,调节包括免疫细胞在内的多种细胞的稳态和分化,与多种自身免疫性疾病密切相关,有望成为新的治疗靶点。本文综述了miR-125家族与自身免疫性疾病、免疫细胞的关系及其最新研究进展。 展开更多

关键词 miR-125b 自身免疫性疾病 免疫调节

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抗核小体抗体、抗C1q抗体和抗双链DNA抗体在狼疮肾炎诊断中的意义 被引量：16

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作者 尹芳蕊 庞春艳 +3 位作者 吕凤凤 张文兰 赵剑波 王永福 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期757-761,共5页

目的:通过抗核小体抗体、抗C1q抗体和抗双链DNA(dsDNA)抗体检测,观察3种抗体阳性的狼疮肾炎(LN)患者实验室检查和临床特征,阐明系统性红斑狼疮(SLE)并发LN的危险因素及3种抗体在LN诊断中的意义。方法:选择SLE患者120例,其中LN组60例,非L... 目的:通过抗核小体抗体、抗C1q抗体和抗双链DNA(dsDNA)抗体检测,观察3种抗体阳性的狼疮肾炎(LN)患者实验室检查和临床特征,阐明系统性红斑狼疮(SLE)并发LN的危险因素及3种抗体在LN诊断中的意义。方法:选择SLE患者120例,其中LN组60例,非LN组60例,回顾性分析2组患者抗核抗体谱及抗C1q抗体的差异;比较LN组患者抗核小体抗体、抗C1q抗体和抗dsDNA抗体3种抗体阳性的LN患者(三阳性LN组)和非抗体阳性的LN患者(非三阳性LN组)的临床表现及实验室检查的差异。结果:LN组患者抗C1q抗体阳性率为40.00%,非LN组患者抗C1q抗体阳性率为21.67%,2组患者抗C1q抗体阳性率比较差异有统计学意义(χ2=4.728,P=0.03);LN组患者抗dsDNA抗体阳性率为66.67%,非LN组患者抗dsDNA抗体阳性率为46.67%,2组患者抗dsDNA抗体阳性率比较差异有统计学意义(χ2=4.887,P=0.027);LN组患者抗核小体抗体阳性率为58.33%,非LN组患者抗核小体抗体阳性率为40.00%,2组患者抗核小体抗体阳性率比较差异有统计学意义(χ2=4.034,P=0.045);其余抗体U1-snRNP、SmD1、Jo-1、SSA/Ro60kD、SSA/Ro52kD、SSB、scl-70、CENP-B和P0抗体阳性率组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。三阳性LN组与非三阳性LN组患者年龄及免疫球蛋白、C反应蛋白(CRP)、血沉、白细胞和血小板检测结果比较差异均无统计学意义(P>0.05),三阳性LN组患者补体C3、补体C4和血红蛋白水平较非三阳性LN组降低(P<0.05)。三阳性LN组和非三阳性LN组患者不同临床症状发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:抗核小体抗体、抗C1q抗体和抗dsDNA抗体是SLE并发LN的危险因素,三抗体阳性可提高LN的诊断率,三阳性LN组患者补体和血液系统方面损害更严重,肾疾病活动度更高。 展开更多

关键词 抗C1Q抗体 抗双链DNA抗体 抗核小体抗体 狼疮肾炎

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抗环瓜氨酸肽抗体对类风湿关节炎的诊断、治疗及预后的临床价值 被引量：15

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作者 张文兰 胡同平 +3 位作者 王永福 尹芳蕊 赵剑波 王馨 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1541-1544,共4页

目的:探讨抗环瓜氨酸肽抗体(CCP)和类风湿因子(RF)联合检测对类风湿关节炎(RA)的诊断价值,并分析抗CCP抗体浓度与RA的预后判断、药物反应和骨质破坏的临床相关性。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)和动态免疫散射比浊法分别检测480例RA... 目的:探讨抗环瓜氨酸肽抗体(CCP)和类风湿因子(RF)联合检测对类风湿关节炎(RA)的诊断价值,并分析抗CCP抗体浓度与RA的预后判断、药物反应和骨质破坏的临床相关性。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)和动态免疫散射比浊法分别检测480例RA患者和非RA患者血清中抗CCP抗体和RF。结果:抗CCP抗体对RA的敏感性和特异性分别为:83.0%、96.7%;RF对RA的敏感性和特异性分别为:76.0%、70.0%;二者联合检测,以抗CCP抗体阳性或RF阳性作为联合检测的阳性判定,以抗CCP抗体阴性且RF阴性作为联合检测的阴性判定,对RA的敏感性为87.0%,高于单独检测的敏感性;对RA的特异性为98.3%,高于单独检测的特异性。抗CCP抗体浓度在治疗前、治疗后3个月和治疗后6个月的RA患者间存在很大差异(P<0.05)。RA患者是否发生骨侵蚀,其抗CCP抗体浓度存在较大差异(P<0.05);而且关节损害越严重,其抗CCP抗体浓度越高(P<0.05);随着治疗的进行,抗CCP抗体浓度的下降幅度在各组间也存在明显差异(P<0.05)。结论:联合检测抗CCP抗体和RF能够明显提高RA的诊断和鉴别诊断。抗CCP抗体浓度可随治疗有效而发生改变,动态监测可以作为考察药物疗效的观察指标。同时,抗CCP抗体水平能反映RA患者骨侵蚀的程度,且骨破坏严重者,治疗效果差。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 抗环瓜氨酸肽抗体 类风湿因子

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过表达miR-124a对J774.1细胞中TNF-α和IL-6表达水平及细胞周期的影响 被引量：6

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作者 尹芳蕊 庞春艳 +1 位作者 耿立霞 王永福 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期983-987,共5页

目的:探讨miR-124a对类风湿关节炎(RA)细胞模型小鼠巨噬细胞J774.1细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)表达水平及细胞周期的影响,阐明miR-124a在RA中的作用机制。方法:取对数生长期J774.1细胞,以1×106 mL^(-1)均匀... 目的:探讨miR-124a对类风湿关节炎(RA)细胞模型小鼠巨噬细胞J774.1细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)表达水平及细胞周期的影响,阐明miR-124a在RA中的作用机制。方法:取对数生长期J774.1细胞,以1×106 mL^(-1)均匀接种于培养皿,每组设3个复孔,当细胞融合度达到60%时进行感染,实验分为miR-124a过表达组(感染miR-124a腺病毒载体)、空载腺病毒组(感染阴性病毒液)和空白对照组(不做任何处理)。ELISA法检测感染48h后3组细胞上清液中TNF-α和IL-6的表达水平,RT-PCR法检测感染48h后J774.1细胞中TNF-α和IL-6mRNA相对表达水平,流式细胞术检测感染48h后3组细胞细胞周期变化。结果:感染48h后,与空白对照组和空载腺病毒组比较,miR-124a过表达组细胞上清中TNF-α和IL-6表达水平明显降低(P=0.038,P=0.042;P=0.043,P=0.044),miR-124a过表达组细胞中TNF-α和IL-6mRNA表达水平明显降低(P=0.001,P=0.002;P=0.001,P=0.003),G1期细胞百分率明显升高(P=0.01),S期和G2期细胞百分率明显降低(P<0.01)。结论:miR-124a感染小鼠巨噬细胞J774.1后可使细胞的炎性因子表达水平下降,抑制细胞增殖,miR-124a有望成为RA治疗的新靶点。 展开更多

关键词 miR-124a 类风湿性关节炎 腺病毒载体 J774.1细胞

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脂肪间充质干细胞对MRL/lpr小鼠的治疗效果及对脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响 被引量：3

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作者 张伟 庞春艳 王永福 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期974-978,共5页

目的:探讨移植脂肪间充质干细胞(adipose tissue derived stem cells,ADSCs)对MRL/lpr小鼠的治疗作用及对MRL/lpr小鼠脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响。方法:15只12周龄的雌性MRL/lpr小鼠采用随机数字表法分为ADSCs治疗组(ADSCs组)、对照组... 目的:探讨移植脂肪间充质干细胞(adipose tissue derived stem cells,ADSCs)对MRL/lpr小鼠的治疗作用及对MRL/lpr小鼠脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响。方法:15只12周龄的雌性MRL/lpr小鼠采用随机数字表法分为ADSCs治疗组(ADSCs组)、对照组(control组)和环磷酰胺治疗组(cyclophosphamide,CTX组),每组5只。ADSCs组经尾静脉注射ADSCs,每次注射的细胞数为1×106/150μL,每周1次,共注射8次;control组经尾静脉注射等体积磷酸盐缓冲液,每周1次,共注射8次;CTX组经尾静脉注射环磷酰胺,剂量为15 mg/kg(体重),每周1次,连用2次,休息2周后重复,共注射4次。留取治疗前和治疗后尿液检测24 h尿蛋白浓度。治疗8周后,处死MRL/Ipr小鼠,以流式细胞仪分析脾细胞Th17/Treg细胞比例变化。结果:(1)24 h尿蛋白浓度变化:治疗前,3组小鼠的24 h尿蛋白浓度差异无统计学意义(P>0.05);治疗4周后,ADSCs组和CTX组24 h尿蛋白浓度显著低于control组,差异有统计学意义[(5.02±1.61)g/L vs.(7.10±1.63)g/L、(4.90±0.71)g/L vs.(7.10±1.63)g/L,P<0.05],而且治疗时间越长,效果越明显,治疗8周后,ADSCs组和CTX组24 h尿蛋白浓度显著低于control组[(2.24±0.73)g/L vs.(10.36±1.64)g/L、(3.80±1.45)g/L vs.(10.36±1.64)g/L,P<0.01];ADSCs组和CTX组之间24 h尿蛋白浓度差异无统计学意义(P>0.05)。(2)脾脏Treg细胞占CD4+T细胞的百分率:ADSCs组和CTX组脾淋巴细胞中Treg细胞占CD4+T细胞的百分率高于control组,3组分别为13.62%±1.87%、14.14%±1.29%、0.71%±1.23%,但组间差异无统计学意义(P>0.05)。(3)脾脏Th17细胞占CD4+T细胞的百分率:ADSCs组和CTX组脾淋巴细胞中Th17细胞占CD4+T细胞的百分率显著低于control组,3组分别为1.43%±0.20%、1.63%±0.65%、6.37%±1.64%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:移植ADSCs能够减少MRL/lpr小鼠尿蛋白浓度,治疗时间越长,效果越显著。ADSCs能够降低MRL/lpr小鼠脾脏Th17细胞水平,提高Treg细胞水平,负向调节Th17/Treg细胞平衡,进而发挥抗炎和免疫调节的作用。 展开更多

关键词 脂肪组织 间质干细胞移植 红斑狼疮 系统性 疾病模型 动物 小鼠 近交MRL LPR

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白介素-1受体相关激酶-M在系统性红斑狼疮患者单核细胞中的表达及与临床的相关性 被引量：4

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作者 胡同平 白力 张文兰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期256-258,263,共4页

目的:研究白介素-1受体相关激酶-M(Interleukin-1 receptor associated kinases M,IRAK-M)在系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者单核细胞中的表达情况及与临床的相关性。方法:采用实时荧光定量PCR技术,检测SLE组和... 目的:研究白介素-1受体相关激酶-M(Interleukin-1 receptor associated kinases M,IRAK-M)在系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者单核细胞中的表达情况及与临床的相关性。方法:采用实时荧光定量PCR技术,检测SLE组和健康对照组单核细胞中IRAK-M的mRNA表达量;采用酶联免疫吸附试验法检测抗双链DNA抗体(ds DNA)和抗单链DNA抗体(ss DNA);采用动态免疫散射比浊法测定补体3(C3)、补体4(C4)和C-反应蛋白(CRP);采用魏氏法测定红细胞沉降率(ESR)。同时,使用Pearson或Spearman分析IRAK-M与SLEDAI评分、ds DNA、ss DNA、C3、C4、CRP和ESR的相关性。结果:1SLE组IRAK-M的mRNA表达量明显低于健康对照组(P<0.05),活动期SLE组IRAK-M的mRNA表达量明显低于稳定期SLE组(P<0.05)。2SLE组ds DNA、ss DNA、CRP和ESR水平明显高于健康对照组(P<0.05),C3和C4水平明显低于健康对照组(P<0.05);而且,活动期SLE组ds DNA、ss DNA、CRP和ESR水平明显高于稳定期SLE组(P<0.05),C3和C4水平明显低于稳定期SLE组(P<0.05)。3相关分析显示:IRAK-M的mRNA表达量与C3成正相关(P<0.05),与SLEDAI评分、ds DNA、CRP、ESR呈负相关(P<0.05),与ss DNA和C4无相关性(P>0.05)。结论:IRAK-M在SLE发病机制中起着重要的作用;定量检测IRAK-M的mRNA表达量可监测SLE疾病活动度和判断预后。同时,对SLE患者ds DNA、ss DNA、CRP、C3、C4和ESR水平的常规检测和定期监测是非常必要的。 展开更多

关键词 系统性红斑狼疮 白细胞介素-1受体相关激酶-M SLEDAI评分

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腺病毒介导的“睡美人”转座子与IL-10共表达对NOD小鼠Th17/Treg细胞平衡的影响 被引量：1

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作者 庞春艳 王慧 +2 位作者 王志华 冯秀媛 王永福 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期205-210,共6页

目的:观察腺病毒介导的"睡美人"(SB)转座子与白细胞介素10(IL-10)共表达对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠脾细胞中Th17/Treg细胞平衡的影响,阐明IL-10对NOD小鼠的可能治疗机制。方法:提取C57BL6小鼠的脾细胞并培养,将脾细胞分为对照... 目的:观察腺病毒介导的"睡美人"(SB)转座子与白细胞介素10(IL-10)共表达对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠脾细胞中Th17/Treg细胞平衡的影响,阐明IL-10对NOD小鼠的可能治疗机制。方法:提取C57BL6小鼠的脾细胞并培养,将脾细胞分为对照组、空载体组和治疗组。对照组脾细胞不做任何处理,空载体组将不含IL-10基因而有转座子序列的腺病毒载体和不含转座酶的腺病毒载体共同感染小鼠脾细胞,治疗组将含有IL-10基因和转座子序列的腺病毒载体以及含有转座酶的腺病毒载体共同感染小鼠脾细胞。感染48h后RTPCR法检测各组小鼠脾细胞中IL-10mRNA表达水平。感染48h后将上述3组处理的脾细胞分别种植到对照组、空载体组和治疗组NOD小鼠右后腿的腘窝皮下,每组6只小鼠,每周注射1次,共6次。注射结束后4周处死小鼠,ELISA法检测各组NOD小鼠血清中IL-10表达水平;流式细胞术检测各组NOD小鼠脾细胞中CD4+IL-10+、CD4+IFN-γ+、Th17和Treg细胞的比例。结果:与对照组和空载体组比较,治疗组C57BL6小鼠脾细胞中IL-10mRNA表达水平明显升高(F=72.71,P<0.05),NOD小鼠血清中IL-10表达水平明显升高(F=8.89,P<0.05),NOD小鼠脾细胞中CD4+IL-10+细胞和Treg细胞比例明显升高(F=72.09,P<0.05;F=12.98,P<0.05);但治疗组小鼠脾细胞中Th17细胞比例明显下降(F=6.39,P<0.05);NOD小鼠脾细胞中CD4+IFN-γ+细胞比例在对照组、空载体组和治疗组之间比较差异无统计学意义(F=2.72,P>0.05)。结论:腺病毒介导的SB转座子与IL-10共表达后可以升高NOD小鼠血清中IL-10表达水平;同时可明显升高NOD小鼠脾细胞中CD4+IL-10+细胞比例,降低Th17细胞比例,升高Treg细胞比例,调控Th1/Th2和Th17/Treg的平衡,对NOD小鼠起到治疗作用。 展开更多

关键词 “睡美人”转座子 白细胞介素10 Th17细胞 Teg细胞 非肥胖糖尿病 小鼠

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CD40 siRNA对MRL/Lpr小鼠狼疮肾炎的治疗作用 被引量：1

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作者 庞春艳 吕凤凤 +1 位作者 尹芳蕊 王永福 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1089-1093,共5页

目的:观察CD40的小干扰RNA(siRNA)对系统性红斑狼疮(SLE)动物模型MRL/Lpr小鼠肾脏、尿蛋白和补体C3的影响,探讨CD40 siRNA对狼疮肾炎的治疗作用。方法:16只MRL/Lpr小鼠随机分为对照组、空载体组、CD40-siRNA1组及CD40-siRNA2组,每组4只... 目的:观察CD40的小干扰RNA(siRNA)对系统性红斑狼疮(SLE)动物模型MRL/Lpr小鼠肾脏、尿蛋白和补体C3的影响,探讨CD40 siRNA对狼疮肾炎的治疗作用。方法:16只MRL/Lpr小鼠随机分为对照组、空载体组、CD40-siRNA1组及CD40-siRNA2组,每组4只,将成功构建的CD40 siRNA表达载体尾静脉注射MRL/Lpr小鼠,对照组和空载体组小鼠分别注射等剂量、等比例的磷酸盐缓冲液(PBS)和p GFP-V-RS空载体。每隔1天1次,共6次。处死前24 h留取24 h的尿量。14d处死小鼠,肾脏组织切片在荧光显微镜下观察其是否在小鼠肾脏中表达,RT-PCR法检测小鼠肾脏组织中CD40 mRNA的表达水平;免疫组化法检测小鼠肾脏组织中CD40蛋白的表达水平;病理切片苏木精-伊红(HE)染色法观察4组小鼠肾脏的病理变化,考马斯亮蓝染色法检测24 h尿蛋白含量,免疫比浊检测小鼠补体C3的水平。结果:CD40 siRNA表达载体可以在MRL/Lpr小鼠的肾脏中表达。注射后14 d CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组的MRL/Lpr小鼠肾脏组织中CD40 mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.05)。CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组与对照组和空载体组比较肾小球减小,肾小球的浸润的炎性细胞减少,肾小管肿胀程度减轻。CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组小鼠24 h尿蛋白含量明显下降,而补体C3升高,与对照组和空载体组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MRL/Lpr小鼠注射CD40 siRNA载体后,CD40 mRNA和蛋白的表达水平下降,肾脏中炎性细胞的浸润减少,24 h尿蛋白含量下降,血清中补体C3水平升高,说明CD40 siRNA抑制其mRNA和蛋白后,MRL/Lpr小鼠肾脏炎症反应减轻,尿蛋白含量下降,补体C3升高,提示其可延缓病程的进展,对肾脏起到一定的保护作用,进一步对狼疮肾炎有很好的治疗作用。 展开更多

关键词 CD40 小干扰RNA MRL/LPR小鼠 24 h尿蛋白 补体C3

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RA生物制剂治疗 被引量：4

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作者 王慧 王永福 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1911-1916,共6页

类风湿关节炎（ Rheumatoid arthritis,RA）是一种慢性、以侵犯关节为主要特征、原因未明的自身免疫性疾病. 主要表现为进行性侵蚀性关节炎,部分患者出现发热、贫血、皮下结节、淋巴结肿大、间质性肺病、白细胞减少及血小板下降等关节... 类风湿关节炎（ Rheumatoid arthritis,RA）是一种慢性、以侵犯关节为主要特征、原因未明的自身免疫性疾病. 主要表现为进行性侵蚀性关节炎,部分患者出现发热、贫血、皮下结节、淋巴结肿大、间质性肺病、白细胞减少及血小板下降等关节外受累. 全世界RA的患病率是0.5%~1%,女性高于男性[ 1 ].至今RA尚不能根治,治疗的总原则是目标治疗.RA治疗的主要目标是临床缓解. 传统RA治疗以非甾 体 抗 炎 药、 传 统 改 善 病 情 抗 风 湿 药（ conventional synthetic disease-modifying antirheu-matic drugs,csDMARDs）及糖皮质激素为主,目前上述药物在RA治疗方面仍有一定地位[ 2 ]. 然而,由于csDMARDs的一些副作用限制了其的应用,另有一些患者应用 csDMARDs 疗效欠佳[ 3 ]. 促炎因子和免疫细胞与RA发病密切相关[ 4 ]. 生物制剂作用于RA发病相关的特殊的细胞因子（ TNF、IL-6 等）和免疫细胞（ CD20＋B细胞等） [ 5 ]. 展开更多

关键词 目标治疗 生物制剂 RA 类风湿关节炎 自身免疫性疾病 免疫细胞 淋巴结肿大 间质性肺病

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基因沉默肽基精氨酸脱亚胺酶4的表达对胶原诱导关节炎小鼠肺间质病变的影响 被引量：5

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作者 赵凯 常志芳 +2 位作者 王志华 庞春艳 王永福 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期235-239,共5页

目的:研究基因沉默肽基精氨酸脱亚胺酶4(peptidyl arginine deaminase 4,PAD4)的表达对胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠肺间质病变的治疗作用及可能机制。方法:DBA/1小鼠建立CIA模型,尾静脉注射PAD4-siRNA表达载... 目的:研究基因沉默肽基精氨酸脱亚胺酶4(peptidyl arginine deaminase 4,PAD4)的表达对胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠肺间质病变的治疗作用及可能机制。方法:DBA/1小鼠建立CIA模型,尾静脉注射PAD4-siRNA表达载体制备的病毒液,每周1次,共8次。处死小鼠,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肺中PAD4 mRNA的表达水平;免疫组织化学法检测PAD4蛋白的表达;取脾组织进行细胞培养,流式细胞术检测Tfh细胞和Tfr细胞比例的变化;HE染色观察肺病理学的改变。结果:(1)与空白组比较,模型组小鼠肺组织PAD4 mRNA的表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.05),PAD4-siRNA治疗后CIA小鼠肺组织中PAD4 mRNA的表达水平较模型组和阴性对照组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);(2)空白组小鼠肺组织红色荧光较少,而模型组和阴性对照组小鼠肺组织的炎细胞浸润区和气管周围可见较多的红色荧光,PAD4-siRNA治疗后3组的红色荧光明显减少;(3)与空白组比较,模型组脾细胞中Tfh细胞比例升高,差异有统计学意义(P<0.05),PAD4-siRNA治疗后CIA小鼠脾细胞中Tfh细胞比例较模型组和阴性对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与空白组比较,模型组小鼠脾细胞中Tfr细胞比例略有降低,但差异无统计学意义,PAD4-siRNA治疗后小鼠脾细胞中Tfr细胞比例升高,但只有PAD4-siRNA2组与模型组和阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);(4)模型组脾细胞中Tfh/Tfr值升高,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05);PAD4-siRNA治疗后3组Tfh/Tfr值均下降,差异有统计学意义(P<0.05);(5)与空白组比较,模型组小鼠肺组织的肺泡壁增厚,炎性细胞浸润增加,PAD4-siRNA治疗后CIA小鼠的肺组织破坏及炎性浸润减少,纤维化程度减轻。结论:基因沉默PAD4的表达可以降低Tfh细胞的比例,升高Tfr细胞的比例,逆转Tfh/Tfr值,减轻肺组织的间质病变程度和炎症浸润程度。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 肽基精氨酸脱亚胺酶4 基因沉默 滤泡辅助性T细胞 滤泡调节性T细胞

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1型1-磷酸鞘氨醇受体的siRNA对人涎腺导管上皮细胞的作用 被引量：1

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作者 李琼 常志芳 +2 位作者 杨国安 庞春艳 王永福 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期987-993,共7页

目的:构建靶向1型1-磷酸鞘氨醇受体(sphingosine 1-phosphate receptor-1,S1P1)基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)慢病毒表达载体,感染干燥综合征细胞模型——人涎腺导管上皮细胞(human salivary gland cells,HSG),探讨S1P1... 目的:构建靶向1型1-磷酸鞘氨醇受体(sphingosine 1-phosphate receptor-1,S1P1)基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)慢病毒表达载体,感染干燥综合征细胞模型——人涎腺导管上皮细胞(human salivary gland cells,HSG),探讨S1P1的siRNA治疗干燥综合征的可能性,为临床靶标治疗提供广阔的思路。方法:实验分空白组、空载体组、scramble-siRNA组及S1P1-siRNA组,分别将p LL3.7空载体、构建成功的scramble-siRNA及S1P1-siRNA慢病毒表达载体与p MD2.G、p MDL g/p RRE、pRSV-REV共转染293T细胞制备病毒,感染HSG细胞株48 h,流式细胞术检测其感染效率,实时荧光定量RT-PCR法检测HSG细胞中S1P1 mRNA的表达水平,细胞免疫组织化学法检测细胞中S1P1蛋白的表达水平,ELISA法检测细胞上清中γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和白细胞介素(interleukin,IL)-17的表达水平。结果:(1)成功构建scramble-siRNA、S1P1-siRNA慢病毒表达载体,慢病毒的滴度约为3.5×108TU/m L。(2)感染48 h后S1P1-siRNA组HSG细胞中S1P1 mRNA的表达水平明显低于空白组、空载体组和scramble-siRNA组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)S1P1-siRNA组HSG细胞中S1P1蛋白的表达水平低于空白组、空载体组和scramble-siRNA组,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)S1P1-siRNA组HSG细胞分泌的IL-17的浓度明显降低,与空白组、空载体组和scramble-siRNA组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(5)S1P1-siRNA组细胞上清液中IFN-γ的浓度降低,与空白组、空载体组和scramble-siRNA组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建了靶向S1P1基因的慢病毒载体,S1P1 siRNA可以使S1P1 mRNA和蛋白表达水平下降,细胞上清液中IL-17和IFN-γ的浓度下降,证明S1P1 siRNA可转染HSG细胞且特异、高效地抑制S1P1基因的表达,抑制细胞上清液中细胞因子的表达,为治疗干燥综合征奠定了实验基础。 展开更多

关键词 受体 鞘磷脂 RNA 小分子干扰 涎腺 腺泡细胞 遗传载体

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脂肪间充质干细胞对博来霉素诱导的硬皮病小鼠模型的治疗作用 被引量：10

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作者 窦晶莉 白力 +3 位作者 庞春艳 张文兰 张伟 王永福 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期970-976,共7页

目的:研究脂肪间充质干细胞(adipose tissue-derived stem cells,ADSCs)对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的硬皮病小鼠的治疗效果及其可能的作用机制。方法:选取C57BL/6J雌性小鼠24只,采用皮下注射BLM[2mg/(kg·d)]建立硬皮病小鼠模型... 目的:研究脂肪间充质干细胞(adipose tissue-derived stem cells,ADSCs)对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的硬皮病小鼠的治疗效果及其可能的作用机制。方法:选取C57BL/6J雌性小鼠24只,采用皮下注射BLM[2mg/(kg·d)]建立硬皮病小鼠模型,随机分为正常对照组、BLM组、ADSCs(皮下)组和ADSCs(静脉)组,每组6只,正常对照组给予生理盐水2 m L/(kg·d)皮下注射,其余3组分别给予BLM皮下注射,连续3周,然后,ADSCs皮下和尾静脉注射组分别给予皮下和尾静脉注射ADSCs(2×105个细胞)治疗,每4天1次,共3次。流式细胞术检测小鼠脾细胞中的辅助T细胞17(T-helper 17,TH17)及调节性T细胞(regulatory T cell,Treg),实时荧光定量聚合酶联反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测小鼠肺组织中相关细胞因子的表达水平,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测小鼠血清中白介素(interleukin,IL)-6、转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)的含量,苏木精-伊红染色(hematoxylin eosin staining,HE)观察小鼠的皮肤和肺组织病理学改变。结果:流式细胞术结果显示,BLM组较正常对照组小鼠脾细胞中TH17和Treg所占比例升高(15.30%±1.29%vs.4.32%±0.79%;9.90%±1.95%vs.5.18%±1.35%,P均<0.05),经ADSCs治疗后,TH17所占比例降低(5.02%±0.83%,6.00%±0.82%vs.15.30%±1.29%,P均<0.05),而Treg所占比例升高(14.32%±1.59%,11.09%±4.31%vs.9.90%±1.95%,P均<0.05)。与正常对照组相比,BLM组小鼠肺组织中IL-17、IL-6、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的mRNA表达水平及血清中IL-6的含量均升高[3.54±0.30,10.65±0.66,5.37±0.52 vs.1.00±0.00;(21.2±1.74)ng/L vs.(16.87±1.09)ng/L,P均<0.05],ADSCs治疗后,其表达量下降[1.63±0.45,1.50±0.29 vs.3.54±0.30;3.11±0.85,2.98±0.76 vs.10.65±0.66;1.45±0.47,1.59±0.41 vs.5.37±0.52;(17.87±1.45)ng/L,(17.61±1.16)ng/L vs.(21.2±1.74)ng/L,P均<0.05],ADSCs(皮下)组和ADSCs(静脉)组比较差异无统计学意义(P>0.05)。BLM组小鼠血清中TGF-β的含量较正常对照组升高[(33.95±2.49)ng/L vs.(28.8±2.29)ng/L,P<0.05],但小鼠肺组织中TGF-βmRNA的表达水平与正常对照组之间差异无统计学意义(1.17±0.11 vs.1.00±0.00,P>0.05),经ADSCs治疗后TGF-β基因和蛋白的表达无明显变化[1.25±0.11,1.26±0.12 vs.1.17±0.11;(31.84±2.04)ng/L,(31.25±2.36)ng/L vs.(33.95±2.49)ng/L,P>0.05]。HE染色结果显示,BLM组与正常对照组相比,肺组织有大量炎性细胞浸润,肺泡间隔断裂或消失;皮肤真皮层增厚,有大量的胶原纤维积聚,经ADSCs治疗后小鼠肺组织炎症有所改善,皮肤的真皮层变薄,胶原纤维积聚减少。结论:ADSCs可以有效缓解硬皮病小鼠肺的炎症和皮肤的纤维化症状,其抗炎和抗纤维化作用与其免疫调节功能有关。 展开更多

关键词 干细胞 间充质 硬皮病 免疫调节 细胞因子类

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自噬在系统性硬化症发病机制中作用的研究进展 被引量：1

15

作者 李鑫 孙晓林 王永福 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第12期97-103,共7页

系统性硬化症(systemic sclerosis, SSc)是一种以血管病变、皮肤纤维化为特征,可引起多器官结构和功能损害的自身免疫性疾病,SSc发病机制复杂,可能与遗传、环境因素、免疫机制异常等有关。自噬是一种在进化上保守的机体内自降解过程,可... 系统性硬化症(systemic sclerosis, SSc)是一种以血管病变、皮肤纤维化为特征,可引起多器官结构和功能损害的自身免疫性疾病,SSc发病机制复杂,可能与遗传、环境因素、免疫机制异常等有关。自噬是一种在进化上保守的机体内自降解过程,可通过多种途径参与机体免疫及自身免疫性疾病发病。本文主要综述自噬通过调节免疫细胞、介导信号通路调控SSc血管病变和纤维化的研究进展。 展开更多

关键词 自噬 系统性硬化症 血管病变 纤维化 信号通路

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CD40 siRNA对MRL/Lpr狼疮小鼠炎症反应的影响

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作者 王志华 张伟 +2 位作者 张艳清 庞春艳 王永福 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期771-776,共6页

目的:观察CD40的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)动物模型MRL/Lpr小鼠细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-4和抗双链DNA(anti-double strand DNA,anti-dsDNA)抗体表达水平的影响,探... 目的:观察CD40的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)动物模型MRL/Lpr小鼠细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-4和抗双链DNA(anti-double strand DNA,anti-dsDNA)抗体表达水平的影响,探讨CD40 siRNA治疗MRL/Lpr小鼠的可能性。方法:16只MRL/Lpr小鼠随机分为对照组、空载体组、CD40-siRNA1组及CD40-siRNA2组,每组4只,将成功构建的CD40 siRNA表达载体尾静脉注射MRL/Lpr小鼠,对照组和空载体组小鼠分别注射等剂量、等比例的磷酸盐缓冲液(PBS)和p GFP-V-RS空载体,每隔1天1次,共6次,14 d处死小鼠,称其脾的质量,组织切片在荧光显微镜下观察小鼠脾是否有CD40 siRNA的表达,注射前及注射后第2、5、8、11和14天小鼠尾部采血,ELISA法检测4组小鼠血清中IFN-γ、IL-17、IL-4和anti-ds DNA抗体的表达水平变化,RT-PCR法检测小鼠脾组织中CD40 mRNA的表达水平,免疫组织化学法检测小鼠脾组织中CD40蛋白的表达水平。结果:注射后的siRNA表达载体可以在小鼠脾中表达;注射CD40 siRNA组的小鼠脾质量减轻,由对照组(141.88±7.81)mg和空载体组(153.10±7.60)mg降低至CD40-siRNA1组(78.85±5.61)mg和CD40-siRNA2组(80.25±4.07)mg,注射前4组小鼠血清中IFN-γ、IL-17、IL-4和anti-ds DNA抗体的(质量)浓度比较,差异无统计学意义;而注射后第2、5和8天CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组MRL/Lpr小鼠血清中IFN-γ、IL-17和(质量)浓度明显下降,CD40-siRNA1组的IFN-γ的(质量)浓度依次为(118.74±10.32)ng/L(pg/m L)、(115.24±8.26)ng/L、(113.71±5.02)ng/L,CD40-siRNA2组依次为(117.83±6.83)ng/L、(114.07±0.97)ng/L、(112.67±9.66)ng/L;CD40-siRNA1组的IL-17的(质量)浓度依次为(7.05±0.41)ng/L、(6.34±0.76)ng/L、(5.83±0.43)ng/L,CD40-siRNA2组依次为(7.07±0.22)ng/L、(6.35±0.49)ng/L、(6.12±0.80)ng/L;CD40-siRNA1组的anti-ds DNA的浓度依次为(7.51±0.29)ng/L、(6.74±0.45)ng/L、(6.32±0.39)ng/L;CD40-siRNA2组依次为(8.19±0.38)ng/L、(7.14±0.50)ng/L、(6.48±0.29)ng/L。IL-4的(质量)浓度明显升高,CD40-siRNA1组IL-4的(质量)浓度依次为(26.51±1.81)ng/L、(27.80±1.72)ng/L、(28.08±2.21)ng/L,CD40-siRNA2组依次为(26.28±2.03)ng/L、(28.15±2.95)ng/L、(28.37±1.71)ng/L。CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组与对照组和空载体组比较差异有统计学意义(P<0.05),注射后第11和14天CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组中这4个指标的(质量)浓度逐渐恢复至对照组和空载体组的(质量)浓度水平,IFN-γ、IL-17、IL-4的(质量)浓度4组小鼠比较,差异无统计学意义,注射后第11天CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组anti-ds DNA抗体的水平尽管与对照组和空载体组比较有所提高,4组比较差异有统计学意义(P<0.05),而注射后第14天anti-ds DNA抗体的水平4组小鼠比较,差异无统计学意义。注射后第14天CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组MRL/Lpr小鼠脾组织中CD40 mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MRL/Lpr小鼠注射CD40 siRNA载体后,血清中IFN-γ、IL-17和anti-ds DNA抗体水平降低,IL-4的浓度升高,CD40 mRNA和蛋白的表达水平下降,说明CD40 siRNA抑制其mRNA和蛋白后,MRL/Lpr小鼠炎症反应减轻,疾病活动度下降,提示其对SLE动物模型MRL/Lpr小鼠有治疗作用。 展开更多

关键词 抗原 CD40 RNA 小分子干扰 红斑狼疮 系统性 细胞因子类 小鼠 近交MRL LPR

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外泌体在系统性硬化症中的研究进展

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作者 丁甜甜 吕凤凤 +2 位作者 赵巧英 孙晓林 王永福 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第9期115-121,共7页

外泌体是可由大多数细胞分泌的小囊泡。外泌体及其包含的microRNA、mRNA、蛋白质在细胞间通讯中起重要作用。研究表明外泌体具有免疫调节作用,参与自身免疫性疾病的发病及免疫治疗,并可作为诊断疾病的有效生物标志物。此外,外泌体可被... 外泌体是可由大多数细胞分泌的小囊泡。外泌体及其包含的microRNA、mRNA、蛋白质在细胞间通讯中起重要作用。研究表明外泌体具有免疫调节作用,参与自身免疫性疾病的发病及免疫治疗,并可作为诊断疾病的有效生物标志物。此外,外泌体可被用作药物传递的生物载体。系统性硬化症(systemic sclerosis,SSc)是一种复杂的自身免疫性疾病,发病机制包括血管损伤、免疫异常、内脏器官及皮肤纤维化。近年来,在研究SSc的发病机制方面取得了不错的进展,推动了临床治疗方面的研究。本文综述了外泌体的组成、功能,外泌体在SSc发病以及诊治方面的潜在作用。 展开更多

关键词 外泌体 系统性硬化症 免疫调节 诊断 治疗

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长链非编码RNA在系统性硬化症中的研究进展

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作者 王宝玥 王永福 孙晓林 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第7期141-148,共8页

越来越多的研究表明长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在内皮细胞损伤、炎症、癌症及自身免疫性疾病中发挥重要作用。系统性硬化症(systemic sclerosis,SSc)是一种发病机制尚未明确的自身免疫性疾病,而研究人员发现lncRNA可能... 越来越多的研究表明长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在内皮细胞损伤、炎症、癌症及自身免疫性疾病中发挥重要作用。系统性硬化症(systemic sclerosis,SSc)是一种发病机制尚未明确的自身免疫性疾病,而研究人员发现lncRNA可能通过调控免疫失调、微血管病变以及纤维化等过程参与SSc的发生和发展,还可能作为SSc的生物标志物来预测疾病的发生、活性程度以及进展阶段,因此可为SSc提供新的治疗靶点。 展开更多

关键词 长链非编码RNA 系统性硬化症 发病机制 生物标志物 靶向治疗

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