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牛布鲁氏菌Wbkc基因原核表达及抗原性分析 被引量:2
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作者 李向阳 王学理 +3 位作者 刘凯 霍晓伟 武迎红 张显华 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期106-109,共4页
克隆牛布鲁氏菌的甲酰基转移酶基因(Wbkc),在大肠杆菌中表达/纯化,并对甲酰基转移酶的抗原性进行分析。以牛布鲁氏菌的染色体DNA为模板,扩增Wbkc基因,双酶切后克隆至pET-28a上,在大肠杆菌BL21中诱导表达,His Trap FF层析柱纯化,Western ... 克隆牛布鲁氏菌的甲酰基转移酶基因(Wbkc),在大肠杆菌中表达/纯化,并对甲酰基转移酶的抗原性进行分析。以牛布鲁氏菌的染色体DNA为模板,扩增Wbkc基因,双酶切后克隆至pET-28a上,在大肠杆菌BL21中诱导表达,His Trap FF层析柱纯化,Western blot鉴定甲酰基转移酶的抗原性。提取的重组质粒经PCR鉴定、双酶切鉴定和测序分析确定目的基因成功插入到了克隆载体中。SDS-PAGE分析证明,表达产物为相对分子质量29 000的融合蛋白。Western blot结果表明,表达的蛋白具有特异的免疫反应原性。 展开更多
关键词 甲酰基转移酶基因(Wbkc) 牛布鲁氏菌 原核表达 抗原性
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牛布鲁氏菌不同种强毒株膜蛋白质组学差异的比较 被引量:2
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作者 李向阳 王学理 +4 位作者 刘凯 霍晓伟 武迎红 张显华 张嘉保 《安徽农业科学》 CAS 2013年第35期13464-13464,13540,共2页
[目的]比较牛的不同种类布鲁氏菌的菌株膜蛋白质组学的差异。[方法]采用丙酮干粉方法,提取布鲁氏菌强毒株16M和疫苗株M5的全蛋白,具有双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质,用考马斯亮蓝染色、扫描获取二维电泳图谱,用ImageMaster TM2D Pla... [目的]比较牛的不同种类布鲁氏菌的菌株膜蛋白质组学的差异。[方法]采用丙酮干粉方法,提取布鲁氏菌强毒株16M和疫苗株M5的全蛋白,具有双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质,用考马斯亮蓝染色、扫描获取二维电泳图谱,用ImageMaster TM2D Platinum6.0-TOF软件筛选出差异蛋白质酶切,准备样品进行质谱分析,通过MALDI.0软件在不同的肽质量指纹质谱搜索数据库,通过生物信息技术进行蛋白质识别。[结果]应用固相pH梯度图获得良好的重复性2-DE凝胶,观察布鲁氏菌强毒株16M和疫苗株M5 2-DE图谱,其蛋白质的表达模式非常相似,使用ImageMaster TM2D4.0软件自动识别蛋白质点,检测布鲁氏菌16 M蛋白的蛋白质点856,疫苗株M5的蛋白质点793。在数据库中选择有意义的蛋白质23种进行选择质谱鉴定。蛋白质功能的差异是由质谱鉴定得到的,涉及糖代谢、物质运输、蛋白质合成和分子伴侣等方面,有13种在16M和疫苗株M5的蛋白高表达。[结论]通过质谱鉴定,获得的蛋白质功能涉及糖代谢、物质运输、蛋白质合成和分子伴侣等,有13种在16M和疫苗株M5的蛋白高表达。 展开更多
关键词 布鲁氏菌强毒株16M 疫苗株M5 菌体全蛋白质
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Omp22与牛布鲁氏菌感染后的巨噬细胞蛋白互作研究 被引量:1
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作者 李向阳 王学理 +4 位作者 刘凯 霍晓伟 武迎红 张显华 张嘉保 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第2期894-897,共4页
为了探讨牛布鲁氏菌544A株感染巨噬细胞的c DNA文库中筛选与Omp22相互作用的蛋白,对布鲁氏菌的致病机理进行研究。将布鲁氏菌细胞膜可分为3组:第1组为94 k Da的外膜蛋白,第2组为41-43 k Da外膜蛋白,第3组为22-31 k Da的外膜蛋白。第1... 为了探讨牛布鲁氏菌544A株感染巨噬细胞的c DNA文库中筛选与Omp22相互作用的蛋白,对布鲁氏菌的致病机理进行研究。将布鲁氏菌细胞膜可分为3组:第1组为94 k Da的外膜蛋白,第2组为41-43 k Da外膜蛋白,第3组为22-31 k Da的外膜蛋白。第1组外膜蛋白只是外膜蛋白的一小部分;第2组外膜蛋白是布鲁氏菌细胞外膜孔道蛋白;第3组外膜蛋白是由两种相关的22 k Da蛋白和31 k Da蛋白组成,31 k Da蛋白已经被证实了是一类细胞外膜孔道蛋白,而22 k Da蛋白(Omp22)的功能还不是很清楚。酵母双杂交技术是一种常用的而且有效地研究蛋白-蛋白相互作用的方法,已经广泛的应用到蛋白研究领域。本实验采用Cyto Tra P酵母双杂交系统,以Omp22为诱饵,从牛布鲁氏菌544A株感染巨噬细胞的c DNA文库中筛选与Omp22相互作用的蛋白,对布鲁氏菌的致病机理进行阐述,探索Omp22在布鲁氏菌致病中的作用。 展开更多
关键词 Omp22 巨噬细胞蛋白 互作
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科尔沁地区牛场布鲁氏菌病流行病学调查 被引量:1
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作者 李向阳 王学理 +5 位作者 刘凯 霍晓伟 武迎红 张显华 张嘉保 王景龙 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期403-408,共6页
以内蒙古科尔沁地区牛场布病疫情流行性病学检测资料为基础,重点进行布病的流行病学调查,了解布病流行情况。本研究采用虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、全乳环状试验(MRT)、补体结合试验(CFT)、竞争酶联免疫吸附试验(c ELI... 以内蒙古科尔沁地区牛场布病疫情流行性病学检测资料为基础,重点进行布病的流行病学调查,了解布病流行情况。本研究采用虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、全乳环状试验(MRT)、补体结合试验(CFT)、竞争酶联免疫吸附试验(c ELISA)、奶液间接酶联免疫吸附试验(i ELISA)方法进行筛选和确诊。结果表明,2009年共采集1360份牛血清,其中阳性血清57份,感染率为4.19%;2010年采集2175份牛血清,感染布病的牛共有129头,发病率为5.10%;2011年采集2340份牛血清,发病率为7.78%。2010年在通辽市牛布鲁氏菌病流行病学调查时共采集奶样1931份,经MRT和OIE i ELISA检测阳性率为24.39%。屠宰场牛布病总体阳性率为7.34%,而散户牛布病的总体阳性率为12.84%。通辽地区奶牛布病感染率呈现出明显的群间和区域间不均衡性。屠宰场由于检疫制度严格,阳性率明显低于散户。 展开更多
关键词 通辽市 布鲁氏菌 流行病学调查
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酵母双杂交系统在蛋白质相互作用中的应用 被引量:6
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作者 李向阳 张嘉保 +1 位作者 任文郅 刘殿峰 《中兽医医药杂志》 2011年第1期26-28,共3页
随着对多种重要生物的大规模基因组测序工作的完成,基因工程领域又迎来了崭新的时功能基因组时代,其任务是对基因组中包含的全部基因的功能进行认知。生物体系的运作与蛋白质之间的相互作用密不可分,发现和验证在生物体中相互作用的... 随着对多种重要生物的大规模基因组测序工作的完成,基因工程领域又迎来了崭新的时功能基因组时代,其任务是对基因组中包含的全部基因的功能进行认知。生物体系的运作与蛋白质之间的相互作用密不可分,发现和验证在生物体中相互作用的蛋白质与核酸、蛋白质与蛋白质是认识其生物学功能的第一步。 展开更多
关键词 蛋白质相互作用 酵母双杂交系统 功能基因组 应用 生物体系 生物学功能 测序工作 基因工程
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草原红牛肉用性状微卫星标记研究 被引量:3
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作者 李向阳 张嘉保 《中国牛业科学》 2006年第1期9-13,共5页
本研究选用草原红牛、草原红牛与利木赞牛杂交后代共计42头作为试验牛群体,以体尺、体重作为衡量其生长发育指标,进行肉牛肌肉度线性评分,并屠宰测定其肉用性能,利用SPSS软件分析了3个微卫星位点基因标记与生长性状、屠宰肉用、肌肉度... 本研究选用草原红牛、草原红牛与利木赞牛杂交后代共计42头作为试验牛群体,以体尺、体重作为衡量其生长发育指标,进行肉牛肌肉度线性评分,并屠宰测定其肉用性能,利用SPSS软件分析了3个微卫星位点基因标记与生长性状、屠宰肉用、肌肉度线性评分性状的关系。结果表明,IDVGA46等位基因D(211 bp)对3个肌肉度评分性状肩部、腰厚、大腿肌有负相关;等位基因B(205 bp)在腰厚方面有正相关。等位基因F(249 bp)对牛的胸深、坐骨端高等生长性状有正相关。BM1824等位基因C(211 bp)对腿围性状、净肉率和净肉重性状均有正相关。IDVGA2等位基因C(209 bp)对牛的肉用性能有负相关。 展开更多
关键词 草原红牛 肉用性状 微卫星标记 生长发育指标 肌肉度线性
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草原红牛微卫星DNA多态性的研究 被引量:1
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作者 李向阳 张嘉保 +1 位作者 赵玉民 胡成华 《中国草食动物》 2004年第3期3-5,共3页
为了更好地培育和改良肉用草原红牛 ,利用草原红牛、夏洛莱牛、西门塔尔牛、利木赞牛、蒙古牛基因组DNA ,用 8对微卫星引物进行PCR扩增 ,并将扩增产物置于 1 5 %琼脂糖电泳进行观察 ,如有所需的带则转入 8%聚丙烯酰胺变性凝胶 (PAGE)中... 为了更好地培育和改良肉用草原红牛 ,利用草原红牛、夏洛莱牛、西门塔尔牛、利木赞牛、蒙古牛基因组DNA ,用 8对微卫星引物进行PCR扩增 ,并将扩增产物置于 1 5 %琼脂糖电泳进行观察 ,如有所需的带则转入 8%聚丙烯酰胺变性凝胶 (PAGE)中电泳分离 ,绘制指纹图谱。 展开更多
关键词 草原红牛 DNA 多态性 微卫星标记 地方品种
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微卫星DNA标记及其在牛遗传育种研究中的应用 被引量:2
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作者 杨国忠 任文陟 +2 位作者 张嘉保 李向阳 张兆琴 《黑龙江动物繁殖》 2004年第1期13-16,共4页
就微卫星DNA标记特征、优点及其在构建牛基因图谱、牛群体遗传结构分析、寻找与生产性状位点相连锁的分子遗传标记、制作DNA指纹图,进行亲子鉴定和血缘控制、标记辅助选择等方面应用的综述。
关键词 微卫星DNA标记 遗传育种 基因图谱 群体遗传结构
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20世纪80、90年代北美华文文学主题研究 被引量:1
9
作者 杨青 《语文建设》 北大核心 2014年第04X期37-38,共2页
北美华文文学的创作主题在20世纪80、90年代出现了异于以往的特质,即内容上乡愁叙事的消解。以曹桂林、周励、查建英、张翎等为代表的新移民作家,他们的作品不再执着于浪子悲歌的乡愁式书写,而是转向了个人的人生体验与情感经历,并对人... 北美华文文学的创作主题在20世纪80、90年代出现了异于以往的特质,即内容上乡愁叙事的消解。以曹桂林、周励、查建英、张翎等为代表的新移民作家,他们的作品不再执着于浪子悲歌的乡愁式书写,而是转向了个人的人生体验与情感经历,并对人类生存困境进行的思考与探究。 展开更多
关键词 个人传奇的书写 “历史”的反思 在传奇与历史之间
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CD4^+T细胞表位预测及其应用
10
作者 李向阳 张嘉保 +1 位作者 何永聚 王景龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第17期10192-10193,共2页
目前,运用生物软件预测CD4+T细胞表位的技术越来越成熟,为表位疫苗的研究提供了有利的条件。对T细胞表位预测技术及其应用进行了综述。
关键词 生物信息学 表位预测 CD4+T细胞
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布鲁氏菌新型疫苗的构建表达和免疫原性检测研究
11
作者 李向阳 王学理 +4 位作者 刘凯 霍晓伟 武迎红 张显华 张嘉保 《安徽农业科学》 CAS 2013年第35期13483-13485,13491,共4页
[目的]探讨布鲁氏菌新型疫苗的构建表达和免疫原性检测。[方法]该研究所选的L7/L12核蛋白为公认的T细胞保护性抗原。它具有高度的保守性。通过试验,验证17.3 kDa蛋白是否具有保护作用。同时,对翻译起始因子3蛋白进行抗原预测。[结果]从... [目的]探讨布鲁氏菌新型疫苗的构建表达和免疫原性检测。[方法]该研究所选的L7/L12核蛋白为公认的T细胞保护性抗原。它具有高度的保守性。通过试验,验证17.3 kDa蛋白是否具有保护作用。同时,对翻译起始因子3蛋白进行抗原预测。[结果]从布鲁氏菌中提取其全基因组DNA,测序正确后分别克隆至原核表达载体PET32a(+)上,经诱导表达出相应的重组蛋白,WB鉴定后纯化待用;同时,编码基因克隆至真核表达载体PCDNA3.1(+)上,将重组质粒转染COS-7细胞后经WB证实重组质粒构建成功。将重组蛋白混合弗氏佐剂免疫动物,同时DNA疫苗以PUMVC1-mGM-CSF重组质粒为佐剂(各100μg/只)肌肉免疫动物;每15 d免疫1次,加强免疫3次后检测免疫应答指标,并且进行组间比较。采取ELISA法检测到较高滴度的特异性抗体,WB也证实特异性抗体的产生。[结论]该研究成功构建了布鲁氏菌基因工程疫苗,在国内尚属首次。利用流式细胞仪的分型技术和ELISPOT法评价布鲁氏菌疫苗的细胞免疫指标,将促进我国兽用疫苗及相关产品的实验室质控标准方法的建立和发展,为其临床应用奠定基础。 展开更多
关键词 布鲁氏菌新型疫苗 表达 免疫原性
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流产型布鲁氏菌Omp22基因酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定
12
作者 李向阳 张嘉保 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第6期83-86,共4页
通过PCR获得流产型布鲁氏菌Omp22基因的编码区,将其克隆到pSOS载体中,构建酵母双杂交系统的诱饵载体pSOS-Omp22。测序正确后,将重组质粒导入cdc25H检测其表达产物对酵母细胞有无毒性和自激活作用,且在酵母细胞中定位是否正确。结果表明... 通过PCR获得流产型布鲁氏菌Omp22基因的编码区,将其克隆到pSOS载体中,构建酵母双杂交系统的诱饵载体pSOS-Omp22。测序正确后,将重组质粒导入cdc25H检测其表达产物对酵母细胞有无毒性和自激活作用,且在酵母细胞中定位是否正确。结果表明,获得了正确的流产型布鲁氏菌Omp22基因编码区,并成功克隆到pSOS诱饵载体中,且转化有诱饵载体的cdc25H在SD/Glucose(-L)营养缺陷平板上生长良好,说明表达产物对酵母细胞无毒性,对报告基因也无自激活作用且其定位正确。表明pSOS-Omp22可应用在酵母双杂交系统中,用于寻找巨噬细胞cDNA文库中与Omp22相互作用的蛋白质。 展开更多
关键词 酵母双杂交系统 Omp22基因 诱饵载体 自激活
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电影《可可西里》的死亡叙事与人性张扬
13
作者 杨青 《电影文学》 北大核心 2013年第22期78-79,共2页
电影《可可西里》由一个真实的事件改编而成,是以一个记者从第三者的眼光对浴血保护藏羚羊的特殊群体队伍的描述,直观体现了血性汉子与盗猎者之间的惨烈斗争,这部电影在内容和形式上完美结合,具有独特的魅力和艺术感染力。本文通过分析... 电影《可可西里》由一个真实的事件改编而成,是以一个记者从第三者的眼光对浴血保护藏羚羊的特殊群体队伍的描述,直观体现了血性汉子与盗猎者之间的惨烈斗争,这部电影在内容和形式上完美结合,具有独特的魅力和艺术感染力。本文通过分析电影中的死亡叙事及人性的张扬来探讨《可可西里》的艺术魅力,同时对蕴涵其中的价值观进行了阐述,在对影片中的艺术手法进行阐述的同时,突出对人性的思考以及对人的价值的思考。 展开更多
关键词 《可可西里》 生命 死亡 叙事
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20世纪中后期台湾留美作家群创作中的乡愁叙事
14
作者 杨青 《语文建设》 北大核心 2013年第12X期37-38,共2页
20世纪中后期台湾留美作家群是一个独特的群体,以白先勇、聂华玲、於梨华为代表,他们的作品多表现了被"放逐"的游子精神漂泊的悲歌,饱含浓郁的乡愁叙事。
关键词 乡愁故国想象身份探寻
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