期刊文献+
共找到21篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
内蒙古地区绵羊梅迪-维斯纳病毒全基因组序列的测定与分析 被引量:4
1
作者 赵玲 王振玲 +4 位作者 史晓娜 段续接 张良 李慧萍 刘淑英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1140-1145,共6页
为了解内蒙古地区绵羊梅迪-维斯纳病毒(MVV)的分子结构特征和遗传变异情况,本研究利用Illumina Hiseq 4000二代测序技术对MVV阳性绵羊病肺组织进行病毒全基因组测定,并对全基因组特征、gag和env及其编码的氨基酸序列进行系统进化分析。... 为了解内蒙古地区绵羊梅迪-维斯纳病毒(MVV)的分子结构特征和遗传变异情况,本研究利用Illumina Hiseq 4000二代测序技术对MVV阳性绵羊病肺组织进行病毒全基因组测定,并对全基因组特征、gag和env及其编码的氨基酸序列进行系统进化分析。结果显示,获得全长9193 bp的MVV全基因组序列,命名为NM1111,并上传GenBank获得基因登录号MW248464;全基因组、gag和env核苷酸序列与参考株的相应核苷酸序列的同源性分别为75.8%~81.4%、77.1%~86.8%和67.7%~75.5%;基于gag序列的系统进化分析,NM1111与A2型MVV聚为一支,属于A2型;Gag蛋白的主要同源区(MHR)存在D^(296)E的突变,Env蛋白变异程度较大,表面蛋白V4区存在氨基酸插入,SU5抗原表位在氨基端有一个完全保守的基序(VRAYTYGV),在羧基端有一个高度可变的基序。本研究提供了中国地区首个绵羊MVV完整序列,为中国地区MVV分子生物学特性研究提供基础参考。 展开更多
关键词 梅迪-维斯纳病毒 二代测序技术 GAG ENV 遗传变异
在线阅读 下载PDF
两种蒙古绵羊25日龄胚胎转录组学差异分析
2
作者 陈陆 苏红 +2 位作者 王佳业 王大清 曹贵方 《动物医学进展》 北大核心 2024年第4期8-15,共8页
不同品种的绵羊尾部脂肪含量不同,为了更好地鉴定导致绵羊尾部脂肪沉积的重要候选基因及其功能途径,试验使用mRNA-Seq技术对尾型差异的两种蒙古绵羊25日龄(E25)胚胎进行了比较转录组分析。筛选出差异显著的基因,并通过基因本体(GO)数据... 不同品种的绵羊尾部脂肪含量不同,为了更好地鉴定导致绵羊尾部脂肪沉积的重要候选基因及其功能途径,试验使用mRNA-Seq技术对尾型差异的两种蒙古绵羊25日龄(E25)胚胎进行了比较转录组分析。筛选出差异显著的基因,并通过基因本体(GO)数据库和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库丰富基因功能,共富集到2721个差异表达基因(DEGs),筛选与尾部脂肪沉积相关的基因,包括JUNB、ZFP36、TIMP2、GADD45B、MAP3K8、FOS等。DEG参与了MAPK信号通路、Axon guidance通路、HEDGEHOG信号通路、脂肪细胞分化和脂肪酸代谢等重要的信号通路。结果表明,除了脂质代谢途径的影响外,与“白细胞介素反应”和“MAPK信号通路”相关的一系列丰富的功能术语可能有助于蒙古绵羊尾部脂肪的沉积。使用RNA-Seq分析的结果筛选出参与脂肪酸代谢和脂肪沉积调节的重要候选基因,为绵羊尾脂代谢的分子机理提供了新的见解。 展开更多
关键词 乌珠穆沁羊 呼伦贝尔短尾羊 25日龄胚胎 mRNA测序
在线阅读 下载PDF
胰淀素作用于背外侧被盖核胆碱乙酰转移酶神经元调节小鼠体重
3
作者 曹晓娟 刘昊东 +10 位作者 李鹏辉 李嘉成 樊奇 王星 李彩琴 杨子程 郭永清 陈玉洁 张小宇 海日汗 杜晨光 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3185-3192,共8页
胰淀素(amylin)作用于背外侧被盖核(lateral dorsal tegmental nucleus,LDT),诱导减肥和抑食效应,并激活背肩胛棕色脂肪组织(interscapular brown adipose tissue,IBAT)产热。多种食欲激素受体与胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransfera... 胰淀素(amylin)作用于背外侧被盖核(lateral dorsal tegmental nucleus,LDT),诱导减肥和抑食效应,并激活背肩胛棕色脂肪组织(interscapular brown adipose tissue,IBAT)产热。多种食欲激素受体与胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)神经元共同定位于LDT中,以调节饱腹感和能量消耗。然而,LDT的ChAT神经元是否参与胰淀素介导的体重调节作用尚待探索。作者拟通过免疫荧光检测小鼠LDT中原癌基因蛋白(c-Fos)和ChAT神经元的表达,逆行示踪技术确认LDT的下游神经核团,神经元损伤试验分析胰淀素作用的神经机制。结果显示:腹腔注射胰淀素显著降低小鼠体重,并显著促进LDT和臂旁核(PBN)中c-Fos和ChAT神经元表达。ChAT和神经型一氧化氮合成酶(nNOS)神经元在LDT、PBN和迷走神经背侧核(DMV)中共表达。逆行示踪试验证明LDT向PBN神经元发送神经投射。此外,损伤LDT和PBN神经元可降低胰淀素的减肥效果。LDT是连接PBN的能量平衡调节中枢,ChAT神经元参与介导胰淀素的体重调节过程。 展开更多
关键词 肥胖 胆碱乙酰转移酶 胰淀素 下丘脑 背外侧被盖核
在线阅读 下载PDF
基于转录组学分析自然感染绵羊肺腺瘤病毒患羊肺肿瘤组织中转录差异基因及病毒致瘤机制的研究 被引量:2
4
作者 段续接 杨惠 +4 位作者 孙志伟 杜晓悦 张培 梁浚哲 刘淑英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期185-194,共10页
绵羊肺腺瘤病(OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)引起的绵羊传染性肺肿瘤疾病。为探究JSRV对绵羊肺脏的致瘤机制,本研究从自然感染JSRV的羊(OPA患羊)肺肿瘤组织和健康羊肺组织中提取总RNA,构建二者的cDNA文库后采用Illumina Hi Seq 4000高... 绵羊肺腺瘤病(OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)引起的绵羊传染性肺肿瘤疾病。为探究JSRV对绵羊肺脏的致瘤机制,本研究从自然感染JSRV的羊(OPA患羊)肺肿瘤组织和健康羊肺组织中提取总RNA,构建二者的cDNA文库后采用Illumina Hi Seq 4000高通量测序平台进行转录组学测序(RNA-Seq),采用DESeqR筛选健康绵羊与患病绵羊肺组织中的转录差异基因,并以P<0.05和log2(Fold change)≥1筛选转录显著差异基因。通过GO和KEGG数据库对转录显著差异基因进行GO功能和KEGG信号通路的富集分析,并采用RT-qPCR对随机选择的10个转录显著差异基因进行验证。结果显示,与对照组相比,OPA羊肺肿瘤组织中共筛选到1 360个转录上调基因和783个转录下调基因,其中154个转录显著上调基因,212个转录显著下调基因。GO功能分析显示,转录显著差异基因显著富集在178个GO条目中,包括114个生物过程(BP)、19个细胞成分(CC)和45个分子功能(MF),主要涉及生长因子活性、复制后修复、NAD^(+)二磷酸酶活性、核苷代谢过程和鸟苷核苷酸交换因子活性等生物学功能。KEGG分析显示转录显著差异基因主要富集在细胞增殖、分化和肿瘤生成,如PI3K/Akt、MAPK和Hippo等信号通路。RT-qPCR结果显示,10个转录显著差异基因与RNA-Seq筛选结果均一致。本研究进一步通过RT-qPCR、western blot检测Hippo信号通路核心蛋白哺乳动物STE20样蛋白激酶1/2 (MST1/2)、大肿瘤抑制因子1/2 (LATS1/2)、YES相关蛋白1/2 (YAP1)在两组绵羊肺组织样品中的转录及表达水平和YAP1的磷酸化水平(p-YAP1);采用免疫组化试验(IHC)检测Hippo信号通路中上述核心蛋白在两组绵羊肺组织中的表达及定位。RT-qPCR结果显示,与对照组相比,OPA羊肺组织中MST1和YAP1 mRNA的转录水平均极显著上调(P<0.01、P<0.001),LATS1 mRNA的转录水平显著上调(P<0.05)。Western blot结果显示,MST1/2蛋白在59 ku、YAP1和p-YAP1蛋白在65 ku、LATS1/2蛋白在140 ku处分别出现特异性条带;与对照组相比,OPA绵羊肺肿瘤组织中MST1/2和p-YAP1的表达水平显著上调(P<0.05),LATS1/2和YAP1的表达水平极显著上调(P<0.01)。IHC结果显示,在OPA组和对照组羊肺组织中MST1/2、LATS1/2及p-YAP1均定位于肺组织细胞质中,且与对照组相比,OPA组羊肺组织中上述分子均呈强阳性表达。YAP1主要定位于对照组羊肺组织细胞的胞质中,而在OPA组中YAP1主要定位于细胞核中(少量定位于细胞质中)。上述结果表明,OPA组绵羊肺组织中存在转录显著差异基因,主要参与细胞增殖、肿瘤发生和转移等过程,且主要富集在PI3K/Akt、MAPK、Hippo等信号通路,尤其是Hippo信号通路中的YAP蛋白可能通过核异位促进肿瘤的发生与发展。本研究为JSRV致瘤机制提供了新的研究基础与研究思路和方向。 展开更多
关键词 绵羊肺腺瘤病 绵羊肺腺瘤病毒 转录组学分析 Hippo信号通路
在线阅读 下载PDF
蓝斑核GABA表达神经元影响体温
5
作者 李嘉成 刘昊东 +8 位作者 李鹏辉 樊奇 王星 闫睿 贺炀 张明 周鑫 杜晨光 苏布登格日勒 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期602-609,共8页
目的:蓝斑核作为能量调节枢纽参与调节能量稳态,γ-氨基丁酸(GABA)神经元发挥体温调节作用,然而蓝斑核GABA表达神经元在体温调节方面的作用尚未明确。基于此,本研究旨在探索蓝斑核GABA表达神经元是否参与体温调节。方法:运用化学遗传方... 目的:蓝斑核作为能量调节枢纽参与调节能量稳态,γ-氨基丁酸(GABA)神经元发挥体温调节作用,然而蓝斑核GABA表达神经元在体温调节方面的作用尚未明确。基于此,本研究旨在探索蓝斑核GABA表达神经元是否参与体温调节。方法:运用化学遗传方法特异性抑制小鼠蓝斑核GABA能神经元活性,统计其体温、采食量、糖耐量、胰岛素耐受性变化。同时,通过Western blot检测肩胛间棕色脂肪组织(IBAT)中线粒体解偶联蛋白1(UCP1)的表达。结果:抑制蓝斑核GABA表达神经元导致饥饿状态小鼠核心体温和IBAT温度显著下降(P<0.05),同时IBAT中的UCP1表达水平显著上升(P<0.05)。结论:本研究结果表明蓝斑核GABA表达神经元可调控小鼠体温,为中枢神经系统如何通过调节特定神经元群体来影响体温和能量代谢提供了新的视角,这对于理解相关的生理机制具有重要意义。 展开更多
关键词 蓝斑核 Γ-氨基丁酸 肩胛间棕色脂肪组织 解偶联蛋白1
在线阅读 下载PDF
益生菌调节防御素表达的研究进展 被引量:2
6
作者 金鑫 张曼 +5 位作者 王云鹤 魏方 温婧怡 付胜 李易聪 杨银凤 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第5期66-69,共4页
防御素是一类广泛分布于各种动物组织和细胞的内源性抗菌肽,其具有抗细菌、抗真菌、抗病毒活性以及趋化和免疫调节等作用,因此是先天性免疫系统的重要组成部分。由于其具有不同于传统抗生素的抗菌机理和独特的生物活性,近年来也逐渐引... 防御素是一类广泛分布于各种动物组织和细胞的内源性抗菌肽,其具有抗细菌、抗真菌、抗病毒活性以及趋化和免疫调节等作用,因此是先天性免疫系统的重要组成部分。由于其具有不同于传统抗生素的抗菌机理和独特的生物活性,近年来也逐渐引起了科研人员的广泛关注。基于防御素呈组成型和诱导型表达的特点^[1],因此寻找安全高效的能够诱导防御素表达的物质成为防御素研究的重点和难点。 展开更多
关键词 防御素 肽聚糖 SBD 酿酒酵母 细菌类 益生菌 瘤胃上皮细胞 鼠李糖乳酸杆菌
在线阅读 下载PDF
CRISPR/Cas9基因编辑技术在家畜中的应用研究进展 被引量:3
7
作者 王彤 高元鹏 +4 位作者 韩静 张景程 李喜和 何婷依 曹贵方 《动物医学进展》 北大核心 2021年第11期78-84,共7页
美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)于2020年12月14日批准了名为GalSafe转基因猪上市。它是首个既可以有效减轻异种器官移植中的急性免疫排斥,又可以生产肉类过敏者可安全食用的转基因家畜。随着基因编辑技术不... 美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)于2020年12月14日批准了名为GalSafe转基因猪上市。它是首个既可以有效减轻异种器官移植中的急性免疫排斥,又可以生产肉类过敏者可安全食用的转基因家畜。随着基因编辑技术不断发展,转基因动物走入市场已势不可挡,尤其近年来,规律成簇的间隔短回文重复序列及相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)系统成为基因编辑技术的一种重要的方法。CRISPR/Cas9基因编辑系统由于结构简单、效率高、应用范围广和成本低等优点被广泛应用于作物育种、家畜遗传改良、人类疾病治疗等方面。论文主要对CRISPR/Cas9基因编辑系统在家畜应用上取得的研究进展进行综述,并对未来发展前景进行展望。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 基因编辑 转基因动物 家畜
在线阅读 下载PDF
JSRV Env通过Akt/mTOR信号通路调控绵羊绒毛膜滋养层细胞增殖 被引量:5
8
作者 段续接 杨惠 刘淑英 《动物医学进展》 北大核心 2021年第9期47-52,共6页
利用已构建的JSRV Env慢病毒载体转染绵羊绒毛膜滋养层细胞(STCs),探讨Akt/mTOR信号通路的激活及其对细胞增殖的影响。以STCs为空白组,空病毒载体转染STCs为对照组,JSRV Env慢病毒载体转染STCs为试验组,通过Western blot检测Akt、p-Akt... 利用已构建的JSRV Env慢病毒载体转染绵羊绒毛膜滋养层细胞(STCs),探讨Akt/mTOR信号通路的激活及其对细胞增殖的影响。以STCs为空白组,空病毒载体转染STCs为对照组,JSRV Env慢病毒载体转染STCs为试验组,通过Western blot检测Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR蛋白的表达,并在JSRV Env转化细胞中加入mTOR抑制剂雷帕霉素(rapamycin),利用噻唑蓝(MTT)比色法比较分析细胞增殖情况。激光共聚焦观察显示JSRV Env慢病毒转染STCs 72 h后,因稳定表达了Env蛋白而出现大量红色荧光信号;Western blot结果显示,与空白组和对照组相比,试验组有p-Akt和p-mTOR的显著表达(P<0.05);MTT比色法分析结果显示,与空白组和对照组相比,试验组的细胞增殖能力显著上调(P<0.05)。JSRV Env转化细胞中加入雷帕霉素后,MTT比色法分析结果显示,与JSRV Env慢病毒转染STCs组相比,细胞增殖能力显著下调(P<0.05);Western blot结果显示,雷帕霉素作用72 h后mTOR表达显著下调(P<0.05)。综上可知,JSRV Env慢病毒激活了STCs中的Akt/mTOR信号通路,参与调控细胞增殖。研究结果为进一步探究JSRV Env诱导细胞转化、参与细胞增殖等生物学作用的探讨提供了基础的参考资料。 展开更多
关键词 慢病毒载体 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白 Akt/mTOR信号通路 细胞增殖
在线阅读 下载PDF
雌激素作用下输卵管上皮细胞S100A8和S100A9的表达及其作用探讨 被引量:2
9
作者 李晓丹 曹贵方 +6 位作者 杨宏新 于建 刘默宁 龙鑫 魏巍 李春芳 苏红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期562-568,共7页
目的研究基因S100A8和S100A9是否可能参与雌激素对输卵管的功能调控,并探讨它们对输卵管可能的影响。方法免疫组织化学法检测S100A8和S100A9在健康间情期,绵羊输卵管壶腹部中的基础表达及分布;利用E2作用绵羊输卵管上皮细胞,在不同作用... 目的研究基因S100A8和S100A9是否可能参与雌激素对输卵管的功能调控,并探讨它们对输卵管可能的影响。方法免疫组织化学法检测S100A8和S100A9在健康间情期,绵羊输卵管壶腹部中的基础表达及分布;利用E2作用绵羊输卵管上皮细胞,在不同作用时间及不同浓度E2作用下,q-PCR及免疫荧光法检测输卵管上皮细胞S100A8和S100A9 mRNA及蛋白的表达情况。结果在健康间情期绵羊输卵管,S100A8和S100A9高表达于黏膜上皮及腺上皮,并在血管中也有表达。输卵管上皮细胞在高浓度E2作用下,S100A8和S100A9的表达在不同时间出现动态变化,并均在E2作用6 h后出现表达高峰,在该时间下不同浓度的E2均显著诱导S100A8和S100A9的高表达,但在10-7 mol·L^-1和10-8 mol·L^-1浓度下表达最高,两组差异不显著。结论输卵管上皮细胞中S100A8和S100A9受到雌激素调控,高浓度雌激素促进S100A8和S100A9的高表达,可能与交配时生殖道的天然防御有关,并可能参与卵子在输卵管的运输。 展开更多
关键词 雌激素 输卵管 S100A8 S100A9 天然防御 卵子运输
在线阅读 下载PDF
梅迪-维斯纳病毒实时荧光RPA检测方法的建立 被引量:3
10
作者 刘然 张琳 +2 位作者 陈思旭 史晓娜 刘淑英 《中国动物检疫》 CAS 2023年第3期90-96,130,共8页
为实现对梅迪-维斯纳病毒(MVV)的快速检测,根据MVV gag基因保守序列设计特异性引物和探针,通过优化反应条件和反应体系,建立了MVV的实时荧光RPA检测方法,并通过灵敏度、特异性、重复性试验及样品复核检测进行评价。结果显示:该方法最佳... 为实现对梅迪-维斯纳病毒(MVV)的快速检测,根据MVV gag基因保守序列设计特异性引物和探针,通过优化反应条件和反应体系,建立了MVV的实时荧光RPA检测方法,并通过灵敏度、特异性、重复性试验及样品复核检测进行评价。结果显示:该方法最佳反应温度为39℃,用时短,20 min即可完成检测;灵敏度高,检测下限可达10-1pg/μL,比常规PCR检测结果灵敏约104倍;特异性强,与小反刍兽疫病毒、羊败血性链球菌、牛肠道病毒、传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、肺炎支原体等继发呼吸系统症状病原无交叉反应;重复性好,对于相同质量浓度的模板DNA检测变异系数均小于10%;可有效检测出MVV,与PCR结果一致。综上所述,本研究建立的MVV荧光RPA检测方法适用于MVV的临床快速检测,可为该病的诊断及防控提供依据。 展开更多
关键词 梅迪-维斯纳病毒 荧光RPA检测 快速检测 性能评价
在线阅读 下载PDF
DHEA诱导小鼠PCOS模型过程中性激素的变化规律 被引量:2
11
作者 翁钰 王琴 +6 位作者 赵玉芬 于凯 郝绍瑜 于泊洋 杜晨光 苏布登格日勒 李海军 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第2期454-461,共8页
【目的】鉴于在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)发病机理和治疗方式上的诸多争议,以及使用人类PCOS材料进行研究的局限性,本研究通过构建PCOS小鼠模型以探究在模型构建过程中性激素水平的变化规律。【方法】皮下注射脱... 【目的】鉴于在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)发病机理和治疗方式上的诸多争议,以及使用人类PCOS材料进行研究的局限性,本研究通过构建PCOS小鼠模型以探究在模型构建过程中性激素水平的变化规律。【方法】皮下注射脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)诱导昆明白雌鼠产生PCOS样临床症状,通过结晶紫染色查看小鼠性周期是否发生停滞;利用HE染色的方式确定卵巢发育状况;利用ELISA技术调查建模过程中血清睾酮和雌二醇浓度的变化规律。【结果】使用结晶紫对小鼠阴道上皮细胞染色可准确区分小鼠各个性周期阶段;使用6 mg/100 g DHEA持续诱导20 d后,昆明白小鼠性周期循环发生了一定的停滞,且在建模过程中体重变化与芝麻油溶剂的加入呈显著相关(P<0.05),与DHEA处理无关;DHEA连续处理后可见卵巢中巨大囊状卵泡出现,血清睾酮水平出现显著升高(P<0.05);自PCOS模型构建的第5天起,血清睾酮水平显著上升(P<0.05),且维持到建模结束;而血清雌二醇水平出现了阶段性变化,在第10、15天均显著高于对照组(P<0.05),第20天时低于对照组。【结论】改进DHEA溶解方式可成功构建昆明白小鼠PCOS模型,在建模过程中血清睾酮持续处于较高水平,而雌二醇水平呈现先增高后降低的趋势,后者在建模中期瞬时升高的病理意义需进一步研究。 展开更多
关键词 多囊卵巢综合征(PCOS) 脱氢表雄酮(DHEA) 性周期 睾酮 雌二醇
在线阅读 下载PDF
S100A8和S100A9的天然免疫作用 被引量:4
12
作者 李晓丹 曹贵方 +2 位作者 杨宏新 李磊 龙鑫 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1051-1054,共4页
天然免疫是机体免疫的第一道防线,小分子肽S100钙结合蛋白A8(S100A8)即钙粒蛋白A (calgranulin A)和S100A9在先天防御中有多效性。S100A8和S100A9可由粒细胞、单核细胞及上皮细胞等产生,是低分子量钙结合蛋白,常可形成二聚体,与肿瘤、... 天然免疫是机体免疫的第一道防线,小分子肽S100钙结合蛋白A8(S100A8)即钙粒蛋白A (calgranulin A)和S100A9在先天防御中有多效性。S100A8和S100A9可由粒细胞、单核细胞及上皮细胞等产生,是低分子量钙结合蛋白,常可形成二聚体,与肿瘤、抗菌、损伤修复等活动密切相关,并且在修复作用中可能对损伤引起的炎症反应有反馈调节并激活指纹图谱重编程。我们主要总结了S100A8和S100A9在肿瘤、黏膜防御、损伤修复中的天然免疫作用研究进展。 展开更多
关键词 天然免疫 S100钙结合蛋白A8(S100A8) 钙粒蛋白A(calgranulin A) S100A9 综述
在线阅读 下载PDF
绵羊梅迪-维斯纳病毒CA-TM融合蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立 被引量:1
13
作者 陈思旭 张培 +2 位作者 史晓娜 刘然 刘淑英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1290-1297,共8页
为建立一种快速、准确的梅迪-维斯纳病毒(MVV)抗体检测方法,本研究利用DNAStar生物学软件对MVV衣壳蛋白(CA)和MVV跨膜蛋白(TM)的抗原表位分析,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)获得CA-TM融合基因,构建表达质粒p Easy-E1-CA-TM,将其转化大肠杆菌... 为建立一种快速、准确的梅迪-维斯纳病毒(MVV)抗体检测方法,本研究利用DNAStar生物学软件对MVV衣壳蛋白(CA)和MVV跨膜蛋白(TM)的抗原表位分析,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)获得CA-TM融合基因,构建表达质粒p Easy-E1-CA-TM,将其转化大肠杆菌BL21后诱导蛋白表达并纯化,经SDS-PAGE检测结果显示,得到重组CA-TM蛋白(rCA-TM),r CA-TM以包涵体形式表达。以获得的rCA-TM作为包被抗原,采用方阵法优化各反应条件,建立了MVV间接ELISA检测方法。利用该方法检测羊临床常见病原阳性血清,结果显示,除MVV阳性血清以外,口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、绵羊肺炎支原体等绵羊临床常见病原的阳性血清均为阴性,特异性较强,且该方法能识别感染MVV病畜体内产生的CA蛋白和TM蛋白抗体。将MVV阳性血清2倍倍比稀释(1:500~1:32 000)后,分别利用建立的MVV间接ELISA方法及商品化MVV抗体ELISA试剂盒检测,结果显示商品化MVV抗体ELISA试剂盒最低可检测出1:40 00倍稀释的阳性血清,而本研究建立的间接ELISA方法最低可检测出1:16 000倍稀释的阳性血清,敏感性较高。重复性试验结果显示,该方法批内、批间试验的变异系数分别为3.6%~6.9%、2.3%~8.5%,均小于10%,重复性较好。利用本实验建立的MVV间接ELISA方法和商品化MVV抗体ELISA试剂盒对69份绵羊临床样品检测,结果显示,本实验建立的ELISA方法检测出31份阳性样品,38份阴性样品;商品化MVV抗体ELISA检测试剂盒检出37份阳性样品,32份阴性样品。二者的阳性符合率为83.7%,阴性符合率为100%,总符合率为91.3%。本研究首次基于MVV rCA-TM建立了MVV间接ELISA检测方法,且该方法能够分别识别CA蛋白抗体和TM蛋白抗体,不仅减少了因为血清转换而导致血清抗体检测不准确的影响,还扩大了检测范围,为内蒙地区绵羊梅迪-维斯纳病的诊断及净化提供了检测手段。 展开更多
关键词 梅迪-维斯纳病毒 间接ELISA方法 原核表达 融合蛋白
在线阅读 下载PDF
绵羊SUN2基因生物信息学分析及其在A549细胞中的表达 被引量:1
14
作者 杜晓悦 张良 +1 位作者 李慧萍 刘淑英 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第11期3929-3939,共11页
本研究旨在克隆绵羊SUN2(Sad1 and UNC84 domain containing 2)基因并进行生物信息学分析,构建真核表达载体并检测其在A549细胞中的表达。根据绵羊SUN2基因序列(GenBank登录号:XM_015095026.2)设计特异性引物,应用RT-PCR方法扩增并克隆... 本研究旨在克隆绵羊SUN2(Sad1 and UNC84 domain containing 2)基因并进行生物信息学分析,构建真核表达载体并检测其在A549细胞中的表达。根据绵羊SUN2基因序列(GenBank登录号:XM_015095026.2)设计特异性引物,应用RT-PCR方法扩增并克隆绵羊SUN2基因CDS序列,测序鉴定后对其进行生物信息学分析,并构建pEGFP-C1-SUN2重组质粒。利用脂质体转染方法将pEGFP-C1-SUN2重组质粒转染至A549细胞并检测其表达。结果显示,绵羊SUN2基因CDS区序列全长2187 bp,编码728个氨基酸,理论分子质量为81.06 ku,分子式为C_(3593)H_(5639)N_(1031)O_(1110)S_(14),等电点(pI)为6.20,总原子数为11387,不稳定系数为56.88,属于不稳定蛋白。绵羊SUN2基因序列与山羊、牛、猪、马、家犬、大鼠、小鼠及人的相似性分别为98.9%、97.2%、91.6%、90.6%、87.1%、82.4%、82.1%和86.1%,不同物种间基因相似性较高,进化过程中相对保守。系统进化树分析表明,绵羊SUN2基因与山羊、牛、猪、马和家犬等哺乳动物的遗传距离相对较近,与鸡的遗传距离较远。结构域及跨膜结构域预测显示,绵羊SUN2蛋白含有1个高度保守的SUN结构域,且存在跨膜结构域。信号肽预测显示其不存在信号肽位点,疏水性分析为亲水性蛋白,氨基酸序列二级结构主要为α-螺旋(51.65%),其余为无规则卷曲(31.46%)、延伸链(12.36%)和β-转角(4.53%)。试验成功构建了绵羊SUN2基因真核表达载体pEGFP-C1-SUN2,将其转染至A549细胞并检测到蛋白表达。本试验结果为绵羊SUN2基因功能的研究提供了参考依据,为后续探究SUN2基因在绵羊肺腺瘤病中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 绵羊 SUN2基因 载体构建 生物信息学分析 转染
在线阅读 下载PDF
乌珠穆沁羊早期胚胎转录组测序分析 被引量:1
15
作者 苏红 陈陆 +5 位作者 李秀男 王大清 赵霏霏 张越 李勇 曹贵方 《动物医学进展》 北大核心 2023年第8期39-46,共8页
试验旨在分析乌珠穆沁羊16 d胚胎和25 d胚胎的差异表达基因,探究以乌珠穆沁羊为代表的蒙古绵羊的早期胚胎发育过程和分子机制。通过对乌珠穆沁羊16 d胚胎和25 d胚胎进行mRNA测序,共富集到7171个差异表达基因,尤其显著的差异表达基因包... 试验旨在分析乌珠穆沁羊16 d胚胎和25 d胚胎的差异表达基因,探究以乌珠穆沁羊为代表的蒙古绵羊的早期胚胎发育过程和分子机制。通过对乌珠穆沁羊16 d胚胎和25 d胚胎进行mRNA测序,共富集到7171个差异表达基因,尤其显著的差异表达基因包括参与到肌动蛋白细胞骨架调控、紧密连接、AMPK信号通路、PI3K-Akt信号通路和MAPK信号通路的基因,如ROCK1、ROCK2、TJP1、TJP3、ADIPOR2、ACACA、PDGFRβ、PDPK1等,以及参与核糖体信号通路的RPL家族和RPS家族的部分基因,参与帕金森病、氧化磷酸化等通路中的多个NDUF家族基因。在通路分析中,E16发育阶段突出了那些与神经、血管、胰岛β细胞和胰腺发育相关的通路。而使器官和身体结构更为复杂,比如调控大脑、肝脏、心脏活动的基因,在E25发育阶段被显著富集。综合来说,在16 d胚胎阶段,神经、血管以及胰岛β细胞和胰腺正在快速发生;在25 d胚胎阶段,心脏、大脑和肝脏正处于活跃的生理时期。 展开更多
关键词 乌珠穆沁羊 16 d胚胎 25 d胚胎 mRNA测序 胚胎发育
在线阅读 下载PDF
兔抗人精子顶体精子溶菌酶样蛋白1结合蛋白(SAS1B)多克隆抗体的制备及鉴定 被引量:3
16
作者 杨宏新 杨勇 曹贵方 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期362-367,共6页
目的制备兔抗人精子顶体精子溶菌酶样蛋白1结合蛋白(SAS1B)多克隆抗体。方法构建pET-22b-SAS1B-His质粒,转化E.coli.BL21(DE3)细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导SAS1B重组蛋白表达。用层析纯化后的蛋白免疫日本大耳白兔制备SA... 目的制备兔抗人精子顶体精子溶菌酶样蛋白1结合蛋白(SAS1B)多克隆抗体。方法构建pET-22b-SAS1B-His质粒,转化E.coli.BL21(DE3)细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导SAS1B重组蛋白表达。用层析纯化后的蛋白免疫日本大耳白兔制备SAS1B多克隆抗体。ELISA检测SAS1B抗体效价,Western blot和免疫组织化学法鉴定SAS1B抗体特异性。结果在构建pET-22b-SAS1B-His原核表达载体的基础上,在BL21(DE3)细胞成功诱导表达SAS1B重组蛋白。制备的兔抗人SAS1B多克隆抗体效价为1∶51200。SAS1B多克隆抗体能与SAS1B重组蛋白特异结合且能识别乳腺癌组织中的SAS1B蛋白。结论成功制备具有较好特异性的兔抗人SAS1B多克隆抗体。 展开更多
关键词 精子顶体精子溶菌酶样蛋白1结合蛋白(SAS1B) 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
在线阅读 下载PDF
灭活枯草芽孢杆菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1表达的影响 被引量:3
17
作者 赵霏霏 辛雅明 +1 位作者 杨丹 杨银凤 《动物医学进展》 北大核心 2021年第6期56-62,共7页
以体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞(ovine rumen epithelial cells,ORECs)为试验模型,旨在探究灭活枯草芽孢杆菌对ORECs绵羊β-防御素-1(sheepβ-defesin-1,SBD-1)表达的影响。首先用不同浓度的灭活枯草芽孢杆菌(10^(7)、10^(8)、10^(9)、10... 以体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞(ovine rumen epithelial cells,ORECs)为试验模型,旨在探究灭活枯草芽孢杆菌对ORECs绵羊β-防御素-1(sheepβ-defesin-1,SBD-1)表达的影响。首先用不同浓度的灭活枯草芽孢杆菌(10^(7)、10^(8)、10^(9)、10^(10)、10^(11)CFU/mL)诱导ORECs 8 h,通过荧光定量PCR(qPCR)和ELISA的方法检测ORECs SBD-1表达量在mRNA水平和蛋白水平的变化,确定灭活枯草芽孢杆菌诱导ORECs SBD-1表达最高的菌液浓度为最佳刺激浓度。以该浓度的灭活枯草芽孢杆菌诱导ORECS不同时间(2 h、4 h、8 h、12 h),通过qPCR和ELISA的方法检测ORECs SBD-1表达量在mRNA水平和蛋白水平的变化,从而筛选出诱导SBD-1表达的最佳时间。结果表明,10^(8)~10^(11)CFU/mL的灭活枯草芽孢杆菌可以显著的促进ORECs SBD-1的表达,其中灭活枯草芽孢杆菌的浓度为10^(10)CFU/mL时诱导ORECs 8h时SBD-1 mRNA表达量最高,与对照组相比差异极显著(P<0.01);SBD-1蛋白表达量以10^(10)CFU/mL灭活枯草芽孢杆菌诱导ORECs 12 h时达到最大,与对照组相比差异极显著(P<0.01)。结果证明了热灭活后的枯草芽孢杆菌仍可以诱导SBD-1表达,其诱导SBD-1表达的有效成分并未被热灭活,为后续确定枯草芽孢杆菌诱导SBD-1表达的有效成分的研究提供了理论基础。 展开更多
关键词 绵羊瘤胃上皮细胞 枯草芽孢杆菌 β-防御素-1 荧光定量PCR
在线阅读 下载PDF
不同注射剂量9型腺相关病毒载体在小鼠脑和脊髓表达效果分析
18
作者 李鹏辉 刘昊东 +9 位作者 李嘉成 樊奇 王星 李彩琴 杨子程 陈玉洁 海日汗 曹晓娟 张小宇 杜晨光 《动物医学进展》 北大核心 2023年第12期23-28,共6页
腺相关病毒(AAV),尤其是从轴突末端转移到神经元的AAV9型,是研究神经环路和解析大脑功能的有力工具。利用囊泡型谷氨酸神经元(VGlut2)基因敲入小鼠联合脑立体定向注射,通过将AAV9-DIO-ChR2-EGFP病毒注射于VGlut2转基因小鼠的蓝斑核(LC)... 腺相关病毒(AAV),尤其是从轴突末端转移到神经元的AAV9型,是研究神经环路和解析大脑功能的有力工具。利用囊泡型谷氨酸神经元(VGlut2)基因敲入小鼠联合脑立体定向注射,通过将AAV9-DIO-ChR2-EGFP病毒注射于VGlut2转基因小鼠的蓝斑核(LC),探究不同注射剂量对病毒侵染范围和小鼠体重的影响。结果表明,与高注射量(1μL)相比,低注射量(0.5μL)可将AAV9-DIO-ChR2-EGFP限定至蓝斑核(LC)。在AAV9-DIO-ChR2-EGFP注射3周后,侵染范围由LC延伸至初级运动皮质(primary motor cortex,M1)、下丘脑、中缝苍白核(araphe pallidus nucleus,Rpa)和颈髓(cervical spinal cord,CSC)。随后检测了低注射量的AAV9(0.5μL)是否影响小鼠体重,统计结果表明,0.5μL AAV9注射对小鼠体重无影响(P=0.9795)。结果表明,低注射量(0.5μL)可以在一定程度上限制AAV的表达范围,并且脑内注射AAV9不会改变小鼠体重。 展开更多
关键词 腺相关病毒载体 立体定位注射 体重 中枢神经系统
在线阅读 下载PDF
草原短尾羊Brachyury蛋白多克隆抗体制备
19
作者 杨光 霍雨佳 +5 位作者 苏红 智达夫 刘默凝 窦傲蕾 王家业 曹贵方 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2022年第4期1-7,16,共8页
【目的】克隆草原短尾羊Brachyury基因(即T基因)编码区(CDS),并制备Brachyury蛋白特异性多克隆抗体,为草原短尾羊短尾表型机制研究提供重要的试验材料。【方法】提取草原短尾羊16 d胚胎的组织RNA,反转成cDNA,以cDNA为模板,采用PCR方法... 【目的】克隆草原短尾羊Brachyury基因(即T基因)编码区(CDS),并制备Brachyury蛋白特异性多克隆抗体,为草原短尾羊短尾表型机制研究提供重要的试验材料。【方法】提取草原短尾羊16 d胚胎的组织RNA,反转成cDNA,以cDNA为模板,采用PCR方法克隆草原短尾羊Brachyury基因CDS全长序列。将Brachyury基因CDS全长序列连接至pEASY■-Blunt E1载体,构建原核表达载体pEASY■-Blunt E1-Brachyury,并进行NheⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定。将原核表达载体导入RosettagamiB(DE3)大肠杆菌,并进行IPTG诱导表达,对表达产物进行回收纯化。利用纯化后的表达产物免疫6周龄日本大耳白兔,用间接ELISA(iELISA)法测定血清多克隆抗体效价。以制备的多克隆抗体为一抗,采用Western blot法检测草原短尾羊16,20,25和30 d胚胎中Brachyury蛋白的表达水平。【结果】克隆了1335 bp的草原短尾羊Brachyury基因CDS全长序列,成功构建了原核表达载体pEASY■-Blunt E1-Brachyury,表达获得了49.16 ku的重组Brachyury蛋白。成功制备了重组Brachyury蛋白多克隆抗体,抗体效价达1∶1500,该多克隆抗体可以特异性识别草原短尾羊胚胎中的Brachyury蛋白。草原短尾羊16 d胚胎中Brachyury蛋白的表达量最高。【结论】成功制备草原短尾羊Brachyury蛋白兔血清多克隆抗体,抗体效价为1∶1500,该多克隆抗体可以特异性识别草原短尾羊胚胎中的Brachyury蛋白。 展开更多
关键词 草原短尾羊 胚胎 Brachyury基因 多克隆抗体制备
在线阅读 下载PDF
双氢睾酮对小鼠卵泡颗粒细胞增殖与抗苗勒管激素表达的影响
20
作者 于凯 赵玉芬 +6 位作者 翁钰 王琴 郝绍瑜 于泊洋 杜晨光 苏布登格日勒 李海军 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第8期3036-3043,共8页
【目的】探讨双氢睾酮(DHT)对小鼠颗粒细胞增殖与抗苗勒管激素(AMH)表达的影响。【方法】给3周龄的昆明小鼠注射孕马血清促性腺激素(PMSG,10 IU/只)以获取颗粒细胞,颗粒细胞传代后48 h HE染色鉴定形态,绘制颗粒细胞的生长曲线,免疫荧光... 【目的】探讨双氢睾酮(DHT)对小鼠颗粒细胞增殖与抗苗勒管激素(AMH)表达的影响。【方法】给3周龄的昆明小鼠注射孕马血清促性腺激素(PMSG,10 IU/只)以获取颗粒细胞,颗粒细胞传代后48 h HE染色鉴定形态,绘制颗粒细胞的生长曲线,免疫荧光法鉴定促卵泡素受体(FSHR)的表达。当第2代颗粒细胞汇合度达到50%时,先用无血清的DMEM/F12培养基饥饿处理12 h,然后在培养基中添加不同浓度的DHT(0、10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)、10^(-5)mol/L),培养48 h后检测颗粒细胞增殖情况,实时荧光定量PCR法及ELISA法分别测定AMH基因及蛋白的表达。在颗粒细胞培养液中分别添加10^(-6)mol/L Flutamide(雄激素受体(AR)特异性抑制剂)、10^(-7)mol/L DHT、10^(-7)mol/L DHT+10^(-6)mol/L Flutamide、10^(-5)mol/L DHT、10^(-5)mol/L DHT+10^(-8)mol/L 11-ketodihydrotestosterone(AR特异性激动剂),分别记为F、D7、DF、D5、DK组,以不添加药物为对照组。培养48 h后,检测各组颗粒细胞增殖及AMH蛋白含量。【结果】体外培养的小鼠颗粒细胞呈梭形或铺路石状,生长曲线呈S形,细胞普遍表达FSHR;与0 mol/L DHT组相比,10^(-8)、10^(-7)mol/L DHT组细胞增殖分别显著和极显著增加(P<0.05;P<0.01),10^(-5)mol/L DHT组细胞增殖显著降低(P<0.05);10^(-7)mol/L DHT组AMH基因的相对表达量和AMH蛋白含量均极显著增加(P<0.01)。与D7组相比,DF组颗粒细胞增殖和AMH蛋白含量均极显著降低(P<0.01);与D5组相比,DK组颗粒细胞增殖和AMH蛋白含量均极显著升高(P<0.01)。【结论】10^(-7)mol/L DHT能够显著促进颗粒细胞增殖和AMH表达,而10^(-5)mol/L显著降低了颗粒细胞增殖以及AMH表达,且AR介导了DHT调控颗粒细胞增殖和AMH表达。 展开更多
关键词 小鼠 颗粒细胞 双氢睾酮(DHT) 雄激素受体(AR) 抗缪勒管激素(AMH) 细胞增殖
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部